丹参预给药对缺血再灌注后大鼠肠系膜肥大细胞脱颗粒的抑制作用
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缺血再灌注可引起肠系膜血管外的肥大细胞脱颗粒。肥大细胞脱颗粒释放的组织胺、5-羟色胺、肝素等血管活性物质又反作用于血管，加剧血管通透性的增强。所以，抑制肥大细胞脱颗粒也是改善微循环的重要环节之一。
现介绍丹参预给药对缺血再灌注后大鼠肠系膜肥大细胞脱颗粒的抑制作用。
材料和方法
动物及缺血再灌注微循环障碍模型与前文(本报3月7日第5版)同。即取庆应义塾大学医学部实验动物中心饲养的Wistar雄性大鼠，按30 mg/kg的剂量腹腔注射sodium pentobarbital进行麻醉。从右侧颈静脉插入并留置3G聚乙烯管。沿腹正中线作2～3cm长的切口，轻柔地把近回盲部的回肠移至腹腔外，将肠系膜在附有薄玻片的台板上展开。为维持湿度和温度，在展开的肠系膜的表面连续滴加37℃的Krebs-Ringer缓冲液。肠系膜微循环的动态，用置于37℃恒温槽内的倒置生物显微镜(Diaphot TMD-2S,Nikon,东京)观察，S-VHS录像机录像。
, 百拇医药
选直径在30～40 μm之间的细静脉(长200 μm以上)，经10分钟基础观察之后，用4G聚乙烯管将还流于观察部的肠系膜动静脉血管结扎10分钟(缺血)，解除结扎(再灌注)，将时间记录仪调至0处，在同一视野连续观察30分钟。正常对照组不进行缺血再灌注处理。丹参预给药组的给药方法和给药量同前文(本报3月7日第5版)。
缺血再灌注30分观察结束后，将toluidine blue用生理盐水溶解，配成0.1%染液。将约1ml的0.1% toluidine blue染液滴加于肠系膜表面，30秒后，用生理盐水缓慢地冲洗肠系膜，肥大细胞的颗粒被染，呈蓝紫色。用连接于倒置生物显微镜的高感度摄影系统，沿细静脉观察记录5个视野，计数脱颗粒和未脱颗粒的肥大细胞数，用脱颗粒的肥大细胞占计数的肥大细胞总数的百分比来表示肥大细胞脱颗粒率。
每组6只鼠的各测定值用one-way analysis of varianoe(ANOVA)处理，Fisher's post hoc test检验。各组值用x±sx表示，设P< 0.05为差异有显著性。
, 百拇医药
结 果
图1
缺血再灌流后大鼠肠系膜肥大细胞脱颗粒(0.1%
toluidine blue染色，*20)。a细静脉附近被toluidine
blue蓝紫染的细胞是肥大细胞。其中，b细胞体积较大，toluidine
blue蓝紫颗粒脱出细胞外的肥大细胞是脱颗粒的肥在细胞，c是静脉。
表1
3组肥大细胞脱颗粒率比较
图1为在缺血再灌注30分钟之后，大鼠肠系膜血管周围被1%toluidine blue活体染色的图像。图中被toluidine blue染成蓝紫色细胞是肥大细胞。其中，细胞体积较大，toluidine blue蓝染颗粒脱落出细胞外的肥大细胞是脱颗粒肥大细胞。
, 百拇医药
表1示缺血再灌注后30分钟，各组肠系膜肥大细胞脱颗粒率。正常对照组的肥大细胞脱颗粒率为(22.0±2.2)%，缺血再灌注组(55.0±4.6)%，显著高于正常对照组。而丹参预给药组的肠系膜肥大细胞脱颗粒率为(29.0±2.9)%，显著地低于缺血再灌注组。即丹参预给药抑制了缺血再灌注后肠系膜肥大细胞的脱颗粒。
讨 论
缺血再灌注后血管外的肥大细胞脱颗粒，释放组织胺、5-羟色胺、肝素等物质，从血管外又作用于血管，进一步促进了血管通透性的增强。
我们已经报告了丹参预给药有保护血管内皮细胞、抑制细静脉内皮的过氧化物产生、抑制白细胞与细静脉内皮的粘附、抑制白蛋白渗出等作用。本研究结果表明，丹参预给药还可以抑制肥大细胞的脱颗粒。
肥大细胞脱颗粒与过氧化物产生、肥大细胞膜稳定性、血小板活性因子(PAF)、白细胞介素(LTB4)等多种因素有关，但是，缺血再灌注后的肥大细胞脱颗粒与过氧化物和肥大细胞稳定性的关系更为密切。本研究在缺血再灌注30分钟之后，用toluidine blue活体染色法证明了丹参可抑制血管周围的肥大细胞脱颗粒。抑制缺血再灌注后肥大细胞脱颗粒，可以减少血管外活性物质对血管的刺激，进而，减轻微循环障碍。丹参抑制缺血再灌注后肥大细胞脱颗粒的作用是否与其抑制过氧化物、维护血管通透性有关，以及丹参是否有直接稳定肥大细胞膜的作用尚需进一步探讨。
综合我们以往的研究，丹参预给药有保护血管内皮、抑制白细胞与血管内皮细胞的粘附、抑制血管内皮细胞过氧化物的产生、抑制血管外的肥大细胞脱颗粒等作用。丹参多靶点作用的结果，维护了血管通透性，改善了血流速度，改善了微循环。丹参对微循环多靶点的综合作用是其取得临床疗效的药理基础。, 百拇医药
现介绍丹参预给药对缺血再灌注后大鼠肠系膜肥大细胞脱颗粒的抑制作用。
材料和方法
动物及缺血再灌注微循环障碍模型与前文(本报3月7日第5版)同。即取庆应义塾大学医学部实验动物中心饲养的Wistar雄性大鼠，按30 mg/kg的剂量腹腔注射sodium pentobarbital进行麻醉。从右侧颈静脉插入并留置3G聚乙烯管。沿腹正中线作2～3cm长的切口，轻柔地把近回盲部的回肠移至腹腔外，将肠系膜在附有薄玻片的台板上展开。为维持湿度和温度，在展开的肠系膜的表面连续滴加37℃的Krebs-Ringer缓冲液。肠系膜微循环的动态，用置于37℃恒温槽内的倒置生物显微镜(Diaphot TMD-2S,Nikon,东京)观察，S-VHS录像机录像。
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选直径在30～40 μm之间的细静脉(长200 μm以上)，经10分钟基础观察之后，用4G聚乙烯管将还流于观察部的肠系膜动静脉血管结扎10分钟(缺血)，解除结扎(再灌注)，将时间记录仪调至0处，在同一视野连续观察30分钟。正常对照组不进行缺血再灌注处理。丹参预给药组的给药方法和给药量同前文(本报3月7日第5版)。
缺血再灌注30分观察结束后，将toluidine blue用生理盐水溶解，配成0.1%染液。将约1ml的0.1% toluidine blue染液滴加于肠系膜表面，30秒后，用生理盐水缓慢地冲洗肠系膜，肥大细胞的颗粒被染，呈蓝紫色。用连接于倒置生物显微镜的高感度摄影系统，沿细静脉观察记录5个视野，计数脱颗粒和未脱颗粒的肥大细胞数，用脱颗粒的肥大细胞占计数的肥大细胞总数的百分比来表示肥大细胞脱颗粒率。
每组6只鼠的各测定值用one-way analysis of varianoe(ANOVA)处理，Fisher's post hoc test检验。各组值用x±sx表示，设P< 0.05为差异有显著性。
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结 果
图1
缺血再灌流后大鼠肠系膜肥大细胞脱颗粒(0.1%
toluidine blue染色，*20)。a细静脉附近被toluidine
blue蓝紫染的细胞是肥大细胞。其中，b细胞体积较大，toluidine
blue蓝紫颗粒脱出细胞外的肥大细胞是脱颗粒的肥在细胞，c是静脉。
表1
3组肥大细胞脱颗粒率比较
图1为在缺血再灌注30分钟之后，大鼠肠系膜血管周围被1%toluidine blue活体染色的图像。图中被toluidine blue染成蓝紫色细胞是肥大细胞。其中，细胞体积较大，toluidine blue蓝染颗粒脱落出细胞外的肥大细胞是脱颗粒肥大细胞。
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表1示缺血再灌注后30分钟，各组肠系膜肥大细胞脱颗粒率。正常对照组的肥大细胞脱颗粒率为(22.0±2.2)%，缺血再灌注组(55.0±4.6)%，显著高于正常对照组。而丹参预给药组的肠系膜肥大细胞脱颗粒率为(29.0±2.9)%，显著地低于缺血再灌注组。即丹参预给药抑制了缺血再灌注后肠系膜肥大细胞的脱颗粒。
讨 论
缺血再灌注后血管外的肥大细胞脱颗粒，释放组织胺、5-羟色胺、肝素等物质，从血管外又作用于血管，进一步促进了血管通透性的增强。
我们已经报告了丹参预给药有保护血管内皮细胞、抑制细静脉内皮的过氧化物产生、抑制白细胞与细静脉内皮的粘附、抑制白蛋白渗出等作用。本研究结果表明，丹参预给药还可以抑制肥大细胞的脱颗粒。
肥大细胞脱颗粒与过氧化物产生、肥大细胞膜稳定性、血小板活性因子(PAF)、白细胞介素(LTB4)等多种因素有关，但是，缺血再灌注后的肥大细胞脱颗粒与过氧化物和肥大细胞稳定性的关系更为密切。本研究在缺血再灌注30分钟之后，用toluidine blue活体染色法证明了丹参可抑制血管周围的肥大细胞脱颗粒。抑制缺血再灌注后肥大细胞脱颗粒，可以减少血管外活性物质对血管的刺激，进而，减轻微循环障碍。丹参抑制缺血再灌注后肥大细胞脱颗粒的作用是否与其抑制过氧化物、维护血管通透性有关，以及丹参是否有直接稳定肥大细胞膜的作用尚需进一步探讨。
综合我们以往的研究，丹参预给药有保护血管内皮、抑制白细胞与血管内皮细胞的粘附、抑制血管内皮细胞过氧化物的产生、抑制血管外的肥大细胞脱颗粒等作用。丹参多靶点作用的结果，维护了血管通透性，改善了血流速度，改善了微循环。丹参对微循环多靶点的综合作用是其取得临床疗效的药理基础。, 百拇医药