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编号:12706291
妇科手术快速冷冻切片最佳冷冻时间的探寻及制片体会(2)
http://www.100md.com 2014年12月25日 马邦磊等
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    参见附件。

     1.3 方法

    1.3.1 冰冻切片的制备及固定 开启冷冻切片机,使其环境温度固定在-22℃,冷冻头-22℃,组织托头表面放少许OCT包埋剂,放于切片机内备用。规定取材医生所取组织块的大小分别为:乳腺2.0 cm×1.5 cm×0.1 cm,子宫颈2.0 cm×0.5 cm×0.1 cm,子宫内膜(含肌壁)2.0 cm×1.5 cm×0.2 cm,卵巢囊壁2.0 cm×0.5 cm,致密结缔组织2.0 cm×1.5 cm×0.1 cm,疏松结缔组织2.0 cm ×1.5 cm×0.2 cm,平滑肌2.0 cm×1.5 cm×0.1 cm,脂肪1.5 cm×1.0 cm×0.1 cm,将取材医生切好的组织块放于冷冻头上,再用OCT包埋剂裹住组织,放于切片机内让其自然冷却。组织冷冻2 min左右时(冷冻刚完全,此时组织中心已开始由红变白)切片一张,立即放于甲醇固定液中固定,加2 min后再切片一张,同上固定,加5 min后再切片一张,同上固定。以上切片均固定30 s,厚度均为4 μm,然后均执行常规H.E染色。剩余组织放于4%中性缓冲甲醛液中固定3 h,再放于70%酒精中保存,待常规取材时再统一脱水制作成石蜡切片。

    1.3.2 H.E染色 将已固定的切片用水冲洗后,放入预至50℃左右的苏木素染色液中染0.5~1.0 min,取出水洗数秒,用体积分数1%盐酸乙醇分化,水洗后放入40℃~60℃热水中蓝化。然后置入(5~10)g/L伊红液染10 s,水洗。体积分数80%~100%梯度乙醇脱水至二甲苯,封固[4]。以上各道酒精及二甲苯中,玻片均震荡数次,显微镜下对其观察。

    1.4 质量评价标准

    质量等级分三级:A级:组织结构清晰 ......

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