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编号:11763825
桑银降糖活性成分对大鼠胰腺细胞凋亡相关蛋白bck-2和bax表达的影响(2)
http://www.100md.com 2009年3月1日 《医学发展》 2009年第3期

     1.2.6组织标本制备

    取大鼠胰腺切成3mm薄片后用10%中性福尔马林固定,常规脱水石蜡包埋,制作切片,切片厚5μm,HE染色,光镜观察。

    1.2.7 HE染色方法

    石蜡切片厚度为5μm,裱于干净载玻片上,60℃考片机上考片2h→二甲苯脱蜡2次,每次15min→100%乙醇Ⅰ→100%乙醇Ⅱ→95%乙醇→80%乙醇→蒸馏水苏木素染胞核5~10min→10%盐酸酒精分化→自来水冲15min(反蓝)→蒸馏水→伊红染胞浆→各级酒精脱水→二甲苯透明→树脂胶封片→显微镜观察。

    1.2.8免疫组化染色步骤

    切片经脱腊至水,3 mL/LH2O2室温孵育5~10 min,高压修复2~5 min,一抗1∶100稀释,4℃过夜,生物素化羊抗兔IgG(二抗)37℃孵育20~30 min, DAB室温显色3~10 min(显微镜下控制显色程度)。各步骤间用0.01 mol/L PBS(pH7.2)充分洗涤3 min×3次。苏木素复染,常规脱水、透明、封片。对照试验用PBS代替一抗。阳性细胞计数:Bcl-2和Bax阳性物质位于胞浆,在10×40倍光学显微镜下观察。

    1.2.9 统计学处理

    所有数据均用X ±S表示,数据统计由SPSS12软件处理,组间比较用t检验。

    2结果

    2.1桑银降糖胶囊对糖尿病动物模型SD大鼠降糖作用的影响

    桑银降糖胶囊大剂量组血糖浓度6.33±1.66 mmol/L与阴性对照组20.64±11.10mmol/L相比差异具有显著性P<0.01(见表1) ......
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