1.4 观察指标及测定方法

    1.4.1 RT-PCR测心肌Bcl-2和Bax mRNA表达

    将大鼠心脏剪碎，加液氮研磨，用Trizol试剂提取心肌总RNA，按一步法试剂盒步骤进行RT-PCR。Bcl-2引物为：上游5'-GCTACGAGTGGGATACTGGAG-3'，下游5'-GACAGCCAGGAGAAATCAAAC-3'，产物长度为559bp，反应条件为：50℃逆转录30 min；94℃预变性2 min；94℃变性30 s，58℃退火1 min，72℃延伸45 s，扩增30个循环；72℃延伸10 min。 Bax引物为：上游5'-CATCCAGGATCGAGCAGAGAG-3'，下游5'-AGCAAAGTAGAAGAGGGCAACC-3'，产物长度为262 bp，反应条件为：50℃逆转录30 min；94℃预变性2 min；94℃变性30 s，52℃退火50 s，72℃延伸45 s，扩增30个循环；72℃延伸10 min。 退火温度52℃；内参照GAPDH上游引物： 5'-CCTTCATTGACCTCAACTACATGG-3'，下游引物:5'-GCAGTGATGGCATDDAC TGTGGT-3'，扩增片段长度442 bp，反应条件为：50℃逆转录30 min；94℃预变性2 min；94℃变性40 s，58℃退火1 min，72℃延伸1 min，扩增30个循环；72℃延伸10 min ......