1.4 蛋白质印迹分析

    将转染的细胞用磷酸盐缓冲盐水洗涤一次，并溶于放射免疫沉淀测定(RIPA)裂解缓冲液(20 mM HEPES，pH 7.8，150 mM NaCl，1mM EDTA，0.1%Triton X-100，50 mM NaF，1 mM二硫苏糖醇)中和蛋白酶抑制剂鸡尾酒)。通过两次以14 000 rpm离心10 min清除细胞裂解物，并将上清液用于Western印迹分析。将等量的细胞裂解物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后转移至硝酸纤维素膜上。用5%脱脂奶封闭后，加入一抗4℃孵育过夜。洗涤膜并在室温下与辣根过氧化物酶(HRP)偶联的二抗孵育1 h，用化学发光法将蛋白印迹曝光到胶片上。

    1.5 RT-PCR测定

    Tirzol法提取经质粒转染培养的至细胞培养第3天(DIV3)的神经元RNA，用病毒进行反转录，使用Invitrogen公司的核酸提取试剂盒，扩增用的引物和探针序列由Invitrogen公司合成。PCR扩增引物由武汉博士德生物技术公司合成 ......