重结晶法制备壳聚糖/磷酸三钙组织工程支架及性能研究(2)
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盖上培养皿，分3组进行重结晶，同时冷干机开始预热：Ⅰ组置于室温23 ℃ 5 min；Ⅱ组置于冰箱11 ℃ 15 min；Ⅲ组置于冰箱0 ℃ 30 min；然后移入冷干机搁板上，密封干燥箱(筒)，开启冻干程序，试样完成最后的重结晶再冻结过程。Ⅳ组不进行重结晶，直接进入冻干作为对照组。
1.4 冻干
冷干机继续运行，按程序冻干24 h，之后干燥，得到固体试样。
1.5 检测方法
1.5.1 大体观察 以手术刀片切开试样，肉眼观察试样表面及内部的孔隙分布情况。
1.5.2 pH值测定 制备72 h后的试样，用蒸馏水湿润pH广泛试纸，贴附于试样表面2 s后取下，对照色带。每个试样正面和底面做多处测试。
1.5.3 孔隙率的测定 用乙醇替代法测定材料孔隙率。每组2个试样各剪成1/4圆面积得到每组8个样品。将每个样品置于一定体积的(V1)乙醇中，用冻干机常温抽真空至15 m bar脱气泡后，材料和乙醇总体积记为V2，再将材料移出，剩余乙醇体积记为V3，则材料孔隙率p=V1-V3/V2-V3；计算各组平均孔隙率；对重结晶孔隙率最高组(Ⅰ组)与Ⅳ组的组间差异进行统计学分析。
1.5.4 孔隙直径的测定 将Ⅰ、Ⅳ组试样用体视显微镜(olympus szx10)以6.3倍率观察、测量孔隙直径。均匀选取多点。
1.5.5 细胞复合支架材料观察 将Ⅰ组成品试样剪成2 mm×
5 mm×1 mm大小，置于培养皿中，用(2～3)×10-7 m波长紫外线消毒，距离15 cm，照射0.5 h。灭菌PBC每次浸泡10 min、以滴管基本吸干，换液3次后备用。细胞的收集和接种：用0.25%胰蛋白酶消化鸡胚成纤维细胞，1000 r/min离心5 min ......
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