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编号:13189632
CCK-8法检测兔筋膜成纤维细胞增殖活性之最佳测试条件研究(2)
http://www.100md.com 2011年4月25日 辛培成 杨圣 芦健民 赵德伟
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    参见附件。

     1.4.2实验方案取P3代于对数生长期的兔筋膜成纤维细胞离心稀释吹打成浓度为4×104/ml的均匀单细胞悬液,接种于96孔培养板,每孔细胞悬液量为100 μl,复种5孔,同时设立空白对照孔(加培养基100 μl),孔板周围加PBS 100 μl,保持湿度。共接种6个96孔板,放入CO2培养箱中培养,每24 h换液,于培养第5天取出,每孔加入CCK-8 试剂,10 μl / 孔,于CO2培养箱中分别继续孵育1、2、3、4、5、6 h后,用酶联免疫检测仪测定各组的吸光光度值,取5个孔OD值平均值,检测波长分别为405、450、490、630 nm。以吸光光度值的平均值为纵坐标,孵育时间(h)为横坐标绘制细胞OD值趋势图,即兔筋膜成纤维细胞吸光光度值在不同测试条件下的差异图。

    2结果

    2.1图表直观分析兔筋膜成纤维细胞悬液接种于96孔板后,在培养第五天时(因接种后培养的第五天,处于成纤维细胞对数生长期)加入CCK-8 试剂分别孵育1、2、3、4、5、6 h后,用酶联免疫检测仪在不同波长条件下检测的OD值走势曲线如下图。

    从图3可见,兔筋膜成纤维细胞加入CCK-8试剂后,1~6 h不同孵育时间用酶联免疫检测仪测得的OD值不同,孵育4 h前,OD值与培养时间呈正相关,4 h后OD值随培养时间的延长而出现下降的趋势,取孵育4 h时检测最合适,灵敏度最高。因此用CCK-8法检测兔筋膜成纤维细胞的生物活性时应该在加入CCK-8试剂孵育后的4 h检测 ......

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