金龙胶囊对肺腺癌A549生长能力的影响的研究
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【摘要】 目的 研究金龙胶囊对肺腺癌A549生长能力的影响。方法 体外培养A549细胞,采用细胞计数法绘制连续生长曲线和TUNEL法检查凋亡指数,观察不同剂量金龙胶囊对A549细胞生长的影响治疗。结果 给药组生长曲线明显较对照组平缓,并与给药剂量呈显著相关性,给药组凋亡指数明显高于对照组,凋亡指数与给药剂量呈正相关。结论 金龙胶囊对肺癌A549细胞的增殖能力有显著抑制作用并能诱导肿瘤细胞凋亡,作用呈剂量相关性。
【关键词】 金龙胶囊; 肺腺癌;A549
【Abstract】 Objective To study the effect of growth capacity on lung adenocarcinoma A549 of Jinlong Capsule.Methods A549 cells were culture in vivo,cell growth was monitored based on the cell counting on different culture days and check the apoptotic index by TUNEL.To observe the JLC of different doses on the growth of A549 cells were treaated.Results The growth curve of Treatment group was significantly smooth than the control group and the AI of treatment group was significantly higher.Both of them wre positively correlated with the dosage.Conclusion JLC have a great effect of inhibit the proliferation and induce apoptosis of tumor cells on the effects were dose related.
【Key words】Jinlong Gapsule; Lung adenocarcinoma; A549
作者单位:510288广州,中山大学孙逸仙纪念医院药学部
肺癌是我国第一大癌,其治疗方法多样,但其中不少治疗方法存在着不同程度的副作用,中医药在预防不良反应方面有明显优势。金龙胶囊(JinLong Capsule,JCL)由鲜守宫、鲜金钱、白花蛇等动物药组成,具有中医整体调节、扶正荡邪、滋阴、破瘀散结、解郁通络及中药“生者尤良”的优点[1]。经多年治疗肿瘤的临床经验及实验室研究表明,其对多种肿瘤都有良好的治疗作用。大量临床研究表明,金龙胶囊具有抑制肿瘤生长、抑制肿瘤复发转移、合并放化疗解毒增效,肿瘤镇痛,增强机体免疫功能,增强机体抗病能力等功效。本实验拟采用肺腺癌A549进行JCL抑制肺癌细胞生长研究[2]。
1 材料与方法
1.1 药物制备 JLC金龙胶囊是我国第一个正式批准使用的鲜动物药制剂,为守宫、蕲蛇等鲜动物制剂,由北京建业公司提供。其呈黄色粉末状,易潮解,每次临用前用蒸馏水配成混悬液备用。
1.2 细胞培养 人肺腺癌细胞株A549(中山医科大学动物实验中心提供)。实验设置4组:对照组(A)、低剂量组(B)、中剂量组(C)和高剂量组(D)。将液氮保存的A549细胞冻存管放入37℃恒温箱中,融化后低速离心,去上清,PBS液漂洗一次,接种于培养瓶中,使用10%胎牛血清的RPMI 1640培养基,放置于5%CO2,恒温37℃培养箱中培养,当细胞生长达到对数生长期后,取对数生长细胞进行实验。将细胞悬液调整为了5×105/ml,接种于24孔培养板,每孔2 ml。实验各组含不同浓度的JCL(低剂量组0.01 mg/ml,中剂量组0.02 mg/ml,高剂量组0.04 mg/ml),对照组不加药,每组设6个平行孔。
1.3 细胞生长曲线绘制 采用细胞计数法与给药第1~7天每日检测各组细胞浓度。每孔重复检测三个样本,取均数记录为每天的数据。
1.4 凋亡指数检测 采用原位末端标记法(TUNEL法),检测肿瘤细胞凋亡,检测程序按TUNEL试剂盒说明书进行,用磷酸盐缓冲液(PBS)代替TUNEL反应液作阴性对照。
1.5 统计学方法 实验数据采用均数±标准差(x±s)表示,组间显著性检验用两组资料的t检验。
2 结果
细胞生长曲线(图1、2):给药组生长曲线明显较对照组平缓,并与给药剂量呈显著相关性。
A549细胞体外培养
各组生长曲线比较
凋亡指数(AI)=(凋亡细胞数/瘤细胞总数)×100 %。凋亡细胞形态要符合下述特点:①单个细胞;②胞质呈桔红色且收缩;③胞核致密深染色或为核碎片;④周围无炎症反应及坏死。JLC对A459细胞凋亡指数的影响从实验结束后的可见:给药组凋亡指数明显高于对照组,凋亡指数与给药剂量呈正相关,差异有统计学意义见表1。
通过以上结果发现,JLC对肺癌A549细胞的增殖能力有显著抑制作用并能诱导肿瘤细胞凋亡,作用呈剂量相关性。
3 讨论
金龙胶囊是我国第一个正式批准使用的鲜动物药制剂,以守宫、白花蛇等为原料,经超低温破碎及冻融处理,使细胞内各种有效成分充分释放,并在低温下迅速进行生化技术处理而制成。临床广泛用于肺癌、乳腺癌、肝癌、宫颈癌、白血病等的治疗[3]。金龙胶囊的抗癌原理,目前认为是使Th 细胞上调,Ts细胞下调,提高抗癌免疫力,其功效为补益气血,破瘀散结,解毒通络[4]。
表1
JLC对A549细胞凋亡指数的影响
GroupAI(x±s)P
A2.91±0.79<0.01
B5.63±0.68<0.05
C7.19±0.74<0.05
D9.11±0.69-
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