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编号:11914946
肠出血性大肠杆菌转移紧密黏附素受体的表达及其活性鉴定
http://www.100md.com 2010年5月1日 肖 乐 王 琴 蔡 昆
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    肖乐 王琴 蔡昆 屠伟 侯晓军 李涛 王慧 军事医学科学院微生物流行病研究所 病原微生物生物安全国家重点实验室;

    【摘要】目的:在原核表达基因工程菌中实现肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转移紧密黏附素受体(Translocated Intim in Receptor,Tir)蛋白的高效表达,并对其活性进行初步鉴定。方法:采用PCR方法从EHEC O157:H7基因组中调取tir基因,插入pEASY-T1克隆载体。克隆质粒测序鉴定后,采用NdeⅠ、XhoⅠ限制性核酸内切酶双酶切pEASY-T1-tir质粒获得tir基因,连接同样经过双酶切的pET-22b(+)。表达质粒转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测相对分子质量,Western blotting验证抗原活性。荧光显微镜观察蛋白是否具有嵌入细胞膜的活性。结果:PCR扩增得到1686bp的目的片段。构建的原核表达质粒pET-22b(+)-tir经酶切鉴定及测序与预期序列一致。目的蛋白以裂解上清形式表达,表达量约3mg/ml。经镍柱纯化后纯度达90%以上。重组表达的Tir具有嵌入细胞膜的生物学功能。结论:成功表达了具有生物活性的重组Tir蛋白,为Tir的功能研究奠定基础。

    【关键词】 肠出血性大肠杆菌 Tir 表达 活性鉴定

    【分类号】Q78

    前言肠出血性大肠杆菌EHEC O157:H7于1982年在美国首次报道[1],它同早先发现的致病性大肠杆菌EPEC同样能引起人体机能障碍。但EHEC的危害相对更大,感染O157:H7的人会出现严重腹泻、血便、发烧、腹痛等病症,病情严重者还会发生溶血性尿毒综合征(HUS),从而导致肾衰竭并发症,甚
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     前言

    肠出血性大肠杆菌EHEC 0157:H7于1982年在美国首次报道,它同早先发现的致病性大肠杆菌EPEC同样能引起人体机能障碍。但EHEC的危害相对更大,感染0157:H7的人会出现严重腹泻、血便、发烧、腹痛等病症,病情严重者还会发生溶血性尿毒综合征(HUS),从而导致肾衰竭并发症,甚至死亡。

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