结核病快速诊断的研究进展
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目前,全球结核病疫情较前恶化,有卷土重来之势。对结核病及时准确的诊断和治疗,是消除传染源、控制结核病流行的重要环节。目前诊断肺结核的主要方法是痰涂片染色镜检,结合X线胸片检查,继以结核分枝杆菌培养确认。但是,涂片检查敏感性差,分离培养结核杆菌时间过长,X线检查又往往缺乏特异性,用于基因诊断技术的PCR尚处于发展阶段,因此,建立敏感、特异、快速、低成本的快速检测方法十分重要。
目前结核病的快速诊断试剂盒种类和方法较多,可适应不同条件、不同层次的工作需要。但这些快速检测方法的灵敏性、特异性尚待提高。其成本价格影响普及性,也是一个值得考虑的问题。
随着结核病诊断技术的不断发展和创新,目前快速诊断试剂盒的不足将会得到改进,将会有更多、更好的快速诊断试剂盒应用于结核病的筛查和临床检测,使结核病能够得到更早的发现、更好的治疗和控制。
结明实验
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结明实验(MycoDot)是国内外使用较早、较普遍的结核抗体快速检测实验,即将脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)作为抗原固定于在电泳梳上,再将此附有抗原的电泳梳置于稀释的血清或全血中浸泡,标本中如有LAM抗体,则与梳上LAM抗原相结合,浸入显色液后,抗体金颗粒便会特异性地聚集在抗原抗体复合物上,在梳上附着抗原处形成红色圆形斑点,即为阳性。
结核菌细胞壁成份中含有阿拉伯甘露糖,因此只有当患者患活动性结核病时,才会有阳性反应。健康人、既往感染者(结素试验阳性)以及卡介苗接种者都显示为阴性。
在来自3个国家1602例患者的临床试验中,结明实验的总敏感性为70.2%,特异性为95.1%。Sada等应用结明实验检测结核感染的敏感性为72%,特异性为91%,二者结果相符。
在这一方法中,标本采集方便,方法简单、快速、可靠,可用肉眼判断实验结果、无需实验仪器,便于基层医院推广。
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免疫色谱层析抗结核菌抗体测试卡
免疫色谱层析抗结核菌抗体测试卡(ICT-TB卡)是一种免疫色谱法,用于检测血清中抗结核分枝杆菌抗体的体外免疫诊断实验。使用的抗原是结核分枝杆菌活动期产生的5种分泌性可溶性蛋白,其中,38 kDa抗原是一种参与磷酸盐代谢的细胞外脂蛋白,对结核分枝杆菌抗体包括复杂菌种型均敏感特异。
由于实验使用的抗原含有5种特异性抗原,故能测出IgG、IgM、IgA等不同抗体,提高了检测敏感性,弥补了宿主体液免疫反应的差异。国内一些学者应用这种方法对结核病的诊断价值进行探讨,提示其具有较高特异性,能快速检测结核抗体,对结核病的诊断及鉴别诊断具有较好临床价值,且操作简单、快速,适用于各级医院,尤其适用于对门诊患者做出快速诊断。
结核病诊断试剂盒
结核病诊断试剂盒(FD)采用结核分支杆菌的特异性抗原——脂阿拉伯甘露糖(LAM)为固相抗原,并以金溶胶为标记。其原理是将结核杆菌的特异性抗原LAM固定在特制载体上,当被检血清或全血中含有结核杆菌的特异性抗体(LAM-IgG)时,便与载体上的抗原结合为抗原复合物,这种复合物可与标记有“双抗”的金溶胶试剂作用,形成紫红色斑点。因此,实验结果呈紫红色斑点者为阳性,无紫红色斑点者为阴性。
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既往研究表明,FD检测阳性率为80%,特异性为94%,检测结果不受卡介苗接种的影响。FD检测简便、快速,且不需要专门技术和特殊设备,是用于结核病的诊断和鉴别诊断的一项辅助诊断方法,适用于在基层医疗单位推广使用。
斑点金标免疫渗滤法
斑点金标免疫渗滤法(DIGFA)是将固相人型结核分支杆菌蛋白衍生物(PPD)纯化抗原包被在斑点反应板上,其与体液中的抗结核分支杆菌抗体(PPD-IgG)形成复合物,胶体金标记抗人IgG或海藻硫酸多糖(SPA)与复合物结合,形成肉眼可见的红色斑点。
既往研究表明,斑点金标免疫渗滤法检测各类血清678份,敏感性为76.8%,特异性为91.5%。但受结核菌或其他分枝杆菌感染及卡介苗接种等影响,也可出现交叉反应,这种方法具有简便、快速,结果易于判读,无需特殊仪器,能进行单个标本的测定,受检患者可及时得到结果等特点,适用于基层医院诊断结核菌感染和进行流行病学调查。
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酶联免疫吸附法
由于酶联免疫吸附法(ELISA法)简便、易行、快速、无需特殊精密仪器,所以在结核病血清学诊断方面研究最多、应用最广。多项研究报告ELISA法检测结核抗体的敏感性为62%~94.7%,特异性为91.2%~94.0%。因观察对象不同、检测使用抗原不同、质量控制困难等,影响并导致了实验结果差异较大。但此法仍不失为结核病特别肺外结核诊断中有价值的实验室辅助检查之一。
结核杆菌抗体胶体金法诊断试剂盒
结核杆菌抗体胶体金法诊断(TB-DOT)试剂盒是用现代生物技术提纯结核分枝杆菌特异性外膜抗原,应用斑点金免疫渗滤试验(DIGFA)原理,并用定量标准色谱卡技术制作的TB-DOT试剂盒,用于活动性肺内外结核病IgG、IgM、IgA的检测。研究显示的灵敏性和特异性分别为85.5%和93.6%,与国内学者检测到灵敏性73.8%、特异性94.1%基本一致,因此,TB-DOT试剂盒是一种灵敏性和特异性较高的试剂盒。
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免疫胶体金标记技术
免疫胶体金标记技术(ICS)具有快速、简便、准确的特点,有助于提高诊断,适用于活动性结核病的诊断。这种方法可用于涂片培养阴性但有临床症状的患者,鉴别肺癌与其他肺部疾患,或动态观察结核病化疗效果。
但是,目前该方法检测成本较高,尚难用于结核病初筛,及在基层医疗单位普及应用。
B2~B3版
特约主任编委
解放军总医院第二附属医院 王巍
王巍 现任解放军总医院第二附属医院全军结核病研究所所长,主任医师,博士研究生导师。还担任中国防痨协会理事、中华医学会结核病分会常务委员、全军医学科学技术委员会传染病专业委员会副主任委员及全军结核病防治研究协作组组长等职。担任《中华结核和呼吸杂志》及《中国防痨杂志》等10余种学术期刊的编委。
王巍从事结核病和呼吸病临床医疗工作30余年,主要承担和参与国家和军队科研课题20余项,编写著作和教材6部,发表学术论文100余篇。获军队科技进步二等奖和医疗成果奖3项,北京科技进步奖1项,中华科技进步二等奖2项。, 百拇医药