HIV实验室检测方法及常见问题
HIV实验室检测方法及常见问题
中国疾病预防控制中心
性病艾滋病预防控制中心
潘品良
涉及的问题：
o检测方法
o窗口期
o新毒株(不同亚型)
实验室检测方法：
o检测病毒：HIV P24抗原，HIV DNA，HIV RNA，HIV分离培养等。
o检测病毒抗体：初筛、确认。
o检测HIV抗体是常规使用的HIV诊断方法，其他方法一般作为抗体检测方法的验证和补充。
o基因检测：env gag pol区
o不同亚型的测定
o细胞计数：CD4 CD8
HIV抗体检测：
o初筛检测
o确认实验
oHIV-2和HIV-1O群的检测
o尿液检测
快速法：
胶体金 渗滤法
层析法：间接、夹心
凝集PA HA
确认方法
免疫印迹法
条带印迹法
免疫荧光法
放免沉淀法
ELISA试剂原理
间接法：双抗原夹心，竞争抑制法
固相抗原，固相抗原，固相抗原
待检样品，待检样品，待检样品
酶标抗人Ig，酶标抗原，酶标抗HIV或Protein A
显 色 显 色 显 色
HIV抗体检测(ELISA法)：
o原理：间接法(第1代,第2代试剂)，双抗原夹心法(第3代试剂)。
o判断结果有客观依据(临界值)，可自动化操作。
o可检测多种标本(血清，血浆，唾液，尿液)
o是使用最广泛的方法
检测HIV抗体(快速法)：
o原理：间接法和双抗原夹心法
o标记物：胶体金或胶体硒
o优点：出结果快，操作简便，不需要复杂的实验室设备。
o适用于需要尽快得到结果的情况，如门诊，急诊，追踪意外暴露的传染源等等。
检测HIV抗原(P24)：
o方法学：ELISA抗体夹心法
o比抗体检出时间提前大约1周，进一步缩短窗口期。
o用途：
①婴儿或窗口期HIV感染的诊断。②献血员筛选。③监测疗效和病程进展。
P24抗原测定：
通常采用夹心法EIA，即将纯化的已知抗体包被在固相反应板孔底，当加入待测血清后，若血清中含有P24抗原则与包被抗体形成抗原-抗体复合物，再加入酶(HRP)标记的HIV抗体，在抗原上又结合了酶标记的抗体，加底物显色后，在酶标仪上读结果。
近年来为了提高检测血清中P24抗原的敏感性，将血清中免疫复合物解离后再进行测定，发展了ICD P24抗原(immun-complex disassociate，免疫复合物解离，ICD)。
同时检测P24抗原和HIV抗体
o第4代试剂
o包被和标记的分别是P24抗原的单克隆抗体，HIV-1gp160,HIV-1 O gp41，HIV-2 gp36.分别用以检出P24抗原，HIV-1 M群，O群和HIV-2的抗体。
o检出时间提前大约7天。
中国疾病预防控制中心
性病艾滋病预防控制中心
潘品良
涉及的问题：
o检测方法
o窗口期
o新毒株(不同亚型)
实验室检测方法：
o检测病毒：HIV P24抗原，HIV DNA，HIV RNA，HIV分离培养等。
o检测病毒抗体：初筛、确认。
o检测HIV抗体是常规使用的HIV诊断方法，其他方法一般作为抗体检测方法的验证和补充。
o基因检测：env gag pol区
o不同亚型的测定
o细胞计数：CD4 CD8
HIV抗体检测：
o初筛检测
o确认实验
oHIV-2和HIV-1O群的检测
o尿液检测
快速法：
胶体金 渗滤法
层析法：间接、夹心
凝集PA HA
确认方法
免疫印迹法
条带印迹法
免疫荧光法
放免沉淀法
ELISA试剂原理
间接法：双抗原夹心，竞争抑制法
固相抗原，固相抗原，固相抗原
待检样品，待检样品，待检样品
酶标抗人Ig，酶标抗原，酶标抗HIV或Protein A
显 色 显 色 显 色
HIV抗体检测(ELISA法)：
o原理：间接法(第1代,第2代试剂)，双抗原夹心法(第3代试剂)。
o判断结果有客观依据(临界值)，可自动化操作。
o可检测多种标本(血清，血浆，唾液，尿液)
o是使用最广泛的方法
检测HIV抗体(快速法)：
o原理：间接法和双抗原夹心法
o标记物：胶体金或胶体硒
o优点：出结果快，操作简便，不需要复杂的实验室设备。
o适用于需要尽快得到结果的情况，如门诊，急诊，追踪意外暴露的传染源等等。
检测HIV抗原(P24)：
o方法学：ELISA抗体夹心法
o比抗体检出时间提前大约1周，进一步缩短窗口期。
o用途：
①婴儿或窗口期HIV感染的诊断。②献血员筛选。③监测疗效和病程进展。
P24抗原测定：
通常采用夹心法EIA，即将纯化的已知抗体包被在固相反应板孔底，当加入待测血清后，若血清中含有P24抗原则与包被抗体形成抗原-抗体复合物，再加入酶(HRP)标记的HIV抗体，在抗原上又结合了酶标记的抗体，加底物显色后，在酶标仪上读结果。
近年来为了提高检测血清中P24抗原的敏感性，将血清中免疫复合物解离后再进行测定，发展了ICD P24抗原(immun-complex disassociate，免疫复合物解离，ICD)。
同时检测P24抗原和HIV抗体
o第4代试剂
o包被和标记的分别是P24抗原的单克隆抗体，HIV-1gp160,HIV-1 O gp41，HIV-2 gp36.分别用以检出P24抗原，HIV-1 M群，O群和HIV-2的抗体。
o检出时间提前大约7天。