胸腺切除对重症肌无力患者外周血淋巴细胞Fas表达及T淋巴细胞亚群的影响(2)
 |
| 第1页 |
参见附件(2249KB，3页)。
1 材料与方法
1.1 研究对象 MG患者组17例,为2007年10月至2009年12月我院神经内科住院及门诊患者,根据典型临床表现、新斯的明试验及部分患者神经重复电刺激检查确诊。其中男6例,女11 例,年龄22~76岁,平均(46.47±14.35)岁,病程8个月~20年,平均(6.43±5.15)年。Osserman分型:I型4例(23.5%),IIA型4例(23.5%),IIB型6例(35.3%),IV型3例(17.6%)。其中11例患者行胸腺切除术治疗,术后病理:胸腺增生7例(63.6%),胸腺瘤2例(18.2%),胸腺脂肪瘤1例(9.1%),胸腺多房囊肿1例(9.1%)。所有患者均不伴有感染性疾病及其他免疫性疾病,采血前3个月内未接受过免疫抑制剂治疗。正常对照组13例,为健康自愿献血者,男4例,女9例,平均年龄(40.23±11.05)岁。本研究得到中山大学附属第五医院伦理委员会批准,取得了受试对象的知情同意。
1.2 主要试剂 藻红蛋白标记小鼠抗人Fas/CD95单克隆抗体(Fas/CD95-PE)、多甲藻黄素叶绿素蛋白标记小鼠抗人CD4单克隆抗体(CD4-PerCP)、异硫氰酸荧光素标记小鼠抗人CD8单克隆抗体(CD8-FITC)、同种型荧光染色免疫球蛋白(小鼠抗人IgG1-PE、IgG1-PerCP、IgG1-FITC),均为美国Becton Dickinson公司产品,购自广州流式生物科技有限公司。
1.3 流式细胞术(Flow cytometry analysis) 取MG患者及对照组新鲜肝素钠抗凝血100 ul,加入3种小鼠抗人荧光素标记的单克隆抗体Fas/CD95-PE、CD4-PerCP、CD8-FITC各20 ul,混匀后室温避光孵育15~20 min。加入100 ul溶血素(BD Bioscience,USA)混匀,室温避光静置10 min,离心10 min(1000 r//min)后去上清。PBS洗涤2次后,加入1%多聚甲醛适量固定细胞,避光放置10 min,以同种型荧光染色免疫球蛋白(小鼠抗人IgG1-PE,IgG1-PerCP,IgG1-FITC)作为阴性对照,用FACScan型流式细胞仪(Becton Dickinson,USA)进行检测,使用Cell Quest软件分析PBL表面CD4、CD8及Fas抗原的表达。
1.4 统计学方法 使用SPSS 16.0软件。正态性检验采用one sample Kolmogorov-Smirnov test,正态分布计量资料用均数±标准差(x±s)描述,组间差异比较采用one-way ANOVA方差分析,多组均数比较采用SNK及LSD法,双侧检验水准α=0.05。P<0.0为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 MG患者与对照组PBL表面CD4、CD8分子的表达 与对照组相比,无行胸腺切除术组MG患者PBL中CD4-CD8+细胞比例升高,CD4-CD8-细胞比例下降,差异有统计学意义(P=0.028及0.047);行胸腺切除术组CD4-CD8+细胞比例较无行胸腺切除术组下降,差异有统计学意义(P=0.019)。结果见表1。
表1
MG患者与对照组外周血淋巴细胞表面CD4、CD8分子的表达(x±s,%)
组别例数CD4+CD8-CD4-CD8+CD4+CD8+CD4-CD8-CD4+/CD8+
无行胸腺切除术MG患者630.372±6.49036.733±11.5840.392±0.19232.422±12.0930.928±0.421
行胸腺切除术MG患者1136.070±7.85325.248±7.6200.576±0.51238.108±7.1061.651±0.962
对照组1330.285±6.63526.311±8.9990.448±0.33342.957±11.5451.292±0.510
三组比较P值0.1200.044*0.5990.1250.137
F值2.3003.5090.5232.2462.143
两两比较P值 P10.1250.019*0.3630.2840.052
P20.9800.028*0.7740.047*0.302
P30.0560.7770.4330.2580.222
注:P1为无行胸腺切除术MG组与行胸腺切除术MG组比较P值;P2为无行胸腺切除术MG组与对照组比较P值;P3为行胸腺切除术MG组与对照组比较P值。*P<0.05
2.2 MG患者与对照组PBL表面Fas抗原的表达 无行胸腺切除术组MG患者PBL中Fas+、CD8+Fas+细胞比例以及行胸腺切除术组Fas+细胞比例均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。行胸腺切除术组MG患者PBL中Fas+、CD4+Fas+及CD8+Fas+细胞比例低于无行胸腺切除术组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表2。
表2
MG患者与对照组外周血淋巴细胞表面Fas抗原的表达(x±s,%)
组别例数Fas+CD4+Fas+CD8+Fas+
无行胸腺切除术MG患者644 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(2249KB，3页)。