·论者· ò基础研究ó

    天疱疮自身抗体的靶抗原研究

    刘金丽3

    ,张学军 ,杨春俊 ,王培光 ,王再兴 ,李卉 ,杨森

    [摘 要] 目的 了解天疱疮自身抗体的靶抗原及其在表皮的超微定位。方法 采用直接和间接免疫荧光( IF) 、免疫印迹( IB)及包埋后金标记间接免疫电镜(gold2IIEM)等方法检测 27 例天疱疮( PV 22 例 ,PF 5 例)血清与表皮抗原的

    结合情况。结果 27 例天疱疮直接和间接免疫荧光的阳性率分别为 100 %和 81. 5 % ,表现为表皮细胞间有亮绿色荧光标

    记物呈网状分布。21/ 22例 PV 血清与表皮提取物 130 kD分子结合 ,2/ 5 例 PF血清与表皮提取物 160kD分子结合。对

    11例天疱疮(9 例 PV ,2例 PF)血清的间接免疫电镜研究结果显示 ,金颗粒均沉积在桥粒部位。结论 PV 和 PF的靶抗

    原分别是表皮 130kD和 160kD抗原 ,其超微结构均定位于桥粒。免疫印迹检查可作为鉴别 PV 和 PF的重要辅助手段。

    [关键词] 天疱疮;自身抗体;靶抗原

    [中图分类号] R 758. 66 [文献标识码] A [文章编号] 1001 - 7089 (2004) 02 - 0065 - 04

    Study on the Target Antigen of Autoantibodies in Pemphigus

    L IU Jin2li ,ZHANG Xue2jun ,YANG Chun 2jun , et al

    ( Department of Dermatology , Fi rst A f f il iated Hospi tal , A nhui Medical Universi ty , Hef ei 230022 , China)

    Abstract : Objective To explore the target antigens of autoantibodies in pemphigus and their localization in e pidermis.

    Methods The binding of the antigens in the sera and epidermis in 27 patients ( PV22 ,PF5) was explored by immunoblot ting

    ( IB) ,direct or indirect immunofluorescense ( IF) and colloid gold labeled post - embedded indirect immunogold elect ron mi2

    croscopy (gold2IIEM) . Results Direct and indirect immunofluresence revealed de posits on the surface of keratinocytes in the epi2

    dermis. The positive rate was 100 % and 81. 5 % ,res pectively. When all the sera were analyzed by immunoblot ting technique with

    ext racts f rom separated epidermis ,21/ 22 PV sera reacted with a single protein having an apparent molecular weight of 130kD. In

    cont rast ,2/ 5 PF sera reacted with a protein of approximately 160kD. Gold labeling goat anti2human IgG were observed bound

    predominantly to the normal desmosome by indirect immunoelect ron microscopy. Conclusion PV antigen is a 130kD protein and

    PF antigen is a 160kD protein. The target antigen of autoantibody in pemphigus locates to desmosome in ult rast ructure level . Im2

    munoblot ting is a most important method to differentiate PV f rom PF.

    Key words : Pemphigus ;Autoantibody ; Target antigen

    天疱疮是一种累及皮肤和粘膜的自身免疫性大疱

    性皮肤病 ,患者的皮肤粘膜和外周血中均存在抗表皮

    细胞间物质的自身抗体。免疫印迹(immunoblot ting ,IB) 、免疫荧光 ( immunofluoresce2nce , IF) 、免疫电镜

    (immunoelect ron microscopy , IEM)等技术方法可分别

    用于分析天疱疮自身抗体的靶抗原及其超微定位 ,本

    文综合应用这些方法系统分析天疱疮的靶抗原 ,可较

    全面地反应其生物学特性。

    1 材料和方法

    1. 1 临床资料 天疱疮 27 例 ,均为我科近年来收住

    院的病人 ,经临床、普通病理和免疫病理检查确诊。其

    [基金项目] 安徽省自然科学基金(97424005)

    [作者单位] 安徽医科大学皮肤病研究所,第一附属医院皮肤科,安

    徽 合肥 230022 ; 3 现在安徽省立医院皮肤科工作,安徽 合肥

    230001

    [作者简介] 刘金丽(1975 - ) ,女,安徽淮北市人,医师,医学硕士,主要从事自身免疫性大疱性皮肤病的靶抗原研究。

    [通讯作者] 杨森,E2mail :ayzxj @mail . hf . ah. cn

    中寻常型天疱疮( PV) 22 例 ,落叶型天疱疮( PF) 5 例 ,男 13 例 ,女 14 例 ,平均年龄 49. 9 岁(17～76 岁) 。

    1. 2 标本采集 患者外周血 10 ml 离心后收集血清 ,皮损周围正常皮肤用 OCT 包埋后贮存于 - 80 ℃冰箱

    中备用 ,另抽取 2 例健康人、 2 例大疱性类天疱疮(BP)

    患者血清作为阴性对照。用作 IIF、 IB 及金标记间接

    免疫电镜(gold2IIEM)底物的皮肤标本取自本院整形

    外科手术切除的正常人皮肤。

    1. 3 试剂 兔抗人 IgG/ HRP 为 Sigma 进口分装产

    品 ,荧光标记的兔抗人 IgG、 IgM、 IgA、 C3 及 10 nm 胶

    体金标记羊抗人 IgG购自上海华美公司。其余试剂

    均为自配。

    1. 4 方法

    1. 4. 1 DIF 天疱疮患者皮损周围正常皮肤 6μm 厚

    冷冻切片 ,荧光标记的兔抗人 IgG、 IgM、 IgA、 C3 37 ℃

    孵育 30 min ,PBS清洗 ,干燥后荧光显微镜下观察。

    1. 4. 2 IIF 正常人皮肤标本 6μm厚冷冻切片 ,待检

    血清 37 ℃孵育 30 min , PBS清洗 ,兔抗人 IgG/ FITC、· 56 · 中国皮肤性病学杂志2004 年2 月第18 卷第2 期 Chin J Derm Venereol ,Feb. 2004 ,Vol . 18 ,No. 2IgM/ FITC、 IgA/ FITC 37 ℃孵育 30 min ,PBS清洗 ,干

    燥后荧光显微镜下观察 ......