胃癌组织中Livin蛋白的表达及其与临床生物学行为及细胞增殖的关系(1)
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[摘要] 目的 探讨胃癌组织中Livin蛋白的表达及其与临床生物学行为及细胞增殖的关系。 方法 免疫组化检测70例胃癌及癌旁正常组织中Livin蛋白的表达，并探讨其与性别、年龄、组织分化度、浸润深度和淋巴结转移等临床生物学行为和细胞增殖的关系。 结果 胃癌标本中Livin的阳性率明显高于癌旁正常组织(χ2=18.53，P < 0.01)。高-中分化胃癌Livin阳性率明显低于低-未分化，T1～2期胃癌Livin阳性率明显低于T3～4期，无淋巴结转移胃癌Livin阳性率明显低于有淋巴结转移(P均< 0.05)。Livin表达阴性的胃癌组织中PCNA增殖指数明显低于Livin表达阳性(P < 0.05)。 结论 Livin基因参与胃癌的发病过程，与胃癌细胞的异常增殖和恶性转化密切相关，Livin基因不仅参与癌细胞凋亡的调控，还促进了癌细胞的异常增殖。
[关键词] 胃癌；Livin；临床生物学行为；细胞增殖
[中图分类号] R735.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2013)04-0051-02
近年来研究认为肿瘤的发病过程多步骤、多阶段、有序的病理过程，不仅与癌细胞异常分化密切相关，而且与癌细胞凋亡受抑制相关。凋亡通路的调节紊乱及凋亡相关基因及蛋白的表达异常，均可导致肿瘤的发生和发展。近年来凋亡抑制蛋白(IAP)家族在恶性肿瘤中的作用逐渐引起人们重视。Livin是IAP家族一种新成员，常在人胚胎组织和大多数实体肿瘤中特异性表达，而在正常人体组织中表达较少、甚至不表达，对抑制癌细胞的凋亡起着重要作用。近年来研究发现其异常表达与肿瘤的发生、发展、转移和预后等病理特征密切相关，但有关胃癌组织中Livin基因的表达及其与生物学行为的关系国内外报道较少[1，2]。本研究观察了胃癌组织中Livin蛋白的表达及其与临床生物学行为及细胞增殖的关系，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源
收集2007年8月～2012年7月两院有完整临床及病理学资料的胃癌及癌旁正常组织存档蜡块70例，常规予以组织固定、脱水、透明、包埋及切片。其中男48例，女22例，年龄39～87岁，平均(64.2±7.1)岁。术前均未行化放疗和免疫治疗。
1.2 免疫组化染色
采用常规Envision二步法测定Livin和PCNA的表达。常规4 μm石蜡切片，逐级脱蜡到水，3%双氧水室温下常规孵育10 min，微波进行抗原修复，滴加血清封闭15 min，倾去血清分别滴加Livin或PCNA一抗常规4℃过夜，后滴加二抗37°C孵育30 min，常规予以显色、复染、脱水、透明、封片及镜检。用已知阳性切片行阳性对照，以PBS溶液代替一抗工作液行阴性对照。兔抗人Livin蛋白多克隆抗体、鼠抗人PCNA单克隆抗体和免疫组化Envision二步法试剂盒均由北京中杉金桥生物公司提供，严格按照试剂盒所附说明书进行实验。
1.3 结果判定
1.3.1 Livin染色判断[3] 以胞浆出现棕黄(褐)色颗粒为阳性细胞。按高倍镜下细胞染色强度无着色、浅黄色、棕黄色和棕褐色分别计为0～3分；另选5个随机高倍视野，根据阳性细胞的比例分别计为0～4分，其中(-)计0分、≤10%计1分、11%～50%计2分、51%～75%计3分、>75%计4分。根据细胞染色强度和阳性细胞比例计分的乘积≥2分即认为Livin(+)。
1.3.2 增殖指数(PI) 采用高清晰度彩色图文分析系统，选择10个高倍视野，观察1 000个肿瘤细胞中PCNA染色的阳性细胞百分比，即为增殖指数(PI)。
1.4 统计学处理
采用SPSS 17.0统计学软件分析。计数资料结果以率表示，采用χ2检验。
2 结果
2.1 胃癌及癌旁正常组织中Livin表达的差异
70例胃癌组织标本中的Livin表达阳性36例，其中强阳性为14例。70例癌旁正常组织中4例Livin表达弱阳性。胃癌标本中Livin表达的阳性率明显高于癌旁正常组织(χ2=18.53，P < 0.01)。见图1。
2.2 胃癌组织中Livin表达与临床生物学行为的关系
胃癌组织中Livin表达与性别和年龄无明显的统计学关系(P > 0.05)。高-中分化胃癌Livin阳性率明显低于低-未分化，T1～2期胃癌Livin阳性率明显低于T3～4期，无淋巴结转移胃癌Livin阳性率明显低于有淋巴结转移，差异均有统计学意义(P均< 0.05)。见表1。
2.3 胃癌组织中Livin表达与细胞增殖的关系
Livin表达阴性和阳性的胃癌组织中PCNA增殖指数分别为(37.24±13.25)%和(57.27±18.75)%。Livin表达阴性胃癌组织中PCNA增殖指数明显低于Livin表达阳性(t =2 ......
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