通心络对人体外周血EPC增殖、迁移和黏附功能的影响(四)
他们的研究获得预期结果。
1. 单个核细胞的分离、诱导分化及鉴定
单个核细胞接种后,24 h内细胞开始贴壁,48~72 h可见呈集落生长及分化。4 d集落明显,8 d时部分细胞呈梭形。激光共聚焦扫描显微镜观察发现,90%以上的细胞摄取DiI-Ac-LDL,并结合FITC-UEA-I。流式细胞仪检测发现CD133阳性率为0.835±0.053;VEGF-R2阳性率0.832±0.082;CD34阳性率为0.862±0.062。
2. 通心络超微粉溶液的内毒素测定
按照显色机制鲎试剂盒使用说明进行内毒素测定,经计算内毒素水平为0.30 EU/ml。
3. 通心络抑制AGE-HSA诱导的内皮祖细胞(EPC) p38、Erk MAPK通路激活及RAGE表达的影响(图1见上期,图2,表1)
, 百拇医药
通心络超微粉溶液可以抑制由糖基化人血清白蛋白(AGE-HSA)诱导的EPC MAPK信号通路的激活,与50、200 μl/ml组比较,通心络100 μl/ml组能够更显著地抑制p38、Erk MAPK信号通路的激活(P<0.001),而对于Jnk MAPK通路各浓度通心络组之间差异无统计学意义。
p38 MAPK 抑制剂SB203580、Erk-MAPK抑制剂PD98059和通心络100 μl/ml超微粉溶液可以抑制由AGE-HSA刺激引起的晚期糖基化终产物受体(RAGE)表达(P<0.001),Jnk-MAPK 抑制剂SP600125则无此作用(P<0.05)。
4. 通心络对AGE-HSA诱导的EPC存活的影响
经流式细胞仪分析显示,与空白对照组、SB203580组、通心络100 μl/ml组比较,AGE-HSA组EPC增殖率显著降低(P<0.001),与PD98059组比较也明显降低(P<0.05);通心络100 μl/ml组EPC增殖率显著高于通心络50、200 μl/ml组(P<0.05)(图3)。
, 百拇医药
与空白对照组、SB203580组、PD98059组、通心络100 μl/ml组比较,单纯AGE-HSA处理组细胞凋亡率显著增高(P<0.001)。通心络100 μl/ml组EPC凋亡率显著低于通心络50、200 μl/ml组(P<0.05)(图4)。
糖尿病患者循环血EPC的数量减少,黏附、迁移、再生能力受损。对2型糖尿病患者的循环EPC体外培养发现,其对肿瘤坏死因子α(TNF-α)激活的人脐静脉内皮细胞的黏附能力下降。1型糖尿病患者的循环血EPC也存在类似情况。最近的研究发现,在体外高糖状况下和TNF-α通过激活EPC内的p38-MAPK而下调EPC的数量,p38-MAPK特异性抑制剂SB203580可逆转这种作用。
某些药物如他汀类药物、雌激素,运动、缺血及血管内皮损伤等因素可以促进EPC由骨髓动员到外周血并整合到损伤或缺血部位,修复损伤及参与血管新生。他们的前期研究也发现,一定浓度的通心络超微粉溶液可以增加EPC的活力,并促进EPC的迁移。
, http://www.100md.com
他们的研究观察到一定浓度的通心络溶液可以抑制AGE-HSA诱导的EPC MAPK信号通路的激活,通过抑制p38、Erk-MAPK信号通路的激活下调EPC RAGE的表达,这是他们发现的通心络抑制AGE-HSA诱导的EPC凋亡,促进其增殖的机制之一,这也是通心络抑制糖尿病血管病变的可能机制之一。
他们的结论是:通心络抑制AGE-HSA诱导的EPC MAPK信号通路的激活,并通过抑制p38、Erk-MAPK信号通路的激活下调EPC RAGE的表达,从而抑制AGE-HSA诱导的EPC凋亡,促进其增殖。而不同浓度通心络的作用存在差异,可能与通心络的复方组分有关。
[参考文献从略,本文(三)见7月17日A7版]
表1 通心络抑制AGE-HSA诱导的EPC p38、Erk MAPK通路激活(X±S)
灰度比值空白对照AGE-HSATXL50TXL100TXL200
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p38/GAPDH0.561±0.028*0.718±0.0350.415±0.025*△0.267±0.028*△▲0.512±0.066*
Erk/ GAPDH0.654±0.011*1.161±0.0770.722±0.061*0.167±0.015*△▲0.980±0.125
Jnk/GAPDH1.590±0.126*2.260±0.1041.067±0.062*△1.047±0.058*△1.197±0.162*△
与AGE-HSA 比较*P<0.001,与空白对照比较△P<0.001, 与通心络50、200 μl/ml比较▲P<0.001,n=3
图2 通心络抑制AGE-HSA诱导的EPC RAGE表达
与SP600125、AGE-HSA比较*P<0.001,与PD98059比较△P<0.001,与空白对照、通心络100 μl/ml比较▲P<0.05;X±S,n=3
图3 不同浓度通心络对AGE-HSA诱导的EPC增殖的影响
与空白对照、SB203580、通心络100 μl/ml组比较*P<0.001,与PD98059组比较△P<0.05,与通心络50、200 μl/ml 比较▲P<0.05,X±S,n=3
图4 通心络对AGE-HSA诱导的EPC凋亡的影响
与AGE-HAS组比较 *P<0.001,与通心络50、200 μl/ml组比较△P<0.05,X±S, n=3, 百拇医药
1. 单个核细胞的分离、诱导分化及鉴定
单个核细胞接种后,24 h内细胞开始贴壁,48~72 h可见呈集落生长及分化。4 d集落明显,8 d时部分细胞呈梭形。激光共聚焦扫描显微镜观察发现,90%以上的细胞摄取DiI-Ac-LDL,并结合FITC-UEA-I。流式细胞仪检测发现CD133阳性率为0.835±0.053;VEGF-R2阳性率0.832±0.082;CD34阳性率为0.862±0.062。
2. 通心络超微粉溶液的内毒素测定
按照显色机制鲎试剂盒使用说明进行内毒素测定,经计算内毒素水平为0.30 EU/ml。
3. 通心络抑制AGE-HSA诱导的内皮祖细胞(EPC) p38、Erk MAPK通路激活及RAGE表达的影响(图1见上期,图2,表1)
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通心络超微粉溶液可以抑制由糖基化人血清白蛋白(AGE-HSA)诱导的EPC MAPK信号通路的激活,与50、200 μl/ml组比较,通心络100 μl/ml组能够更显著地抑制p38、Erk MAPK信号通路的激活(P<0.001),而对于Jnk MAPK通路各浓度通心络组之间差异无统计学意义。
p38 MAPK 抑制剂SB203580、Erk-MAPK抑制剂PD98059和通心络100 μl/ml超微粉溶液可以抑制由AGE-HSA刺激引起的晚期糖基化终产物受体(RAGE)表达(P<0.001),Jnk-MAPK 抑制剂SP600125则无此作用(P<0.05)。
4. 通心络对AGE-HSA诱导的EPC存活的影响
经流式细胞仪分析显示,与空白对照组、SB203580组、通心络100 μl/ml组比较,AGE-HSA组EPC增殖率显著降低(P<0.001),与PD98059组比较也明显降低(P<0.05);通心络100 μl/ml组EPC增殖率显著高于通心络50、200 μl/ml组(P<0.05)(图3)。
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与空白对照组、SB203580组、PD98059组、通心络100 μl/ml组比较,单纯AGE-HSA处理组细胞凋亡率显著增高(P<0.001)。通心络100 μl/ml组EPC凋亡率显著低于通心络50、200 μl/ml组(P<0.05)(图4)。
糖尿病患者循环血EPC的数量减少,黏附、迁移、再生能力受损。对2型糖尿病患者的循环EPC体外培养发现,其对肿瘤坏死因子α(TNF-α)激活的人脐静脉内皮细胞的黏附能力下降。1型糖尿病患者的循环血EPC也存在类似情况。最近的研究发现,在体外高糖状况下和TNF-α通过激活EPC内的p38-MAPK而下调EPC的数量,p38-MAPK特异性抑制剂SB203580可逆转这种作用。
某些药物如他汀类药物、雌激素,运动、缺血及血管内皮损伤等因素可以促进EPC由骨髓动员到外周血并整合到损伤或缺血部位,修复损伤及参与血管新生。他们的前期研究也发现,一定浓度的通心络超微粉溶液可以增加EPC的活力,并促进EPC的迁移。
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他们的研究观察到一定浓度的通心络溶液可以抑制AGE-HSA诱导的EPC MAPK信号通路的激活,通过抑制p38、Erk-MAPK信号通路的激活下调EPC RAGE的表达,这是他们发现的通心络抑制AGE-HSA诱导的EPC凋亡,促进其增殖的机制之一,这也是通心络抑制糖尿病血管病变的可能机制之一。
他们的结论是:通心络抑制AGE-HSA诱导的EPC MAPK信号通路的激活,并通过抑制p38、Erk-MAPK信号通路的激活下调EPC RAGE的表达,从而抑制AGE-HSA诱导的EPC凋亡,促进其增殖。而不同浓度通心络的作用存在差异,可能与通心络的复方组分有关。
[参考文献从略,本文(三)见7月17日A7版]
表1 通心络抑制AGE-HSA诱导的EPC p38、Erk MAPK通路激活(X±S)
灰度比值空白对照AGE-HSATXL50TXL100TXL200
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p38/GAPDH0.561±0.028*0.718±0.0350.415±0.025*△0.267±0.028*△▲0.512±0.066*
Erk/ GAPDH0.654±0.011*1.161±0.0770.722±0.061*0.167±0.015*△▲0.980±0.125
Jnk/GAPDH1.590±0.126*2.260±0.1041.067±0.062*△1.047±0.058*△1.197±0.162*△
与AGE-HSA 比较*P<0.001,与空白对照比较△P<0.001, 与通心络50、200 μl/ml比较▲P<0.001,n=3
图2 通心络抑制AGE-HSA诱导的EPC RAGE表达
与SP600125、AGE-HSA比较*P<0.001,与PD98059比较△P<0.001,与空白对照、通心络100 μl/ml比较▲P<0.05;X±S,n=3
图3 不同浓度通心络对AGE-HSA诱导的EPC增殖的影响
与空白对照、SB203580、通心络100 μl/ml组比较*P<0.001,与PD98059组比较△P<0.05,与通心络50、200 μl/ml 比较▲P<0.05,X±S,n=3
图4 通心络对AGE-HSA诱导的EPC凋亡的影响
与AGE-HAS组比较 *P<0.001,与通心络50、200 μl/ml组比较△P<0.05,X±S, n=3, 百拇医药