通心络对人体外周血EPC增殖、迁移和黏附功能的影响(三)
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为研究中药通心络对体外培养的人体外周血内皮祖细胞(EPC)增殖的影响,上海第二军医大学长征医院梁小卫、孙承波、王华、梁春、吴宗贵等通过观察通心络对体外培养的外周血EPC增殖影响的时效与量效关系,明确通心络治疗心血管疾病的临床疗效是否与其影响EPC相关,进一步探讨该药治疗冠心病的机制。
通心络促进人体外周血内皮祖细胞增殖的实验研究
梁小卫等采用超声溶解方法制备通心络超微粉溶液,通过密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,培养7 天后,洗去非贴壁细胞;采用激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的血管内皮祖细胞(EPC),并进一步通过流式细胞仪检测其表面标志;贴壁细胞分别加入10、20、50、100、150、200 μl的通心络超微粉溶液以不同时间(0、6、12、24、36 小时)继续培养;通过观察细胞形态及采用MTT比色法检测通心络对EPC增殖的影响。
, http://www.100md.com 各组实验重复测量5次,计量资料用均数±标准差( X±S)表示,采用SPSS11.0软件进行统计学处理,采用多个样本均数间比较的方差分析, 组间的差异采用t检验,α=0.05为显著性检验水准。
他们的研究获得预期结果。有关EPC的鉴定、流式细胞仪检测贴壁细胞表达CD34和CD133、EPC的生长及形态学改变,均与上述该院梁小卫等的通心络对人体外周血EPC迁移和黏附功能影响的研究结果相一致。通心络对EPC增殖影响的研究结果如下:
1. 不同浓度通心络对外周血内皮祖细胞增殖的影响(图1,表1)
通过MTT比色法检测通心络对EPC增殖功能的影响,结果显示,与对照组比较,经不同浓度通心络(20、50、100、150 μl)培养36 小时后,外周血EPC的增殖能力均明显增强(P<0.05),尤其是100 μl组达到最大值,增殖率为54.18%,但 200 μl组增殖能力明显低于其他各组,与对照组无明显差异。这提示,较高浓度的通心络对细胞存在一定毒性作用。组间比较通心络10 μl组与对照组无明显差异(P>0.05),其余各组与前一浓度组均有显著差异(P<0.05)。
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2. 100 μl通心络对外周血内皮祖细胞增殖的影响(图2, 表2)
根据量效关系的研究结果,采用100 μl的通心络进行时效作用的研究。研究结果显示,EPC增殖能力随着时间推移逐渐增强,其中100 μl通心络组6、12 小时EPC的扩增明显高于对照组(P<0.05),且24、36 小时时与对照组相比存在显著统计学差异(均P<0.01),36 小时达到高峰,条件培养基中各组间均存在显著差异(P<0.05)。以上结果表明,100 μl通心络对外周血EPC增殖的影响存在明显时效关系。
该实验利用MTT法观察了通心络对人EPC增殖的作用。由于MTT为活细胞所摄取,能够真实反映通心络对EPC增殖的影响,同时整个过程在96孔板上原位进行,使实验技术误差减小,利用酶标仪可一次观察多组不同浓度的通心络对EPC增殖的作用,该方法快速、准确、操作简便。
他们的研究结论是:通心络能显著增加体外培养的外周血来源的EPC数量,100 μl作用36 小时达到最大效应(增殖率为54.18% ,P<0.01),但随着浓度的增加,通心络对EPC增殖作用的影响下降,提示通心络能显著改善外周血EPC的增殖能力,在一定浓度范围内呈明显的时效与量效关系。通心络通过影响EPC数量,促进血管新生和内皮损伤后的修复过程,从而改善动脉粥样硬化性疾病的临床表现和预后。(未完待续)
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图1 不同浓度通心络干预36 小时对EPC增殖能力影响的量效关系增殖曲线
图2 100 μl通心络影响EPC增殖能力变化的时效关系增殖曲线
表1 不同浓度通心络干预36小时对EPC增殖能力(A490 nm)与增殖率的影响
组别 对照组 10 μl 20 μl 50 μl 100 μl 150 μl 200 μl
OD值 0.371±0.045 0.390±0.036 0.455±0.042* 0.502±0.045** 0.572±0.033** 0.446±0.036* 0.388±0.049
, 百拇医药
增殖率 4.87 22.64 35.31 54.18 20.22 4.58
(%)
与对照组比较*P<0.05,**P<0.01
表2 100 μl通心络影响EPC增殖能力(A490 nm)变化的时效关系
组别 0 6 h 12 h 24 h 36 h
对照组(OD值)0.385±0.0420.388±0.0240.396±0.0260. 394±0.0330.397±0.042
100 μl通心络(OD值)0.392±0.0330.457±0.046*0.493±0.040*0.527±0.039**0.572±0.033**
增殖率(%) 1.8 17.78 24.49 33.7645.92
与对照组比较 *P<0.05,**P<0.01, http://www.100md.com