葡激酶在毕赤酵母中的表达及纯化(2)
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2.5 诱导表达及SDS-PAGE电泳分析 挑取重组体单菌落接种于BMGY培养基中，30℃震荡培养过夜，A600约为5.0，离心收集菌体，以BMMY培养基重悬菌体至，A600为2.0后诱导表达，每隔24 h补加甲醇至终浓度1%，在0、24、36、72，等时间点各取1 ml发酵液，离心收集上清，12%的SDS-PAGE凝胶检测重组蛋白表达结果。
2.6 表达产物的纯化制备
2.6.1 超滤浓缩脱盐 将发酵离心所获的上清，经Millipore超滤装置浓缩，脱去无机盐。
2.6.2 DEAE-Sepharose FF 用平衡缓冲液(20 mM Tris-Hcl pH8.0)充分平衡DEAE-Sepharose层析柱，将浓缩的蛋白以2 ml/min的流速上样，上样结束后以起始缓冲液洗出未结合的蛋白，然后进行线性梯度洗脱，洗脱梯度为含0→1 mol/l NaCl的平衡缓冲液。收集目的蛋白。
2.6.3 Q-Sepharose FF 用平衡缓冲液(20 mM Tris-Hcl pH8.0)充分平衡Q-Sepharose Fast Flow层析柱，将2.6.2步收集的目的蛋白对平衡缓冲液透析后进样，上样结束后以起始缓冲液洗出未结合的蛋白，然后进行线性梯度洗脱，洗脱梯度为含0→1 mol/l NaCl的平衡缓冲液 ......
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