先天性尿道下裂小鼠模型的制备及注意问题.PDF
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参见附件(170kb)。
第22卷 第3期
2005年9月
实验动物科学与管理
LABORATORYANIMAL SCIENCE AND MANAGEMENT
Vol . 22 No. 3
September 2005
研究·观察
先天性尿道下裂小鼠模型的制备及注意问题
任连生1
李燕玲2
张 蕻3
韩雪冰4
白喜花1
(11山西省肿瘤研究所动物实验室,太原 030013) (2.中国辐射防护研究院,太原 030006)
(31山西省药品检验所,太原 030001) (4.山西医科大学,太原 030001)
摘要: 目的 通过人工干预怀孕母鼠体内雄激素受体 ,造成雄性幼鼠先天性尿道下裂模型 ,探索造模所需的最佳
给药时间及剂量。方法 昆明种小鼠 ,从受孕后第15d开始灌胃给予氟丁酰胺(Flutamide) ,连续给药 5d ,剂量分别
为6617mg、 13313mg、 20010mg、 26617mg及33313mg/ kg ,停药后待其自然分娩 ,于仔鼠出生后第21d观察雄性幼鼠外生
殖器突起的形态变化。结果 13313mg/ kg及以下剂量组雄性幼鼠外生殖器无明显异常;20010mg剂量组雄性小鼠
外生殖器突起顶部发生明显裂口 ,畸形率达8616 %;26617gm/ kg剂量组雄性小鼠外生殖器与雌性小鼠非常相似 ,阴
囊部生毛 ,睾丸不外突 ,呈隐睾状。畸形率达到 8313 %;33313mg/ kg剂量组雄性小鼠外生殖器突起向后完全裂开 ,在肛门侧形成一个类似阴道的结构。结论 昆明种小鼠从受孕后第 15d开始灌胃给予 26617mg/ kg～33313 mg/ kg
氟丁酰胺 ,连续给药5d ,可造成80 %以上的雄性幼鼠先天性尿道下裂模型。
关键词: 先天性尿道下裂;昆明小鼠;氟丁酰胺
中图分类号:R695 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6179(2005) 0320004203
收稿日期:2005201210
作者简介:任连生(1953 - ) ,男 ,研究员 ,研究方向:医学实验动物及动物模型
通讯地址:山西省太原市职工新街3号 ,山西省肿瘤研究所动物实验室 ,邮编:030013 E-mail :liansheng. ren @163. com
尿道下裂是临床常见的先天性发育异常疾病
之一 ,近年来发病率有不断上升的趋势。建立先天
性尿道下裂动物模型可为该病的病因学及治疗学研
究提供有价值的实验材料。导致该病发生的因素有
环境因素、内分泌因素及基因因素等[1 ]。我们采用
灌胃给予氟丁酰胺干扰体内雄激素的正常作用 ,成
功地造出先天性尿道下裂小鼠模型 ,报道如下。
1 材料和方法
111 材料
11111 实验动物:清洁级昆明小鼠 ,10周龄 ,雌雄兼
用 ,购自山西省中医药研究院动物室(动物合格证
号:晋动(证)字 ,第 A00 - 001) 。动物饲养在 YX型
实验动物洁净柜 ,饲喂全价灭菌饲料 ,自由采食饮
水。室内照明采用 12/ 12h 明暗交替。实验室温度
22 ℃± 2 ℃,相对湿度 40 %～60 % ,动物实验环境条
件符合 GB14925 - 2001屏障环境中标准。
11112 仪器和药物:日本 Olympus 解剖镜; KODAK-
DC3400相机。氟丁酰胺(又名氟他胺、缓退瘤) 片
剂 ,每片含量为 250mg。由 Schering- Plough (Canada)
经先灵葆雅公司授权生产(批号20021112) 。给药前
将药片研成细粉 ,将所给药物溶入 014mL 蒸馏水
中 ,灌胃给药。给药量按氟丁酰胺含量计算。
112 实验方法
11211 动物交配:将动物按雌雄比例 3∶ 1 于下午 5
时合笼饲养 ,到次日上午8时 ,选择可观察到阴栓雌
鼠分笼饲养 ,作为计时的第1d。
11212 给药:饲养到第 15d 时 ,将孕鼠随机分为 6
组 ,每组两只 ,称重后按不同剂量组(见表 1)给药 ,每日一次 ,连续5d ,对照组给予014mL 蒸馏水。
11213 观察方法及判定标准:给药后动物常规饲
养 ,待其自然分娩。出生后第 21d ,将雄性小鼠挑
出 ,分别用肉眼或借助解剖镜观察各组雄性幼鼠外
生殖器的形态 ,按以下四个等级判定: (1) 0 级:未畸
变 ,外生殖器突起大小及形态基本正常 ,无明显裂
痕 ,外观与对照组相似。(2) 1 级:轻度畸变 ,生殖器
突起顶部出现明显裂口 ,外观呈“M”形。(3) 2 级:中
度畸变 ,生殖器突起明显变小 ,有裂痕 ,阴囊部生毛 ,睾丸不外突 ,隐睾 ,呈雌性外观。(4) 3 级:重度畸
变 ,生殖器突起完全向后方裂开 ,尿道口开向肛门
侧 ,隐睾并形成假阴道样凹陷结构。
? 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.2 结果
不同剂量氟丁酰胺对雄性幼鼠尿道下裂形成影
响不一 ,见表1。
表1 不同剂量氟丁酰胺对雄性幼鼠尿道下裂形成的影响
组别 产仔数
(只)
雄仔数
(只)
畸形鼠数
0级 1级 2级 3级
畸形率
( %)
对照组 18 9 9 0 0 0 0
6617 mg 22 10 10 0 0 0 0
13313 mg 20 10 10 0 0 0 0
20010 mg 25 15 2 13 0 0 86. 6
26617 mg 13 6 1 0 5 0 83. 3
333. 3 mg 17 7 0 0 1 6 100
13313mg/ kg及以下剂量组雄性幼鼠生殖器外
观未发生畸变(图1、图2) ,与对照组(图3)比较无明
显异常;
图1 6617mgP Kg剂量组雄性小鼠生殖器外形,生殖器突起明显
图2 13313mgP Kg剂量组 ,外生殖器无明显变化
图3 对照组生殖器外观全貌 ,睾丸外突明显
200mgP kg剂量组15只雄性幼鼠中有 13 只产生
畸变 ,但均为轻度畸变 ,仅见到生殖器突起顶部有豁
口 ,突起大小基本正常 ,睾丸外突明显(图4) 。
图4 200mgP Kg剂量组 ,生殖器突起部产生明显凹痕
26617mgP kg剂量组6只雄性幼鼠中有 5 只表现
为中度畸变 ,生殖器突起明显变小 ,有裂痕 ,阴囊部
生毛 ,隐睾 ,外观与雌性相似(图5) 。
图5 生殖器突起变小 ,隐睾 ,外观呈现雌性特征
33313mgP kg剂量组7只雄性幼鼠中有 1 只为中
度畸变 ,6 只为重度畸变。表现为生殖器突起向后
方深度裂开 ,在肛门有一个深的凹陷 ,形成假阴道结
构 ,尿道口开向后方(图6) 。
图6 生殖器突起裂开 ,尿道向后开口 ,形成假阴道
3 讨论
先天性尿道下裂动物模型的制备 ,经检索中国
生物医学文献数据库(CBMDISC)及中国医院知识仓
库(CHKD) ,尚未见相关研究报导 ......
2005年9月
实验动物科学与管理
LABORATORYANIMAL SCIENCE AND MANAGEMENT
Vol . 22 No. 3
September 2005
研究·观察
先天性尿道下裂小鼠模型的制备及注意问题
任连生1
李燕玲2
张 蕻3
韩雪冰4
白喜花1
(11山西省肿瘤研究所动物实验室,太原 030013) (2.中国辐射防护研究院,太原 030006)
(31山西省药品检验所,太原 030001) (4.山西医科大学,太原 030001)
摘要: 目的 通过人工干预怀孕母鼠体内雄激素受体 ,造成雄性幼鼠先天性尿道下裂模型 ,探索造模所需的最佳
给药时间及剂量。方法 昆明种小鼠 ,从受孕后第15d开始灌胃给予氟丁酰胺(Flutamide) ,连续给药 5d ,剂量分别
为6617mg、 13313mg、 20010mg、 26617mg及33313mg/ kg ,停药后待其自然分娩 ,于仔鼠出生后第21d观察雄性幼鼠外生
殖器突起的形态变化。结果 13313mg/ kg及以下剂量组雄性幼鼠外生殖器无明显异常;20010mg剂量组雄性小鼠
外生殖器突起顶部发生明显裂口 ,畸形率达8616 %;26617gm/ kg剂量组雄性小鼠外生殖器与雌性小鼠非常相似 ,阴
囊部生毛 ,睾丸不外突 ,呈隐睾状。畸形率达到 8313 %;33313mg/ kg剂量组雄性小鼠外生殖器突起向后完全裂开 ,在肛门侧形成一个类似阴道的结构。结论 昆明种小鼠从受孕后第 15d开始灌胃给予 26617mg/ kg～33313 mg/ kg
氟丁酰胺 ,连续给药5d ,可造成80 %以上的雄性幼鼠先天性尿道下裂模型。
关键词: 先天性尿道下裂;昆明小鼠;氟丁酰胺
中图分类号:R695 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6179(2005) 0320004203
收稿日期:2005201210
作者简介:任连生(1953 - ) ,男 ,研究员 ,研究方向:医学实验动物及动物模型
通讯地址:山西省太原市职工新街3号 ,山西省肿瘤研究所动物实验室 ,邮编:030013 E-mail :liansheng. ren @163. com
尿道下裂是临床常见的先天性发育异常疾病
之一 ,近年来发病率有不断上升的趋势。建立先天
性尿道下裂动物模型可为该病的病因学及治疗学研
究提供有价值的实验材料。导致该病发生的因素有
环境因素、内分泌因素及基因因素等[1 ]。我们采用
灌胃给予氟丁酰胺干扰体内雄激素的正常作用 ,成
功地造出先天性尿道下裂小鼠模型 ,报道如下。
1 材料和方法
111 材料
11111 实验动物:清洁级昆明小鼠 ,10周龄 ,雌雄兼
用 ,购自山西省中医药研究院动物室(动物合格证
号:晋动(证)字 ,第 A00 - 001) 。动物饲养在 YX型
实验动物洁净柜 ,饲喂全价灭菌饲料 ,自由采食饮
水。室内照明采用 12/ 12h 明暗交替。实验室温度
22 ℃± 2 ℃,相对湿度 40 %～60 % ,动物实验环境条
件符合 GB14925 - 2001屏障环境中标准。
11112 仪器和药物:日本 Olympus 解剖镜; KODAK-
DC3400相机。氟丁酰胺(又名氟他胺、缓退瘤) 片
剂 ,每片含量为 250mg。由 Schering- Plough (Canada)
经先灵葆雅公司授权生产(批号20021112) 。给药前
将药片研成细粉 ,将所给药物溶入 014mL 蒸馏水
中 ,灌胃给药。给药量按氟丁酰胺含量计算。
112 实验方法
11211 动物交配:将动物按雌雄比例 3∶ 1 于下午 5
时合笼饲养 ,到次日上午8时 ,选择可观察到阴栓雌
鼠分笼饲养 ,作为计时的第1d。
11212 给药:饲养到第 15d 时 ,将孕鼠随机分为 6
组 ,每组两只 ,称重后按不同剂量组(见表 1)给药 ,每日一次 ,连续5d ,对照组给予014mL 蒸馏水。
11213 观察方法及判定标准:给药后动物常规饲
养 ,待其自然分娩。出生后第 21d ,将雄性小鼠挑
出 ,分别用肉眼或借助解剖镜观察各组雄性幼鼠外
生殖器的形态 ,按以下四个等级判定: (1) 0 级:未畸
变 ,外生殖器突起大小及形态基本正常 ,无明显裂
痕 ,外观与对照组相似。(2) 1 级:轻度畸变 ,生殖器
突起顶部出现明显裂口 ,外观呈“M”形。(3) 2 级:中
度畸变 ,生殖器突起明显变小 ,有裂痕 ,阴囊部生毛 ,睾丸不外突 ,隐睾 ,呈雌性外观。(4) 3 级:重度畸
变 ,生殖器突起完全向后方裂开 ,尿道口开向肛门
侧 ,隐睾并形成假阴道样凹陷结构。
? 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.2 结果
不同剂量氟丁酰胺对雄性幼鼠尿道下裂形成影
响不一 ,见表1。
表1 不同剂量氟丁酰胺对雄性幼鼠尿道下裂形成的影响
组别 产仔数
(只)
雄仔数
(只)
畸形鼠数
0级 1级 2级 3级
畸形率
( %)
对照组 18 9 9 0 0 0 0
6617 mg 22 10 10 0 0 0 0
13313 mg 20 10 10 0 0 0 0
20010 mg 25 15 2 13 0 0 86. 6
26617 mg 13 6 1 0 5 0 83. 3
333. 3 mg 17 7 0 0 1 6 100
13313mg/ kg及以下剂量组雄性幼鼠生殖器外
观未发生畸变(图1、图2) ,与对照组(图3)比较无明
显异常;
图1 6617mgP Kg剂量组雄性小鼠生殖器外形,生殖器突起明显
图2 13313mgP Kg剂量组 ,外生殖器无明显变化
图3 对照组生殖器外观全貌 ,睾丸外突明显
200mgP kg剂量组15只雄性幼鼠中有 13 只产生
畸变 ,但均为轻度畸变 ,仅见到生殖器突起顶部有豁
口 ,突起大小基本正常 ,睾丸外突明显(图4) 。
图4 200mgP Kg剂量组 ,生殖器突起部产生明显凹痕
26617mgP kg剂量组6只雄性幼鼠中有 5 只表现
为中度畸变 ,生殖器突起明显变小 ,有裂痕 ,阴囊部
生毛 ,隐睾 ,外观与雌性相似(图5) 。
图5 生殖器突起变小 ,隐睾 ,外观呈现雌性特征
33313mgP kg剂量组7只雄性幼鼠中有 1 只为中
度畸变 ,6 只为重度畸变。表现为生殖器突起向后
方深度裂开 ,在肛门有一个深的凹陷 ,形成假阴道结
构 ,尿道口开向后方(图6) 。
图6 生殖器突起裂开 ,尿道向后开口 ,形成假阴道
3 讨论
先天性尿道下裂动物模型的制备 ,经检索中国
生物医学文献数据库(CBMDISC)及中国医院知识仓
库(CHKD) ,尚未见相关研究报导 ......
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