HPLC检测中药中非法添加化学降压药物
【摘 要】目的：为了解当前中药制剂中的非法添加化学降压药物的现象，通过HPLC进行定性检测中药制剂可能存在有非法添加的10种化学降压药物。方法：应用Agilent Extend-C18柱(250 mm*4.6 mm，5 μm)，0.02 mol·L?1醋酸铵溶液为流动相A，甲醇-乙腈(2∶1)为流动相B，梯度洗脱，230 nm检测波长，30℃柱温，1.0 mL·min?1流速。结果：10种化学降压药物均具分离度、线性与检测的灵敏度。检测限0.01～13 ng，5针连续进样的色谱图中，各组分保留的时间RSD <0.1%。结论：HPLC检测中药中非法添加化学降压药物简便且灵敏，同时重复性佳，可作为对降压类药物鉴别的有效方法进行推广。
【关键词】高效液相色谱法；中药制剂；化学降压药物；非法添加
【中图分类号】R284 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851(2018)05--02
近年以来，纯中药的制剂及各类的保健品中，非法进行化学药物添加的案例越多越多[1]。降压类的中药制剂当中，添加了西药成分的现象在这些案件中相对突出，这种不法行为为人们健康带来极其严重的威胁[2]。本研究通过对中药的制剂中是否存在非法添加了化学降压药进行初步的筛查，选择10种降压药物，应用梯度洗脱法对化学降压药进行分离的操作，结果显示了该方法灵敏、简便且重复性好，具体操作如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪(Agilent 1200)，配液相四元泵、紫外光可变波长检测器、控温自动进样器；高速离心机(TGL 16G)；电子天平(Mettler AE200)；超声波发生器(SB5200)。
1.2 降压药的对照品
氢氯噻嗪片：(国药准字H44023235，用量规格：25 mg，三才石岐制药股份有限公司)、吲达怕胺片：(国药准字H44020885，用量规格：2.5 mg，广东安诺药业股份有限公司)、氯沙坦钾片：(国药准字H20070264，用量规格：50 mg，浙江华海药业股份有限公司)、厄贝沙坦片：(国药准字H20030016，用量规格：150 mg，浙江华海药业股份有限公司)、硝苯地平片：(国药准字H44023986，用量规格：10 mg，廣东华南药业集团有限公司)、酒石酸美托洛尔片：(国药准字H32025390，用量规格：25 mg，阿斯利康制药有限公司)、盐酸特拉唑嗪片：(国药准字H20023659，用量规格：2 mg，上海雅培制药有限公司)、替米沙坦片：(国药准字H20061185，用量规格：40 mg，苏州东瑞制药有限公司)、盐酸地尔硫片：(国药准字H10880015，用量规格：30 mg，上海信谊万象药业股份有限公司)、尼群地平片：(国药准字H13022629，用量规格：10 mg，石药集团欧意药业有限公司)、均为市场购买，含量按标示的含量100%进行折算。
1.3 试剂 分析纯试剂(醋酸铵)、纯化水、色谱纯为甲醇与乙腈(Tedia，美国)。
1.4 样品 采用珍菊降压片(国药准字Z20053333，规格：0.25 g，含盐酸可乐定0.03 mg、氢氯噻嗪5 mg芦丁20 mg，雷允上药业有限公司)为市场购买。
2 方法
2.1 高效液相色谱条件设置 应用C18色谱柱(250 mm*4.6 mm，5 μm)，0.02 mol·L?1醋酸铵溶液为流动相A，甲醇-乙腈(2∶1)为流动相B，梯度洗脱，230 nm检测波长，30℃柱温，1.0 mL·min?1流速，进样量控制2 μL。
2.2 制备对照液 将10种获得的对照药研磨成粉，依次精密的称取相当各对照的化合物10mg量，置于同一带塞的锥形瓶，精准加入20 mL甲醇，进行10min超声后静置，并进行高速离心10min，取离心后的上清液，获得对照液以备用。
2.3 制备样品液 将珍菊降压片研磨成细粉状，进行精准称定后置带塞的锥形瓶当中，加入20 mL甲醇，进行10min超声后静置，并进行高速离心10min，取离心后的上清液，获得制备样品液。
3 结果
3.1 降压药峰面积线性结果
制备得对照液注入高效液相色谱仪当中进行分析[3]。依据高效液相色谱条件设置，10种降压药化合物均得到很好的分离。对照液进行适量10倍稀释，按高效液相色谱条件下依次进样分析(2～10μL每2μL梯度进样)。将10种降压药的进样量峰面积线性回归显示，R=0.9994～0.9999，药物该流动相系统稳定，线性均呈现良好。
3.2 检测限
精密量取适量对照液，加甲醇逐级稀释至不同浓度，按高效液相色谱条件设置进行测定，显示在高效的液相色谱图当中，各物质的色谱峰信噪比(S/N)=10，研究的10种降压药物检测限均处于0.01～13ng，表明HPLC检测的灵敏性高。
讨论
应用梯度洗脱程序，以甲醇、乙腈及缓冲盐作为流动相。此系统可对10种降压药进行同时的分离。并采用不同色谱柱，各药物分离结果各不同。在应用Agilent TC-C18柱分析HPLC的图谱中观察到了9个特征峰，其中，替米沙坦特征峰在图谱中消失，因此Agilent TC-C18灵敏度低。而应用Agilent Extend-C18柱进行分析时，则10种药的分离均良好，可选择Agilent Extend-C18柱进行处理分析。另外，研究的10种降压药物检测限均处于0.01～13ng，表明HPLC检测的灵敏性高。
总而言之，HPLC检测中药中非法添加化学降压药物简便且灵敏，同时重复性佳，可作为对降压类药物鉴别的有效方法进行推广。
参考文献
巩丽萍，田晨颖，郭常川，等.超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱快速筛查及定量分析中成药或保健品中非法添加的24种消炎止痛类化学成分[J].中国药学杂志，2015，50(24)：2154-2159.
林伟杰，梁祈，詹若挺.止咳平喘类中成药中9种非法添加化学成分的定性定量检验方法研究[J].广州中医药大学学报，2017，34(3)：418-423.
沈于兰，申兰慧，苏嘉焱.HPLC法同时测定止咳平喘类中成药中非法添加的9种化学成分[J]. 中国药品标准，2016，17(1)：37-40., http://www.100md.com(王小永 赵丽娜)
【关键词】高效液相色谱法；中药制剂；化学降压药物；非法添加
【中图分类号】R284 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851(2018)05--02
近年以来，纯中药的制剂及各类的保健品中，非法进行化学药物添加的案例越多越多[1]。降压类的中药制剂当中，添加了西药成分的现象在这些案件中相对突出，这种不法行为为人们健康带来极其严重的威胁[2]。本研究通过对中药的制剂中是否存在非法添加了化学降压药进行初步的筛查，选择10种降压药物，应用梯度洗脱法对化学降压药进行分离的操作，结果显示了该方法灵敏、简便且重复性好，具体操作如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪(Agilent 1200)，配液相四元泵、紫外光可变波长检测器、控温自动进样器；高速离心机(TGL 16G)；电子天平(Mettler AE200)；超声波发生器(SB5200)。
1.2 降压药的对照品
氢氯噻嗪片：(国药准字H44023235，用量规格：25 mg，三才石岐制药股份有限公司)、吲达怕胺片：(国药准字H44020885，用量规格：2.5 mg，广东安诺药业股份有限公司)、氯沙坦钾片：(国药准字H20070264，用量规格：50 mg，浙江华海药业股份有限公司)、厄贝沙坦片：(国药准字H20030016，用量规格：150 mg，浙江华海药业股份有限公司)、硝苯地平片：(国药准字H44023986，用量规格：10 mg，廣东华南药业集团有限公司)、酒石酸美托洛尔片：(国药准字H32025390，用量规格：25 mg，阿斯利康制药有限公司)、盐酸特拉唑嗪片：(国药准字H20023659，用量规格：2 mg，上海雅培制药有限公司)、替米沙坦片：(国药准字H20061185，用量规格：40 mg，苏州东瑞制药有限公司)、盐酸地尔硫片：(国药准字H10880015，用量规格：30 mg，上海信谊万象药业股份有限公司)、尼群地平片：(国药准字H13022629，用量规格：10 mg，石药集团欧意药业有限公司)、均为市场购买，含量按标示的含量100%进行折算。
1.3 试剂 分析纯试剂(醋酸铵)、纯化水、色谱纯为甲醇与乙腈(Tedia，美国)。
1.4 样品 采用珍菊降压片(国药准字Z20053333，规格：0.25 g，含盐酸可乐定0.03 mg、氢氯噻嗪5 mg芦丁20 mg，雷允上药业有限公司)为市场购买。
2 方法
2.1 高效液相色谱条件设置 应用C18色谱柱(250 mm*4.6 mm，5 μm)，0.02 mol·L?1醋酸铵溶液为流动相A，甲醇-乙腈(2∶1)为流动相B，梯度洗脱，230 nm检测波长，30℃柱温，1.0 mL·min?1流速，进样量控制2 μL。
2.2 制备对照液 将10种获得的对照药研磨成粉，依次精密的称取相当各对照的化合物10mg量，置于同一带塞的锥形瓶，精准加入20 mL甲醇，进行10min超声后静置，并进行高速离心10min，取离心后的上清液，获得对照液以备用。
2.3 制备样品液 将珍菊降压片研磨成细粉状，进行精准称定后置带塞的锥形瓶当中，加入20 mL甲醇，进行10min超声后静置，并进行高速离心10min，取离心后的上清液，获得制备样品液。
3 结果
3.1 降压药峰面积线性结果
制备得对照液注入高效液相色谱仪当中进行分析[3]。依据高效液相色谱条件设置，10种降压药化合物均得到很好的分离。对照液进行适量10倍稀释，按高效液相色谱条件下依次进样分析(2～10μL每2μL梯度进样)。将10种降压药的进样量峰面积线性回归显示，R=0.9994～0.9999，药物该流动相系统稳定，线性均呈现良好。
3.2 检测限
精密量取适量对照液，加甲醇逐级稀释至不同浓度，按高效液相色谱条件设置进行测定，显示在高效的液相色谱图当中，各物质的色谱峰信噪比(S/N)=10，研究的10种降压药物检测限均处于0.01～13ng，表明HPLC检测的灵敏性高。
讨论
应用梯度洗脱程序，以甲醇、乙腈及缓冲盐作为流动相。此系统可对10种降压药进行同时的分离。并采用不同色谱柱，各药物分离结果各不同。在应用Agilent TC-C18柱分析HPLC的图谱中观察到了9个特征峰，其中，替米沙坦特征峰在图谱中消失，因此Agilent TC-C18灵敏度低。而应用Agilent Extend-C18柱进行分析时，则10种药的分离均良好，可选择Agilent Extend-C18柱进行处理分析。另外，研究的10种降压药物检测限均处于0.01～13ng，表明HPLC检测的灵敏性高。
总而言之，HPLC检测中药中非法添加化学降压药物简便且灵敏，同时重复性佳，可作为对降压类药物鉴别的有效方法进行推广。
参考文献
巩丽萍，田晨颖，郭常川，等.超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱快速筛查及定量分析中成药或保健品中非法添加的24种消炎止痛类化学成分[J].中国药学杂志，2015，50(24)：2154-2159.
林伟杰，梁祈，詹若挺.止咳平喘类中成药中9种非法添加化学成分的定性定量检验方法研究[J].广州中医药大学学报，2017，34(3)：418-423.
沈于兰，申兰慧，苏嘉焱.HPLC法同时测定止咳平喘类中成药中非法添加的9种化学成分[J]. 中国药品标准，2016，17(1)：37-40., http://www.100md.com(王小永 赵丽娜)