依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的影响
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2.5 统计学方法 实验数据以均数±标准差(x±s)表示，各组之间比较用方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。
3 结果
3.1 MDA含量、SOD活力 生理盐水组及依达拉奉治疗组大鼠脑组织匀浆中MDA含量较假手术组显著增高(P< 0.01)，而SOD活力明显低于假手术组(P<0.01)，同时依达拉奉治疗组脑组织中MDA含量显著低于生理盐水组(P< 0.05)，而SOD活力显著高于生理盐水组(P< 0.05)，详见表1。
3.2 免疫组化 术后48 h梗死灶周围脑组织可见caspase-3免疫阳性细胞，假手术组也可见少量caspase-3免疫阳性细胞，生理盐水组caspase-3免疫阳性细胞显著增多，依达拉奉治疗组caspase-3免疫阳性细胞较生理盐水组显著减少(P<0.05)。
3.3 脑组织切片细胞凋亡数测定 TUNEL染色发现凋亡细胞形态学特征示胞体缩小，染色质凝集，密度增高，呈块状或颗粒状，胞核中棕色颗粒。统计结果显示，假手术组凋亡细胞数(个/40倍物镜视野)显著低于生理盐水组和依达拉奉治疗组(P<0.01)，依达拉奉治疗组凋亡细胞数(个/40倍物镜视野)显著低于生理盐水组(P<0.05)。
4 讨论
近年研究证实,氧自由基和活性氧在再灌注损伤中起主要作用。在缺血再灌注损伤过程中氧自由基(OFR)如:超氧阴离子(O2-)、过氧化氢(H2O2)等呈爆发性增加[2]，MDA是脂质过氧化的重要终产物之一，反映了机体细胞受自由基攻击的严重程度；SOD是机体抗氧化损伤防御体系中最重要的抗氧化酶之一，反映了机体清除氧自由基的能力；正常情况下机体内自由基的产生和清除保持着动态平衡，体内SOD活性、MDA含量的变化可以反映机体清除自由基和抗氧化损伤的能力[3]。缺血再灌注时产生的氧自由基可导致脂质过氧化，损伤生物膜(因含脂质双分子结构)引发脂质过氧化反应从而改变它们的功能，细胞膜通透性增强，线粒体肿胀破裂并诱发细胞凋亡[4]；神经细胞凋亡是脑缺血/再灌注损伤的重要环节，是脑缺血再灌注后迟发性神经细胞死亡(delayed neuronal death，DND)的主要形式[5]，因此如果能阻止凋亡的发展，就有可能减轻脑缺血时脑损伤程度，缩小梗死范围。现已明确，细胞凋亡的发生是由基因调控的过程，目前认为细胞凋亡是细胞在各种死亡信号刺激后发生的一系列级联激活的主动性细胞死亡过程。caspase家族在诱导细胞凋亡的分子机制中起着关键作用，是多条凋亡通路的汇聚点，是执行凋亡的最终途径。其中caspase-3被认为是凋亡的关键蛋白酶，一旦被激活，即发生下游的级联反应,使凋亡不可避免，正常情况下，胞质中的caspase-3以无活性的酶原形存在,细胞凋亡信号的出现可导致caspase-3在多种蛋白水解酶的作用下，发生裂解而活化。通过酶解灭活凋亡抑制物、酶解细胞外基质及骨架蛋白、裂解DNA修复相关分子等使细胞解体。因此如能有效抑制caspase-3的活性则可减缓细胞的凋亡。
依达拉奉是一种自由基清除剂,具有自由基清除和抑制脂质过氧化的作用,可以抑制脑细胞(血管内皮细胞和神经细胞)的过氧化作用,本研究旨在探讨依达拉奉对大鼠缺血再灌注损伤后细胞凋亡的抑制作用及其机制，结果发现，脑缺血再灌注后大鼠脑组织MDA含量比假手术组显著升高，SOD活力显著下降，应用依达拉奉治疗后,依达拉奉组比生理盐水组MDA含量明显减少,SOD活性明显回升,这说明依达拉奉有明显抗脂质过氧化及清除自由基的作用,与文献报道相符[6]，依达拉奉治疗组神经元凋亡数比生理盐水组显著下降，同时依达拉奉治疗组的caspase-3表达水平比生理盐水组显著下降，这说明依达拉奉能明显抗脂质过氧化并能有效对抗神经元凋亡。
参 考 文 献
[1] Longa EZ, Weinstein PK, carison S, et alReversible middle cerebral artery occlusion without craniotomy in rat. Stroke, 1994, 265:1883-1889.
[2] Jain KK. Neuroprotectionincerebrovascular disease. Expert Opin Investig Drugs, 2000, 9(4): 695-711.
[3] Palmeira CM, Moreno AJ, Madeira VM. Thiol metabolism is altered by t he herbicides paraquat, dinose band 2, 4-D : A study in isolated hepatocytes ......
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