中华医学会第八次全国消化疾病学术会议论文汇编 肝胆分会场

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    ·分会场专题报告

    HBV 及其相关性肝病防治新策略

    西安西京医院消化疾病研究所及肿瘤生物学国家重点实验室 刘 杰

    一、HBV及相关肝病发病现状

    全球乙肝感染人群约为 4 亿。2002 年的一项普查表明，我国 HBsAg 阳性率为 9%，计约

    1.2 亿乙肝携带者，约占全球 HBV 感染者的 1/3，慢性感染者约为 0.3 亿。每年死于乙肝相

    关性疾病者约有 300 000，包括 180 000 例肝癌。1990 年起开展的新生儿疫苗接种显著降低

    了儿童慢性乙肝病毒感染率， 但并未遏止乙肝发病率的上升趋势， 从 1990 年的21.9/100 000

    上升至到 2003 年 53.5/100 000。乙肝及其相关疾病成为中国及全球的一个重要的公共卫生

    问题， 也造成政府的极大负担， 中国每年在肝病方面的的治疗费用约为 9000 亿 (Liu J， Fan

    D. The Lancet 2007) 。因此，对 HBV 及其相关肝病的基础和临床研究对于改善国民健康状

    况具有重要的意义。

    二、抗HBV治疗新策略

    乙肝治疗的最终目标是在发生不可逆转的肝损伤前清除病毒， 目前尚缺乏高效安全的抗

    HBV 药物。乙肝发病及复发的基础是 HBV 在肝细胞内的复制，深入认识 HBV 复制及其调节网

    络对于研发新的高效抗 HBV 药物至关重要。但至今 HBV 复制的调控网络尚未被阐明。

    (1)miRNA：为一类新发现的、重要的基因表达调控分子，已有研究显示，肝脏特异性

    miRNA-122a能诱导 HCV在体外的复制,可能作为抗 HCV 治疗的新靶点，但 miRNA 在HBV 复制

    中的作用如何尚未见报道。我们课题组采用 miRNA microarray 筛选HepG2.2.15 细胞(HBV

    全基因组转染细胞)以及对照细胞 HepG2 的 miRNA 表达谱，获得 10 个差异表达的 miRNA 分

    子。对其中的 let-7a 分子进一步研究发现，let-7a 在HBV 复制的肝癌细胞系和组织中高表

    达；let-7a抑制剂能有效抑制 HBV的体外复制，其作用位点并非 HBV mRNA 序列, 而是通过

    负性调控 Ras 蛋白的表达, 进而抑制HBV 增强子和核心启动子的活性。为研究对象，采用高

    通量方法从这两方面对 HBV 复制的调控体系进行探讨，有望为抗 HBV 治疗提供新的靶点。

    (2)转录因子：转录作为 HBV 病毒复制过程中最关键的步骤，目前对其调控亦缺乏整

    体认识。本课题组采用转录因子活性谱芯片(OATFA)技术筛选得到 10个活性差异的转录因

    子家族分子，生物信息学分析显示，其中 4 个家族的转录因子已被报道与 HBV 复制相关，其

    余 6 个家族的分子与 HBV 复制的关系尚无报道，分别为 FOXO(1,3a,4)，FOXI1, Egr(1，2，3，4), SF-1, GR, SRY。初步研究已经证实，FOXO(1，3a，4) 和 Egr(1，2，3)转录因

    子家族分别在促进和抑制 HBV 在细胞内的复制中发挥重要作用。

    三、HBV相关新基因的克隆

    鉴于目前尚无高效的抗HBV治疗策略， 大部分HBV感染者可能进展为乙肝及其相关疾病。

    HCC 早期预警分子的研发有助于早期干预，从而降低发病和死亡率。

    通过抑制差减杂交技术我们成功克隆 4 个国际上未见报道的新基因， 其中 3 个为乙肝病

    毒上调基因，命名为 URG 系列(Up-Regulated-Gene) ，一个为下调基因，命名为 HuSui1。

    该研究为乙肝相关性肝病及肿瘤的基因治疗提供了新的靶点,也为肝癌早期预警提供了新的

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    (1)新基因URG7：全长745bp,编码 99 个氨基酸的蛋白(Hepatology 2001 )。为一被

    乙肝病毒上调并可促进细胞生长的新的癌基因，并可通过 NF-κB 依赖方式，保护细胞抵抗

    Fas 介导的杀伤，从理论上部分解释了乙肝感染的肝细胞逃避机体免疫攻击的机理。

    (2)新基因URG4：全长3607bp,编码 104KD 的蛋白(Neoplasia 2002) 。定位于人类 7

    号染色体。 初步研究显示， 此基因可促进细胞生长和癌细胞体内成瘤性， 为又一新的癌基因。

    近期发现，此基因和细胞周期蛋白相关(Neoplasia 2006) 。

    (3)新基因URG11：全长3074bp， 编码蛋白673 个氨基酸、分子量70KD(Neoplasia

    2003 ) 。定位于人类11号染色体。为一可促进细胞生长的新的癌基因，并发现其可促进β-

    连接蛋白(β-catenin)的表达(Hepatology 2006) 。β-catenin不仅在维持细胞正常形态

    及介导细胞运动中发挥重要作用，还是肿瘤发生及发展密切相关的Wnt信号通路中的关键分

    子，故这一发现具有非常重要的意义，使得URG11成为下一步研究的重点。已成功制备该基

    因的单克隆抗体(Hybridoma 2006) ，为深入研究该基因提供了有力的工具。

    (4)HuSui1：全长 1370bp， 编码 113 个氨基酸的蛋白，定位于人类 17 号染色体

    (Oncogene 1999) 。该基因在肝癌组织低表达，和肝癌的恶性生物学行为负相关。更重要的

    是，HBv 下调该基因的表达， ，可能使乙肝感染的宿主肝细胞对蛋白翻译的监控作用减低或

    丧失，进而导致宿主细胞的恶性转化，具有重要的理论意义。

    (5)S15a:全长 535bp， 编码 130 个氨基酸的蛋白。初步研究显示此基因亦具有癌基

    因的作用。为进一步研究核糖体蛋白 S15 和肝癌发生的关系提供了重要线索(Molecular

    Carcinogenesis 2004)。

    (6)VEGFR-3(S) ： 全长 4765bp， 编码 1298 个氨基酸的蛋白( Hepatology 2007)。

    研究证实 VEGFR-3(S)在 HBV 阳性 HCC 中表达上调，与生存期负相关。并发现在肝癌中 HBV

    可缩短 VEGFR-3(S)信号传导通路，提示阻断 VEGFR-3(S)信号传导可能有效抑制肝癌进展。

    四、新基因URG11分子机制研究

    首次发现乙肝病毒通过促进 E-Cadherin 启动子区甲基化，在体内体外下调该分子的表

    达 (Oncogene 2006) ， 率先证实HBv 通过URG11及β-catenin激活Wnt信号通路(Hepatology

    2006)，从而部分阐明了乙肝病毒的致癌机理，为通过阻断该通路，治疗乙肝相关性疾病奠

    定了理论基础。

    五、腺病毒介导URG11 RNAi 抑制肝癌的临床前研究

    成功构建并包装 URG11-siRNA 腺病毒， 研究发现利用 URG11-siRNA 腺病毒下调该基因表

    达后可抑制肝癌细胞的体外增殖能力， 同时利用双向电泳-质谱鉴定技术进一步阐明该分子

    促进细胞生长、侵袭和转移的分子机制，为利用腺病毒载体继续研究该基因功能奠定理论基

    础。

    六、新基因预警肝硬化癌变的临床价值

    上述新克隆的分子URG11，URG7，URG4，URG12 和HuSui1 单独或联合进行血清学监测可使肝

    硬化癌变平均提前3 年预警，并可就肝癌的复发和预后进行随访和监控(Cancer Research 2004),提示这组新基因具有广阔的临床应用前景 ......