内镜下lugol液染色联合p53蛋白检测对早期食管癌的诊断价值(2)
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1.3.2 免疫组织化学法 将10%体积福尔马林固定、石蜡包埋的组织制成4~5 μm切片,常规脱蜡,浸入0.01 mol/L、pH为6.0的枸橼酸盐缓冲液内,微波炉抗原修复10 min,温度为92℃~98℃。用SP法进行免疫组织化学染色。p53试剂盒系北京中杉生物试剂公司提供的Zymed公司产品。
1.3.3 结果判定 参照文献于高倍镜(×400)下随机取10个视野共计数600个细胞中的p53蛋白阳性表达的百分数。结果判断:未着色的细胞定为阴性细胞,胞核呈棕黄色或黄色的定为阳性细胞。每次实验均设阳性和阴性对照。以已知阳性切片作阳性对照,阴性对照用PBS代替一抗。
1.4 统计学方法 统计分析采用SPSS 12.0软件,两组之间进行χ2检验,多个样本之间的比较。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
在60例染色组中不染色或淡染色共38例,并取活检(见表1),活检发现早期食管癌12例(20.00%),中重度异型增生11例(18.33%),轻度不典型增生12例,正常鳞状上皮4例;对照组共取活检21例,发现早期食管癌5例(8.33%),中重度异型增生6例(10.00%),轻度不典型增生5例,正常鳞状上皮5例。未染色组食管癌内镜诊断率为8.33%(5/60),染色组内镜诊断率为20.00%(12/60)。两组食管癌诊断率的差异有统计学意义(P<0.05)。在所有59处活检组织中,p53蛋白阳性在重度不典型增生及早期鳞癌组共18例(30.51%,18/59),而在轻度不典型增生或正常鳞状上皮仅有3例(10.71%,3/28),p53蛋白在中重度不典型增生和鳞癌组表达明显高于轻度不典型增生或正常鳞状上皮组(P<0.05),有统计学意义。
表1
120例组织内镜观察及p53蛋白检测结果(例)
组别染色组非染色组p53阳性表达P值
正常鳞状上皮450
轻度异型增生1253(10.71%)
中重度异型增生1067
早期食管鳞癌12511(30.51%)P<0.05
注:中重度不典型增生~鳞癌组p53蛋白阳性表达率与轻度~正常鳞状上皮组相比,P<0.05
3 讨论
我国是食管癌病死率最高的国家,早期诊断与治疗和患者预后密切相关,有报道显示早期食管癌患者术后5 年生存率可达86%以上[2],因此提高早期食管癌的检出率、早期治疗是降低食管癌病死率的有效途径。
Lugol液对食管癌及癌前病变的不着色或淡着色,而正常食管黏膜呈棕黄色,其应用于内镜染色可以提高内镜医生取材的准确率及早期食管癌诊断率[3]。本研究显示未染色组食管癌内镜诊断率为8.33%(5/60),染色后内镜诊断率为16.67%(10/60)。两组食管癌诊断率的差异有统计学意义(P<0.05)。上述研究表明通过Lugol液染色,提高了内镜医生取材的准确率,但是不能预测食管癌高危人群(例如中重度不典型增生)发展为食管癌的风险,因此对于食管癌前病变发展成食管癌的预测上存在一些尚未解决的问题。
传统病理只能区分正常组织和非正常组织,但不能区分癌和癌前病变,此外也不能精确判断那些有异型性改变的组织的恶性程度。而从分子生物学角度来看,食管鳞状上皮细胞的癌变过程涉及到多种癌基因和抑癌基因的变化,可能与其恶性转化的基因有p53、APC、cyclinD、端粒酶等有关[4,5]。有许多研究表明p53基因的突变可追溯到食管癌变过程的早期阶段。Fléjou JF等[6,7]报告在食管上皮轻度增生的组织中就有p53蛋白的轻度异常表达,且随着不典型增生的程度加重,p53蛋白聚集的频率也逐渐加重,原位癌时p53的阳性检出率达70%,而正常组织中极少有p53蛋白的积聚。笔者认为p53的改变与食管鳞癌的发生有关,它的阳性表达不仅对食管鳞癌的发生发展起重要作用,而且发生于食管癌变的早期阶段,因此已成为消化道癌发生的早期检测指标[8,9]。因此p53蛋白表达有可能作为一种生物标记,用来判断恶性肿瘤发生的危险性。在本研究中发现,p53蛋白在中重度不典型增生和鳞癌组表达明显高于轻度不典型增生或正常鳞状上皮组(P<0.01),有统计学意义。因此,在食管鳞状上皮细胞p53蛋白的表达状况可以作为反映细胞状态的一个生物指标,用来估计高危人群患食管癌的风险性。
综上所述,本研究认为:通过染色内镜对高危易感人群进行筛检,对上述检查结果阳性患者行内镜下取活组织病理检查,同时进行p53蛋白分析,染色内镜提高了医生取材的准确率,p53蛋白分析提高了对中重度不典型增生患者患食管癌的风险估计,对于食管癌高危患者预后及治疗方式的选择具有重要意义,传统方法与分子生物学相结合可以提高早期食管癌的诊断率。
参考文献
[1] 梁苑苑,陆士新,郭永军,等.林县食管癌中P53基因突变与P53高表达相关性的研究.中华肿瘤杂志,1995,17(6):412 414.
[2] WANG GQ,JIAO GG,CHANG FB,et al.Long term results of operation for 420 patients with early squamous cell esophageal carcinoma discovered by screening.Ann Thorac Surg,2004,77(5):1740 1744.
[3] 张月明,王贵齐,等.早期食管癌的内镜诊断与治疗进展.中国消化内镜,2008,2(2):21 29 ......
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