BRMS1和fascin基因在乳腺癌组织中的表达及其临床意义(2)

http://www.100md.com 2014年7月1日 《特别健康·下半月》2014年第7期

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     1.1.2 乳腺良性肿瘤组 ：50例，均为女性，年龄14～48岁，中位年龄28岁。病理类型：乳腺纤维腺瘤32例，导管内乳头状瘤8例。

    1.1.3 正常乳腺组织 ：标本取自上述50例乳腺良性肿瘤患者，距肿瘤边缘约2.5cm。病理切片证实为正常乳腺组织。

    以上标本离体后均在无菌条件下切取新鲜无坏死组织约2g立即投入液氮速冻，1h后移至-70℃保存备用。

    1.2 实验方法

    1.2.1 总RNA提取 ：分别取60mg～80mg乳腺癌、乳腺良性肿瘤及正常乳腺组织，按照说明书均采用Trizol(产品编号SK1312 上海生工生物工程有限公司产)一步法提取总RNA。将总RNA溶于0.1%焦碳酸二乙酯(DEPC)处理水，核酸蛋白紫外分析仪检测RNA质量和浓度及A260/A280比值。调RNA浓度至0.5μg/μL。

    1.2.2 逆转录反应 ： 在20μL反转录体系中含1.5μg总RNA、4μL 5×buffer、1μL OligodT(上海博亚公司)、1μL M-MLV(Promega公司)、1μLdNTP(上海生工)、2μL DTT和8μL0.1%DEPC处理水 ......