葛根素预处理在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的抗氧化作用(1)
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【摘要】 目的 观察葛根素预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的防护作用。方法 雄性SD大鼠，建立肝脏缺血再灌注模型(HIR)。随机分为假手术组、HIR组和HIR-葛根素预处理组。黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸比色法分别测定肝组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化，同时分析NO含量的改变。结果 肝脏缺血再灌注损伤后，与假手术组比较，肝组织中MDA活性及NO含量均显著增加，而SOD活性显著降低；经40 mg/kg剂量的葛根素预处理7 d后，与模型组相比，肝组织中MDA活性及NO含量显著降低，而SOD活性增高。结论 葛根素预处理对大鼠缺血再灌注肝脏损伤有一定的保护作用。
【关键词】 葛根素；缺血再灌注；肝脏；抗氧化
The antioxidation effect of kakkonein on hepatic ischemia reperfusion injury in rats
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LUO Guang-qiang,Xi’an 630 Hospital, Xi’an, Shanxi 710000,China
【Abstract】 Objective To investigate the antioxidation effect of kakkonein on hepatic ischemia reperfusion injury in rats. Methods Male Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups: pseudo-operation normal control group， hepatic ischemia reperfusion injury model group, kakkonein group. After hepatic ischemia and reperfusion, to analysis the level of MDA, SOD and NO activity. Results After hepatic ischemia reperfusion, the MDA and NO level increased, and the SOD activity decreased obviously comparing with the normal group; Comparing to the hepatic ischemia reperfusion injury model group, the MDA and NO level decreased, and the SOD activity increased. Conclusions The apigenin have a prominent protective effect on hepatic ischemia reperfusion injury in rats.
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【Key words】Kakkonein; Ischemia reperfusion; Liver; Antioxidation
肝脏缺血再灌注损伤是肝脏缺血后重获血流灌注或氧供后，引起或加重肝脏缺血缺氧造成的损伤，是临床肝脏手术过程中常见的一种病理生理变化，可产生氧自由基，引起钙超载等改变，损伤肝细胞超微结构，影响肝脏的功能[1]。因此，如何减轻或防治肝脏缺血再灌注损伤的程度，是目前临床肝脏手术中研究的热点。NO能与含Fe2+血红素基团的蛋白质相结合，产生较稳定的亚硝酰基血红素蛋白复合物。NO与超氧自由基反应生成的过氧亚硝酸根离子，能使各种含铁-硫酶失活，阻断细胞内能量合成及DNA复制，影响细胞的线粒体功能，产生细胞毒性作用[2]。葛根素是一种天然多酚类化合物，结构类似雌二醇，具有某些雌激素样作用，研究发现它是一种天然的抗氧化剂，具有明显的抗氧化作用，可消除体内过多的自由基，保护细胞膜的结构[3]。本实验通过建立大鼠肝脏局部缺血再灌注模型，经葛根素预处理，观察肝组织中丙二醛(MDA) 含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性及NO含量的改变，从而探讨葛根素对大鼠缺血再灌注肝脏损伤的保护作用。
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1资料与方法
1.1 资料 雄性SD大鼠，体质量190～210 g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供；MDA、SOD和NO试剂盒由南京建成生物工程研究所提供；葛根素购自中国药品生物制品检定所。
1.2 动物分组与模型建立 大鼠肝脏缺血再灌注模型建立方法[4]：实验动物，术前24 h禁食，自由饮水，乙醚吸入麻醉，腹正中切口，暴露十二指肠韧带及肝门部，分别夹闭肝动脉和门静脉，造成70%肝脏缺血，70 min后去除血管夹，恢复肝脏血流。
实验动物随机分为3组：① 假手术组，大鼠给予开腹及暴露肝蒂处理，不阻断肝脏血流；② 模型组，夹闭肝动脉和门静脉，缺血70 min后，再灌注120 min；③ 葛根素预处理组，术前7 d，每天口服灌胃40 mg/kg的葛根素，按上述方法建立大鼠肝脏缺血再灌注模型，阻断肝动脉和门静脉，缺血70 min后，再灌注120 min。
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1.3 肝脏组织中MDA、SOD活性及NO含量的变化 取出肝脏组织，冰浴中操作，加入1 mol/L的HCl，碾磨制成组织匀浆，低温离心机，离心15 min，3000转/min，取上清液。参照按试剂盒说明，分别用黄嘌呤氧化酶法测定SOD、硫代巴比妥酸比色法测定MDA的活性变化，通过硝酸还原酶法检测的NO含量。
1.4 统计学方法 计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验，采用SPSS 11.0软件包进行统计学处理。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 肝组织中NO含量的变化 大鼠肝脏缺血再灌注后，通过硝酸还原酶法检测的NO含量，肝组织中NO含量显著增加；大鼠经40 mg/kg剂量的葛根素预处理7 d后，同缺血再灌注组动物相比，NO含量降低(表1)。
2.2 肝组织中SOD、MDA活性的变化 大鼠缺血再灌注后，通过黄嘌呤氧化酶法测定，肝组织中SOD活性显著降低；硫代巴比妥酸比色法测定，肝组织中MDA含量显著增加；大鼠经40 mg/kg剂量的葛根素预处理7 d后，同缺血再灌注组动物相比，SOD活性明显增加，MDA含量降低(图1)。
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3 讨论
目前的研究表明，氧自由基和脂质过氧化在肝脏缺血再灌注损伤的过程中起着重要的作用。在肝脏缺血再灌注过程中，发生超氧化物阴离子自由基反应，可产生大量氧自由基，导致脂质过氧化反应，造成肝细胞肿胀、变性、坏死[5]。MDA能反映细胞膜脂质过氧化的程度，间接反映出细胞损伤的程度。氧自由基清除剂SOD，可以间接的反映体内氧自由基水平及脂质过氧化的损伤程度[6]。NO与含血红素的鸟苷酸环化酶(GC)结合，激活的GC使细胞产生大量环磷酸鸟苷(cGMP)，发挥生物效应。NO与超氧自由基反应，生成过氧亚硝酸根离子，可以造成脑细胞膜脂质过氧化，ATP酶活性降低，细胞蛋白质损伤[7]。葛根素是一种异黄酮衍生物，属植物雌激素类，在4位和7位各有一个羟基，4位羟基可与雌激素受体(ER)相结合，可以增强雌激素促甲状腺释放降钙素的作用，具有抗自由基损伤、抑制血小板活化与聚集、扩张心血管、降低心肌耗氧、改善心肌代谢和心脏功能等众多药理作用，对内皮细胞也具有一定的保护作用[8]。, 百拇医药(雒光强)