丹参预给药对缺血再灌注后大鼠肠系膜细动静脉管径和红细胞流速的影响
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丹参作为活血化瘀中药，在中国被广泛地应用于心血管疾患、脑血管疾患、静脉血栓、肝肾功能异常、糖尿病血管合并症等与微循环障碍相关疾患的治疗。为评价丹参改善微循环的效果，揭示其对微循环障碍的防护和治疗作用的原理，我们从1991年起，用可视性、连续性的微循环观察系统，观察了丹参对缺血再灌注(I/R)所致的大鼠肠系膜微循环障碍的防护和治疗效果。本文介绍丹参预给药对缺血再灌注后大鼠肠系膜细动静脉管径和红细胞流速的影响。
材料和方法
取庆应义塾大学医学部实验动物中心饲养的体重200～250 g Wistar雄性大鼠(Charles River实验动物，东京)，按30 mg/kg的剂量腹腔注射sodium pentobarbital进行麻醉。从右侧颈静脉插入并置3G聚乙烯管。沿腹正中线作2～3 cm长的切口。轻柔地把近回盲部的回肠移至腹腔外，将肠系膜在附有薄玻片的台板上展开。为维持温度和湿度，在展开的肠系膜的表面持续滴加37℃的Krebs-Ringer缓冲液。肠系膜微循环的动态，用置于37℃恒温槽内的倒置生物显微镜(Diaphot TMD-2S,Nikon,东京)观察，并用高感度摄像机摄像，S-VHS录像机录像。
, 百拇医药
选直径在18～25 μm之间的细动脉和30～40 μm之间的细静脉(长200 μm以上)观察。经10分钟基础观察之后，用4G聚乙烯管将还流于观察部的肠系膜动静脉血管同时结扎10分钟(缺血)、解除结扎(再灌注)，将时间记录仪调至0处,在同一视野连续观察30分钟。正常对照组不进行缺血再灌注处理。丹参预给药组，在缺血再灌注10分钟前，将丹参注射液1 ml(含生药1 g)经颈静脉缓慢推入，之后按每小时每公斤体重1.2g生药的丹参注射液给药量连续推注，经颈静脉连续给药至观察结束。
细动静脉血管径的测定：用连接于倒置生物显微镜的高感度CCD摄像系统(CC-090，Flovel,东京)，将在倒置生物显微镜透过光下观察到的图像显示在监视器显示屏上。用video measuring gauge(Ⅳ-560，ホウエイ，东京)在缺血再灌注10分前、再灌注0分、10分、20分、30分等时限，测定细动静脉血管径。
细静脉红细胞流速的测定：用连接于倒置生物显微镜的高速摄像系统(Ektapro 1000,Kodak,San Diego,CA.USA)，以每秒摄像1000次的速度摄像记录，再以正常速度(每秒30次)重放录像，用temporal correlation velocimeter (CapiFlow,Kista,Sweden)测定红细胞的速度。
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每组6只大鼠的测定值用one-way analysis of variance(ANOVA)处理，Fisher's post hoc test检验。各组数值用x±sx表示，设P< 0.05为有显著意义。
结 果
图1 3组细动脉管径变化
图2 3组静脉管径变化
图3
CCD摄影机图像记录的细静
脉血流速度
图4
高速摄像，一般速度重放
显示细静脉血流速度变化
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图5 3组细静脉血流速度比较
细动静脉血管径的变化：图1显示的是缺血再灌注前后，正常对照组、缺血再灌注组、丹参预给药组的肠系膜细动脉管径的变化。与正常对照组相比，在本观察期间内缺血再灌注没有引起细动脉管径的显著变化。丹参预给药也没有引起细动脉血管径的显著变化。图2显示各组细静脉管径的变化。缺血再灌注未引起细静脉管径的变化。丹参预给药在缺血再灌后30分钟的观察期间内，也没有引起大鼠肠系膜细静脉的管径变化。
细静脉红细胞流速的变化：图3是用CCD摄影机摄得的图像。图4是用高速摄像系统摄取，再经一般速度重放像的图像。可以清晰地辨认血细胞。用高速摄像系统测得的各组细静脉血流速度如图5所示。正常对照组在观察的期间内，血流速度没有显著地改变。缺血再灌注组和丹参预给药组的细静脉血流速，在缺血再灌注前，与正常对照组相比无显著差异。缺血再灌注组在再灌注开始时，血流速度已经降低，并持续至本观察结束时。丹参预给药组显著地抑制了缺血再灌注后肠系膜细静脉红细胞流速的降低。
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讨 论
临床上，心血管疾患的PCA术后再损伤、心脑血栓再通后损伤、交通事故、寒冷刺激等引发的微循环障碍均与缺血再灌注损伤相关。在研究微循环障碍的原理、判定药物疗效、探索药物作用原理方面，缺血再灌注所致的微循环障碍模型已被广泛应用。
本研究使用4G聚乙烯管同时结扎观察还流部肠系膜动静脉10分钟的方法，在不引起血管损伤的前题下，既能有效地阻断血流，又可复灌，是稳定的缺血再灌注所致微循环障碍的造模方法。
本研究用高感度CCD摄像系统和高速摄影系统，客观连续地观察并记录了缺血再灌注后细动静脉血管径和红细胞流速的变化。确认了缺血再灌注后细动静脉血管径无明显变化，而血流速降低的事实。以往认为，血流速的低下与血管收缩有关；而本研究表明，缺血再灌注后的血流速低下是在血管径未发生变化的情况下发生的。也就是说，缺血再灌注后血流速的低下是由血管径变化以外的因素引起的。丹参预给药有改善红细胞流速的作用，而且，丹参可在不改变血管径的情况下改善红细胞流速。可以认为，丹参改善缺血再灌注后微循环障碍作用，是通过对血管径以外因素的影响实现的。
进而，为探讨丹参改善微循环的原理，我们还对缺血再灌注后血管内皮、粘附因子、白细胞粘附、过氧化物的产生、血管通透性、肥大细胞脱颗粒等变化进行了系统的研究。, 百拇医药
材料和方法
取庆应义塾大学医学部实验动物中心饲养的体重200～250 g Wistar雄性大鼠(Charles River实验动物，东京)，按30 mg/kg的剂量腹腔注射sodium pentobarbital进行麻醉。从右侧颈静脉插入并置3G聚乙烯管。沿腹正中线作2～3 cm长的切口。轻柔地把近回盲部的回肠移至腹腔外，将肠系膜在附有薄玻片的台板上展开。为维持温度和湿度，在展开的肠系膜的表面持续滴加37℃的Krebs-Ringer缓冲液。肠系膜微循环的动态，用置于37℃恒温槽内的倒置生物显微镜(Diaphot TMD-2S,Nikon,东京)观察，并用高感度摄像机摄像，S-VHS录像机录像。
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选直径在18～25 μm之间的细动脉和30～40 μm之间的细静脉(长200 μm以上)观察。经10分钟基础观察之后，用4G聚乙烯管将还流于观察部的肠系膜动静脉血管同时结扎10分钟(缺血)、解除结扎(再灌注)，将时间记录仪调至0处,在同一视野连续观察30分钟。正常对照组不进行缺血再灌注处理。丹参预给药组，在缺血再灌注10分钟前，将丹参注射液1 ml(含生药1 g)经颈静脉缓慢推入，之后按每小时每公斤体重1.2g生药的丹参注射液给药量连续推注，经颈静脉连续给药至观察结束。
细动静脉血管径的测定：用连接于倒置生物显微镜的高感度CCD摄像系统(CC-090，Flovel,东京)，将在倒置生物显微镜透过光下观察到的图像显示在监视器显示屏上。用video measuring gauge(Ⅳ-560，ホウエイ，东京)在缺血再灌注10分前、再灌注0分、10分、20分、30分等时限，测定细动静脉血管径。
细静脉红细胞流速的测定：用连接于倒置生物显微镜的高速摄像系统(Ektapro 1000,Kodak,San Diego,CA.USA)，以每秒摄像1000次的速度摄像记录，再以正常速度(每秒30次)重放录像，用temporal correlation velocimeter (CapiFlow,Kista,Sweden)测定红细胞的速度。
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每组6只大鼠的测定值用one-way analysis of variance(ANOVA)处理，Fisher's post hoc test检验。各组数值用x±sx表示，设P< 0.05为有显著意义。
结 果
图1 3组细动脉管径变化
图2 3组静脉管径变化
图3
CCD摄影机图像记录的细静
脉血流速度
图4
高速摄像，一般速度重放
显示细静脉血流速度变化
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图5 3组细静脉血流速度比较
细动静脉血管径的变化：图1显示的是缺血再灌注前后，正常对照组、缺血再灌注组、丹参预给药组的肠系膜细动脉管径的变化。与正常对照组相比，在本观察期间内缺血再灌注没有引起细动脉管径的显著变化。丹参预给药也没有引起细动脉血管径的显著变化。图2显示各组细静脉管径的变化。缺血再灌注未引起细静脉管径的变化。丹参预给药在缺血再灌后30分钟的观察期间内，也没有引起大鼠肠系膜细静脉的管径变化。
细静脉红细胞流速的变化：图3是用CCD摄影机摄得的图像。图4是用高速摄像系统摄取，再经一般速度重放像的图像。可以清晰地辨认血细胞。用高速摄像系统测得的各组细静脉血流速度如图5所示。正常对照组在观察的期间内，血流速度没有显著地改变。缺血再灌注组和丹参预给药组的细静脉血流速，在缺血再灌注前，与正常对照组相比无显著差异。缺血再灌注组在再灌注开始时，血流速度已经降低，并持续至本观察结束时。丹参预给药组显著地抑制了缺血再灌注后肠系膜细静脉红细胞流速的降低。
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临床上，心血管疾患的PCA术后再损伤、心脑血栓再通后损伤、交通事故、寒冷刺激等引发的微循环障碍均与缺血再灌注损伤相关。在研究微循环障碍的原理、判定药物疗效、探索药物作用原理方面，缺血再灌注所致的微循环障碍模型已被广泛应用。
本研究使用4G聚乙烯管同时结扎观察还流部肠系膜动静脉10分钟的方法，在不引起血管损伤的前题下，既能有效地阻断血流，又可复灌，是稳定的缺血再灌注所致微循环障碍的造模方法。
本研究用高感度CCD摄像系统和高速摄影系统，客观连续地观察并记录了缺血再灌注后细动静脉血管径和红细胞流速的变化。确认了缺血再灌注后细动静脉血管径无明显变化，而血流速降低的事实。以往认为，血流速的低下与血管收缩有关；而本研究表明，缺血再灌注后的血流速低下是在血管径未发生变化的情况下发生的。也就是说，缺血再灌注后血流速的低下是由血管径变化以外的因素引起的。丹参预给药有改善红细胞流速的作用，而且，丹参可在不改变血管径的情况下改善红细胞流速。可以认为，丹参改善缺血再灌注后微循环障碍作用，是通过对血管径以外因素的影响实现的。
进而，为探讨丹参改善微循环的原理，我们还对缺血再灌注后血管内皮、粘附因子、白细胞粘附、过氧化物的产生、血管通透性、肥大细胞脱颗粒等变化进行了系统的研究。, 百拇医药