HPLC检测肠灌流模型中PMP衍生化葡寡糖含量的方法学建立
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李倩 郭振军 李宇华 伍焕杰 孙阳 邓雅婷 张敏 刘莉 第四军医大学药学系;
【摘要】目的:建立肠灌流模型中1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化葡寡糖含量的检测方法,并进行方法学考察。方法:采用HPLC法测定,色谱条件为,色谱柱:phenomenexC18(250×4.60mm,5μm);流动相:100mMNaAc/乙腈(梯度洗脱);流速:1.0mL·min-1;紫外检测波长245nm;进样量:20μL;柱温:40℃。结果:PMP衍生化葡寡糖在此色谱条件下获得良好分离,肠灌流液、血浆样品及酚红对10种化合物的检测均无影响。结论:该方法准确可靠,重复性良好,为寡糖的吸收研究提供了技术支持。
【关键词】 PMP衍生化葡寡糖 HPLC 方法学
【基金】国家科技重大专项(2009ZX09103-113)
【分类号】R927.1
前言研究发现,寡糖具有降血糖[1]、抗病毒[2]、抗肿瘤[3]、抗凝血、免疫调节[4]等多种生物活性。由于寡糖结构复杂,既无强的紫外吸收,又无荧光基团,检测比较困难,使得寡糖吸收机制的研究受到很大限制。目前糖类研究中主要采用紫外衍生化[5]、荧光素类标记[6-7]、放射性同位素
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研究发现，寡糖具有降血糖、抗病毒、抗肿瘤、抗凝血、免疫调节等多种生物活性。由于寡糖结构复杂，既无强的紫外吸收，又无荧光基团，检测比较困难，使得寡糖吸收机制的研究受到很大限制。目前糖类研究中主要采用紫外衍生化、荧光素类标记、放射性同位素示踪等标记手段进行定性、定量分析。衍生化法发展较早、灵敏度高，但稳定性较差；荧光素标记法灵敏度极高，缺点是荧光淬灭迅速、标记过程复杂；放射性同位素标记率高、半衰期长，但其缺点是实验条件要求高，极易造成污染。
其中以糖类的衍生化技术最为成熟，经典衍生化试剂1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)与糖分子以1:2标记后，得到的衍生物具有紫外吸收特性，可以用HPLC紫外检测法检测。本实验对PMP衍生化葡寡糖进行HPLC方法学考察，为衍生化寡糖在体内吸收模型中的研究提供依据。
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