免疫组织化学技术检测新生乳鼠颞下颌关节软骨基质与Ihh表达的实验研究(2)
10 mol·L-1枸橼酸盐缓冲液(pH = 6.0)的电炉锅内，锅内的水沸腾开始计时20 min，进行抗原修复，然后自然冷却到室温。山羊血清(1∶10)封闭非特异性染色，室温孵育15 min；然后分别加入一抗ColⅠ(1∶500)、ColⅡ(1∶200)、Aggrecan(1∶500)和Ihh(1∶200)，PBS替代一抗作为阴性对照，4 ℃过夜；PBS洗涤后加入二抗(羊抗兔，1∶1000)，37 ℃孵育20 min，再按试剂盒的说明书，ABC复合物处理，DAB显色，封片。光学显微镜下观察颞下颌关节免疫组化染色的
形态。
1.5 阳性细胞判断标准 颞下颌关节出现棕黄色颗粒为阳性细胞，观察蛋白的分布、阳性强度和阳性率。按染色强度打分：-为无色，+为浅黄色，++为棕黄色，+++为棕褐色，染色强度需与背景色相对比。
2 结 果
免疫组化染色结果定位明确，背景清晰，阳性颗粒清楚。ColⅡ在关节盘与髁状突软骨中均表达强阳性，Aggrecan特异性表达于髁状突软骨中，ColⅠ在关节盘中表达阳性但是髁状突软骨中仅见少量表达，Ihh在关节盘中表达强阳性、髁状突软骨表达明显较少。ColⅡ与Aggrecan的表达位置强弱基本一致 ......
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形态。
1.5 阳性细胞判断标准 颞下颌关节出现棕黄色颗粒为阳性细胞，观察蛋白的分布、阳性强度和阳性率。按染色强度打分：-为无色，+为浅黄色，++为棕黄色，+++为棕褐色，染色强度需与背景色相对比。
2 结 果
免疫组化染色结果定位明确，背景清晰，阳性颗粒清楚。ColⅡ在关节盘与髁状突软骨中均表达强阳性，Aggrecan特异性表达于髁状突软骨中，ColⅠ在关节盘中表达阳性但是髁状突软骨中仅见少量表达，Ihh在关节盘中表达强阳性、髁状突软骨表达明显较少。ColⅡ与Aggrecan的表达位置强弱基本一致 ......
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