ELISA法检测幽门螺杆菌抗体的临床意义
本研究用间接ELISA法检例患者和健康输血员血清中抗HpIgA、IgG同时还检测了胃粘膜中的Hp，以探讨Hp抗体测定的临床意义。
1 材料和方法
1.1 材料
本组217例患者经胃镜及胃粘膜组织学诊断为十二指肠球部溃疡(DU)48例，胃溃疡(GU)27例，慢性萎缩性胃炎(CAG)18例，慢性清表性胃炎(CSG)96例，复合性溃疡(CU)7例，胃癌(GCa)14例，胃粘膜正常2例。慢性胃炎中活动性胃炎(ACG)54例，非活动性(NACG)60例。所有患者均抽取空腹静脉血，此外还收集了80例健康输血员血清测抗HpIgA、IgG。
1.2 方法
①胃粘膜内Hp菌检测活检粘膜直接涂片检查及Hp的分离培养鉴定均参照张振华所报道的方法。②ELISA方法：从患者胃粘膜中培养出的7株Hp菌分离纯化，超声粉碎后在4℃下1500g离心30min，取上清蛋白定量后作抗原。用50mg/ml的抗原包被聚苯乙稀反应板，用间接ELISA法测定，每板均设标准阳性和阴性对照，将两者OD值用作为质控，每板此值之差在±0.5范围内。结果用特测标本OD值与标准阳性OD值之比来表示，该比值在血清IgA≥0.6，在IgG≥0.5为阳性，在胃液IgA≥0.145为阳性。③吸收抑制试验：用7例在ELISA试验中高效价IgA、IgG的Hp感染者的血清混合后从1∶10开始对倍稀释至1∶160，然后分别用Hp、空肠弯曲菌(CJ)及大肠杆菌完整的细菌和Hp抗原吸收后，按上述方法做ELISA。
计数资料用卡方检验，计量资料用t检验。
2 结果
Hp阳性患者血清中抗HpIgA、IgG含量均显著高于Hp阴性者(P<0.01)。与细菌学比较其敏感性分别为92.1%和95.7%，特异性分别为91.1%和88.5%，符合率分别为71.7%和93.2%(表1)。可以看出不同疾病之间的血清抗HpIgA和LgG含量有显著差异(P<0.01)，两组比较发现血清IgA含量在ACG组显著高于除CU外的其它各组(P<0.05，P<0.01)，消化性溃疡各组显著高于NACG组(P<0.01)，2例组织学正常者IgA、IgG分别为0.44和0.37，80例健康输血员血清抗HpIgA，IgG的含量和阳性率均显著低于ACG，GU，DU及GCa组(P<0.01，P<0.05)。研究表明，血清Hp抗体与胃炎的严重程度有关，中重度胃炎血清抗HpIgA，IgG的阳性率为82.4%和79.0%，显著高于轻度胃炎的45.6%59.7%(P<0.01，P<0.05)。但Hp抗体含量和阳性率在浅表性胃炎和萎缩性胃炎之间无显著差异(P<0.05表2)。
表1 胃粘膜内Hp和血清Hp抗体的比较
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胃粘膜Hp |
n |
IgA |
IgG | ||
|
X±S |
阳性数(%) |
X±S |
阳性数(%) | ||
|
阳性 |
139 |
0.79(0.19) |
128(92.1) |
0.65(0.13) |
133(95.7) |
|
阴性 |
78 |
0.50(0.1) |
7(9.0) |
0.45(0.13) |
9(11.5) |
表2 各种胃部疾病血清抗HpgA，IgG比较
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病 种 |
n |
IgA |
IgG | ||
|
X±S |
阳性数(%) |
X±S |
阳性数(%) | ||
|
ACG |
54 |
0.82(0.2) |
49(90.7) |
0.69(0.1) |
51(94.4) |
|
NGCG |
60 |
0.53(0.2) |
22(36.7) |
0.47(0.1) |
23(38.3) |
|
GU |
27 |
0.71(0.2) |
19(70.7) |
0.59(0.2) |
20(74.1) |
|
DU |
48 |
0.71(0.2) |
31(64.6) |
0.57(0.2) |
34(70.8) |
|
CU |
7 |
0.86(0.4) |
5(71.2) |
0.58(0.1) |
5(71.2) |
|
GCa |
14 |
0.68(0.2) |
8(57.1) |
0.55(0.1) |
8(57.1) |
|
RG |
5 |
0.54(0.1) |
120.0 |
0.52(0.2) |
1(20.0) |
|
输血员 |
80 |
0.47(0.2) |
27(33.8) |
0.43(0.2) |
25(31.3) |
Hp阳性患者胃液中抗HpIgA显著高于Hp阴性者(P<0.01)，与细菌学结果比较敏感性，特异性与符合率分别为96.4%92.9%和95.3%(表3)。
表3 胃粘膜内Hp的检出率和胃液抗HpIgA的比较
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胃粘膜 |
n |
X±S |
阳性数 |
|
阳性 |
57 |
0.438(0.234) |
55(96.5) |
|
阴性 |
28 |
0.101(0.045) |
2(7.1) |
不同疾病之间胃液抗HpIgA含量有显著差异(表4，P<0.01)，两组比较发现ACG组、消化性溃疡各组和CGa组显著高于NACG组(P<0.05)。此外中重度胃炎胃液抗HpIgA的阳性率为76.6%，显著高于累度胃炎的40.0%(P<0.05)。
表4 各种胃部疾病胃液抗HpIgA结果
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病种 |
n |
X±S |
阳性数(%) |
|
ACG |
24 |
0.497(0.252) |
22(91.7) |
|
NACG |
21 |
0.162(0.161) |
7(33.3) |
|
GU |
15 |
0.281(0.212) |
10(66.7) |
|
DU |
15 |
0.269(0.208) |
12(80.0) |
|
CU |
3 |
0.567(0.298) |
2(66.7) |
|
GCa |
5 |
0.502(0.159) |
4(80.0) |
无论是完整的Hp菌还是超声粉碎提取的Hp抗原与Hp阳性血清共同温育后都能使血清中抗HpIgA和IgG效价明显下降，而用大肠杆菌和Cj吸收后的血清抗体仅有少许下降，此结果证明本试验具有特异性。
3 讨 论
本研究发现Hp阳性者血清抗HpIgA，IgG的阳性率显著高于Hp阴性者。与细菌学检查比较其敏感性、特异性和符合率高达95%～88%，与国外文献报道相似。吸收抑制试验证实本研究所用ELISA法测得的血清Hp抗体可定为特异的针对Hp的免疫反应。因此，ELISA阳性结果强有力支持Hp感染。本研究表明，血清中抗HpIgA、IgG密切反映了消化性溃疡的存在和胃炎的组织学变化。血清Hp抗体在ACG组的阳性率达90%以上，在消化性溃疡为67%和71%，而在NACG中为36%和38%。健康输血员血清中抗Hp抗体显著低于消化性溃疡和慢性胃炎。此外，中重度胃炎血清中Hp抗体的含量和阳性率显著高于轻度胃炎。上述结果表明Hp的血清检测可用来诊断Hp感染和用作筛选胃镜检查患者，这将有助于那些不宜做胃镜检查患者的诊断，并可用于Hp感染的流行病学调查及评价和追踪抗Hp治疗效果。
Hp寄居不但可引起宿主的全身免疫反应，而且引起胃肠道的局部免疫反应。本研究显示，Hp阳性者胃液中抗HpIgA显著高于Hp阴性者，与细菌学比较其敏感性、特异性和符合率高达96%至92%，高于国外文献报道。本研究结果还表明，胃液中抗HpIgA与消化性溃疡及胃炎的存在和组织变化密切相关。ACG组及消化性溃疡各组阳性率显著高于NACG组，中重度胃炎显著高于轻度胃炎。局部分泌性IgA的确切作用尚不清楚。本研究胃液内抗HpIgA检测的敏感性、特异性均高于血清学试验，这说明局部免疫反应与Hp感染的关系比全身免疫反应更为密切，故检测胃液内抗HpIgA可作为血清学试验的补充，两者结合可进一步提高Hp感染的免疫学诊断准确性。
谢 勇 王崇文 祝金泉 张昆和 周美珍
江西医学院第二附院(南昌 330006)
2000/07/18 姬颖 校对
, 百拇医药