丹参与Sod对缺血再灌注后大鼠肠系膜细静脉内白蛋白外漏的作用
 |
| 丹参与SOD对缺血再灌注后大鼠肠系膜细静脉内白蛋白外漏的预防和治疗作用 |
 |
| 丹参与SOD对缺血再灌注后大鼠肠系膜细静脉内白蛋白外漏的预防和治疗作用 |
缺血再灌注引起的细静脉内皮细胞损伤、过氧化物产生、白细胞和血小板的活化、白细胞与血管内皮粘附、肥大细胞脱颗粒等都可引起血管通透性增强，导致血管内的白蛋白外漏。
SOD通过歧化超氧阴离子，减少氧化物对血管的攻击来抑制白蛋白外漏。丹参预给药也通过保护血管内皮细胞，抑制白细胞与血管内皮细胞的粘附、抑制白细胞和血管内皮细胞过氧化物的产生、抑制肥大细胞脱颗粒等环节来维持血管通透性。但在缺血再灌注引起的微循环障碍发生之后，丹参与SOD是否还能发挥抑制白蛋白外漏和维持血管通透性的作用尚未见报道。
我们在缺血再灌注前及缺血再灌注10分钟后，连续投用丹参或SOD，以探讨丹参与SOD对缺血再灌注引起大鼠肠系膜细静脉内白蛋白外漏的预防和治疗作用。
材料和方法
取庆应义塾大学医学部实验动物中心饲养的Wistar雄性大鼠(体重200～250g,Charles River实验动物，东京)，按30 mg/kg的剂量腹 腔注射sodium pentobarbital进行麻醉。从右侧颈静脉插入并置3G聚乙烯管。沿腹正中线作2～3cm切口，轻柔地把近回盲部的回肠移至腹腔外，将肠系膜在附有薄玻片的台板上展开。为维持温度和湿度，在展开的肠系膜的表面持续滴加37℃的Krebs-Ringer缓冲液。肠系膜微循环的动态，用置于37℃恒温槽内的倒置生物显微镜(Diaphot TMD-2S,Nikon,东京)观察，并用高感度摄像机摄像，S-VHS录像机录像。
, http://www.100md.com
选直径在25～40 μm之间的细静脉非分支部(长200 μm以上)为观察部位。经10分钟基础观察之后，用4G聚乙烯管将还流于观察部的肠系膜动静脉血管同时结扎10分钟(缺血)，解除结扎(再灌注)，将时间记录仪调至0处。在同一视野连续观察30分钟。正常对照组不进行缺血再灌注处理。
SOD预给药组：在缺血再灌注10分钟前，用连续推注器按每小时12000U/kg的给药量，经颈静脉连续注入SOD至观察结束。
丹参预给药组：在缺血再灌注10分钟前，经颈静脉缓慢推注丹参注射液1ml(1g丹参提取物/ml)，再用连续推注器按每小时1.2 g/kg的给药量，经颈静脉连续注入丹参注射剂至观察结束。
SOD后给药组：在缺血再灌注后10分钟时，用连续推注器，按每小时12000U/kg的给药量，经颈静脉连续注入SOD至观察结束。
丹参后给药组：在缺血再灌注后10分钟时，用连续推注器按每小时1.2 g/kg的给药量，经颈静脉连续注入丹参注射剂至观察结束。
, 百拇医药
细静脉血管通透性测定：将FITC(荧光素)标记的白蛋白(Sigma Chemical)，按50 mg的剂量，经颈静脉缓慢注入，用荧光显微摄影系统(C-2400-08，浜松)，在波长为420～490 nm，发光波长为520 nm的条件下激发荧光素发光，观察并记录同一细静脉内外的FITC荧光素变化。根据从细静脉管内向细静脉管外漏出的FITC荧光素变化，经时计算白蛋白的漏出情况，以表示细静脉血管通透性的变化。
每组6只大鼠的各测定值用one-way analysis of variance(ANOVA)处理，Fisher's post hoc test检验。各组数值用平均数±标准差表示，设P< 0.05为有显著意义。
结 果
图1显示丹参和SOD预给药对缺血再灌注后大鼠肠系膜细静脉FITC标记白蛋白外漏的影响。再灌注开始时，缺血再灌注组的细静脉FITC标记白蛋白的外漏与正常对照组相比显著增加。而丹参预给药组和SOD预给药组均没能抑制再灌注开始时的FITC标记白蛋白的外漏。缺血再灌注组随着再灌注的进行，FITC标记白蛋白的外漏持续增加，而丹参预给药组和SOD预给药组在再灌注20分钟、30分钟时FITC标记白蛋白外漏与缺血再灌注组相比显著减少。即丹参和SOD预给药对缺血再灌注引起的大鼠肠系膜细静脉FITC标记白蛋白的外漏有预防作用。
, http://www.100md.com
图2显示缺血再灌注10分钟后加入丹参和SOD对大鼠肠系膜细静脉FITC标记白蛋白外漏的影响。再灌注10分钟时(丹参和SOD投入之前)，缺血再灌注组、丹参后给药组、SOD后给药组的FITC标记白蛋白的漏出均显著多于正常对照组。SOD后药组在连续投入SOD 20分钟(再灌注30分钟)时，细静脉内FITC标记白蛋白的外漏没有改善。丹参后给药组，在连续投入20分钟(再灌注30分钟)时，明显地改善了细静脉FITC标记白蛋白的外漏。丹参后给药组的FITC标记白蛋白的外漏率不仅显著地低于缺血再灌注组，也显著地低于SOD后给药组。SOD后给药对缺血再灌注引起的大鼠肠系膜细静脉FITC标记白蛋白的外漏，在本观察的期间内没有治疗作用，而丹参后给药有治疗作用。
与正常对照组相比*P< 0.05;与缺血再灌组相比P< 0.05
图1 丹参和SOD预给药对缺血再灌注所致大鼠肠系膜细静脉内白蛋 白漏出的影响
, 百拇医药 与正常对照组相比*P< 0.05;与缺血再灌组相比P< 0.05；与SOD后给药组相比P< 0.05
图2 缺血再灌注10分钟后丹参和SOD后给药对大鼠肠系膜细胞静脉内白蛋白漏出的影响
讨 论
本研究，通过观察丹参和SOD在缺血再灌注预给药和再灌注10分钟后给药，大鼠肠系膜细静脉内FITC标记白蛋白外漏的动态变化，发现丹参无论在缺血再灌注预给药，还是再灌注10分钟后给药，均可抑制FITC标记白蛋白的外漏。特别是在FITC标记白蛋白已经发生外漏的再灌注10分钟后，SOD没有发挥治疗作用，而丹参仍然有治疗作用。
细静脉FITC标记白蛋白的外漏是细静脉通透性的标志。缺血再灌注引起血管内皮细胞和白细胞产生超氧阴离子自由基，进而转化成过氧化氢等过氧化物。这些过氧化物通过脂质过氧化损伤血管内皮细胞和基底膜，使血管通透性增强，导致白蛋白外漏。在缺血再灌注预投入SOD可以通过歧化超氧阴离子自由基，而减轻过氧化物对血管内皮细胞和基底膜的攻击，间接地维护血管通透性。但是，再灌注10分钟之后，血管壁DHR(二氢若丹明)发光明显增强(有过氧化氢等产生)，白细胞大量地粘附于细静脉内皮时，既使投入SOD，也不能有效地清除过氧化物，不能清除粘附的白细胞，也就不能减轻过氧化物对血管内皮细胞和基底膜的攻击。本研究所获得的SOD后投入不能抑制白蛋白外漏的结果，进一步证明了这一观点。
丹参的后投入，仍能显著地抑制FITC标记白蛋白的外漏。在微循环障碍已经发生后，丹参改善血管通透性的作用显著优于SOD。可见，丹参不但有预防微循环障碍作用，还有治疗微循环障碍的作用，更有临床应用价值。丹参的这一治疗作用可能与其保护血管内皮细胞、清除过氧化物、清除白细胞粘附的作用有关。, 百拇医药(韩晶岩
秋叶保忠铃木秀和
)