胆红素检测.ppt
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参见附件(1579kb)。
胆红素检测: 传统的和其它
Phillip R. Bach, Ph.D.
Primary Children's Medical Center
Salt Lake City, Utah
It doesn't take a rocket scientist...
* Pretty basic stuff.
* Most recent refer-ence in bibliography is from 1998.
* But these issues are at the top of my FAQ list.
* In med school you learn TBil and DBil and that's all.
目的
* 被HPLC分离的胆红素分子类型。
* 检测胆红素的传统和非传统方法。
* 每个检测的或计算的组分分子类型。
目的
* 了解传统和非传统的胆红素检测结果不同的临床应用。
* 光线对胆红素的影响。接受光治疗患者和标本的光降解，对传统和非传统方法结果的影响。
胆红素的结构
* 各胆红素分子上的甲基 (Me) 和乙烯基 (CH2=CH) 有所不同。
* 羧基被结合。
* 折叠的结构几乎不溶于水。
HPLC分离的胆红素各组分
巨细胞肝炎婴儿血清
* ? = 游离胆红素
* ? = 单葡萄糖醛酸酯结合胆红素
* ??= 双葡萄糖醛酸酯结合胆红素
* ? = 和白蛋白共价结合胆红素
△胆红素
* 在血液循环中结合胆红素和白蛋白形成的。
* 白蛋白缓慢地非酶作用置换了原葡萄糖醛酸酯。类似于糖化血红蛋白。
* 在长期的高结合胆红素血症后，才能检测出来。
* 在血液循环中的清除缓慢。半衰期和白蛋白一样，2～3周。
传统的胆红素检测方法
* 偶氮方法 (Ehrlich 1883).
* 由 van den Bergh and Muller (1916)应用于胆红素检测。
* 结合胆红素反应快速。
* 游离胆红素反应缓慢或不反应(分子折叠，不溶性)。
* 需要某些物质的存在，才会打开游离胆红素，使溶解在水，并和偶氮试剂反应。
传统胆红素检测方法
* "加速剂"
* 乙醇 (van den Bergh, 后来是 Malloy 和 Evelyn)
* 咖啡因和苯甲酸钠 (Jendrassik and Grof, 1938)
* 由Doumas领导的AACC小组对J-G方法最佳化 (1983)。
传统胆红素检测方法
* 具有加速剂的偶氮反应 = 总胆红素。
* 不加加速剂的偶氮反应= "直接反应胆红素" (van den Bergh) 或简称为直接胆红素。
* 间接胆红素为总胆红素减去直接胆红素。
* 按照反应条件区分为直接和间接胆红素在先。以后才了解分子结构。
非传统的胆红素检测方法
* HPLC - 临床常规无法使用。
* Vitros(r) 分析仪 (Ortho Clinical Diagnostics, formerly Kodak Ektachem).
* 酶学方法。
* 氧化剂方法。
Vitros 胆红素检测方法
* 现今已广泛应用 (2003年的CAP调查中在4964个实验室中，有1191个使用该法)。
* 总胆红素干片还是传统的偶氮方法。
* BuBc干片 (游离胆红素Bu、结合胆红素Bc)为非传统方法。
BuBc干片
* 由Eastman Kodak在 1980s早期开发。
* 使用染媒剂，不是试剂。
* 染媒剂是什么？
* 染媒剂可以区分结合胆红素和游离胆红素的最大反射差。
* 在技术上的一个机遇。
BuBc干片技术原理
* 实线为Bu, 虚线为Bc.
* 反射最大峰: Bu 460, Bc 420 nm.
* 在 400 (二者反射强度相同) 和 460 nm (最大反射差)阅读。
酶法的胆红素检测
* 当前新的非传统胆红素检测方法 ......
胆红素检测: 传统的和其它
Phillip R. Bach, Ph.D.
Primary Children's Medical Center
Salt Lake City, Utah
It doesn't take a rocket scientist...
* Pretty basic stuff.
* Most recent refer-ence in bibliography is from 1998.
* But these issues are at the top of my FAQ list.
* In med school you learn TBil and DBil and that's all.
目的
* 被HPLC分离的胆红素分子类型。
* 检测胆红素的传统和非传统方法。
* 每个检测的或计算的组分分子类型。
目的
* 了解传统和非传统的胆红素检测结果不同的临床应用。
* 光线对胆红素的影响。接受光治疗患者和标本的光降解，对传统和非传统方法结果的影响。
胆红素的结构
* 各胆红素分子上的甲基 (Me) 和乙烯基 (CH2=CH) 有所不同。
* 羧基被结合。
* 折叠的结构几乎不溶于水。
HPLC分离的胆红素各组分
巨细胞肝炎婴儿血清
* ? = 游离胆红素
* ? = 单葡萄糖醛酸酯结合胆红素
* ??= 双葡萄糖醛酸酯结合胆红素
* ? = 和白蛋白共价结合胆红素
△胆红素
* 在血液循环中结合胆红素和白蛋白形成的。
* 白蛋白缓慢地非酶作用置换了原葡萄糖醛酸酯。类似于糖化血红蛋白。
* 在长期的高结合胆红素血症后，才能检测出来。
* 在血液循环中的清除缓慢。半衰期和白蛋白一样，2～3周。
传统的胆红素检测方法
* 偶氮方法 (Ehrlich 1883).
* 由 van den Bergh and Muller (1916)应用于胆红素检测。
* 结合胆红素反应快速。
* 游离胆红素反应缓慢或不反应(分子折叠，不溶性)。
* 需要某些物质的存在，才会打开游离胆红素，使溶解在水，并和偶氮试剂反应。
传统胆红素检测方法
* "加速剂"
* 乙醇 (van den Bergh, 后来是 Malloy 和 Evelyn)
* 咖啡因和苯甲酸钠 (Jendrassik and Grof, 1938)
* 由Doumas领导的AACC小组对J-G方法最佳化 (1983)。
传统胆红素检测方法
* 具有加速剂的偶氮反应 = 总胆红素。
* 不加加速剂的偶氮反应= "直接反应胆红素" (van den Bergh) 或简称为直接胆红素。
* 间接胆红素为总胆红素减去直接胆红素。
* 按照反应条件区分为直接和间接胆红素在先。以后才了解分子结构。
非传统的胆红素检测方法
* HPLC - 临床常规无法使用。
* Vitros(r) 分析仪 (Ortho Clinical Diagnostics, formerly Kodak Ektachem).
* 酶学方法。
* 氧化剂方法。
Vitros 胆红素检测方法
* 现今已广泛应用 (2003年的CAP调查中在4964个实验室中，有1191个使用该法)。
* 总胆红素干片还是传统的偶氮方法。
* BuBc干片 (游离胆红素Bu、结合胆红素Bc)为非传统方法。
BuBc干片
* 由Eastman Kodak在 1980s早期开发。
* 使用染媒剂，不是试剂。
* 染媒剂是什么？
* 染媒剂可以区分结合胆红素和游离胆红素的最大反射差。
* 在技术上的一个机遇。
BuBc干片技术原理
* 实线为Bu, 虚线为Bc.
* 反射最大峰: Bu 460, Bc 420 nm.
* 在 400 (二者反射强度相同) 和 460 nm (最大反射差)阅读。
酶法的胆红素检测
* 当前新的非传统胆红素检测方法 ......
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