科技 健康 明天 AMI后心肌无再流防治研究进展专家研讨会 中华医学会第十次全国心血管病学术会议卫星会纪要(三) 通心络对急性心肌梗死再灌注
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3. 病理染色检测心肌无再流面积
减小实验猪急性心肌梗死(AMI)结扎区灌注缺损心肌面积和再灌注后无再流心肌面积的作用在通心络组,小剂量无效,中剂量有效,大剂量疗效更好且与西药腺苷和尼可地尔的疗效相似。
(三)减小再灌后无再流心肌面积和心肌坏死面积的机制与检测指标
他们对AMI再灌注无再流动物模型的心肌正常区、再灌注区和无再流区组织中的各项相关指标进行了检测。
1. 减轻自由基介导的脂质过氧化和心肌灌注损伤
通心络可剂量依赖性地提高AMI再灌注后血清和心肌总抗氧化能力(T-AOC)及总超氧化物歧化酶(T-SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平,降低血浆和心肌丙二醛(MDA)水平。表明通心络有保护AMI再灌注心肌和血管内皮损伤的作用,减轻了心肌的灌注损伤。这与其具有较强的氧自由基清除能力,减轻自由基所介导的脂质过氧化反应和抗氧化及抗氧化损伤的作用有关。
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2. 调控内皮功能指标,改善内皮功能,预防无再流
血清一氧化氮(NO)水平 对于控制血清NO水平降低的作用,地尔硫卓和小剂量通心络无效,中剂量,尤其是大剂量通心络作用显著,并与腺苷和尼可地尔相当,且优于钙拮抗剂。
一氧化氮合酶(NOS)和内皮素(ET)-1及其基因表达 他们采用放射免疫(RIA)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对中华小型猪AMI模型的研究结果显示,对于升高组织型一氧化氮合酶(cNOS)活性和cNOS mRNA 表达水平,降低诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性、iNOS mRNA表达水平、ET-1含量和ET-1 mRNA 表达水平的作用,钙拮抗剂地尔硫卓和通心络小剂量组无效,通心络中剂量有效,大剂量疗效更显著(P<0.05),并与腺苷和尼可地尔疗效相当。
血浆血管性假血友病因子(vWF)水平 通心络大、中剂量降低血浆vWF水平的作用显著优于地尔硫卓,与尼可地尔和腺苷相当。
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以上说明,大、中剂量通心络干预可减轻心肌内皮细胞再灌注损伤,其疗效可与西药腺苷和尼可地尔相媲美,并具有剂量依赖性特点。这也提示,内皮细胞受损可能是无再流发生的重要机制之一,通心络可能通过保护内皮细胞起到减少无再流的作用。
3. 通心络通过抗炎症反应保护血管内皮细胞
降低P-选择素(P-S)及其mRNA表达 通心络中剂量和大剂量组血清P-S浓度上升幅度显著小于对照组(P<0.05,P<0.01);通心络大剂量组心肌组织P-S浓度及其mRNA表达水平显著小于对照组(P<0.05,P<0.01)。提示通心络可降低AMI再灌注后无再流动物血浆和心肌P-S浓度及其mRNA表达水平。
降低可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-1)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)及其 mRNA水平 通心络可降低AMI再灌注后无再流动物血浆sVCAM-1浓度和心肌组织ICAM-1、ICAM-1 mRNA和VCAM-1、VCAM-1 mRNA水平。
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减少炎症细胞浸润 电镜观察心肌组织苏木精伊红(HE)染色结果显示,对照组和通心络小剂量组再灌注区和无再流区均有大量炎症细胞浸润,而中剂量组炎症细胞润浸明显减少,大剂量组未见炎症细胞浸润。
以上表明,通心络可有效对抗炎症反应,保护血管内皮细胞。其机制可能是通过抑制血管内皮细胞的炎症反应、降低ICAM-1、 VCAM-1、s VCAM-1浓度和抑制ICAM-1 mRNA、VCAM-1 mRNA的表达,从而起到对血管内皮细胞的保护作用。
三、通心络对微血管内皮细胞间连接蛋白的影响
当AMI再灌注后无再流时,大剂量和中剂量通心络干预可显著提高钙黏蛋白(VE-cadherin)水平,从而起到保护微血管内皮细胞结构完整性的作用。
以上提示,内皮功能和结构受损是无再流发生的重要机制。通心络、腺苷和尼可地尔可防治结构性无再流。地尔硫卓可防治功能性无再流,却不能防治结构性无再流。
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四、通心络在运用骨髓间充质干细胞对梗死后猪模型心脏实施细胞心肌成形术中的促进作用
钱海燕等对28只10月龄中国猪(体重30 kg±5 kg)进行骨髓间充质干细胞(MSC)分离、培养,制备心肌梗死模型,并将其平均分为4组:对照组(n=7),单一小剂量通心络干预组(n=7),单一MSC移植干预组(n=7)和同时进行MSC移植和通心络干预组(n=7)。再灌注后30分钟,于每只试验动物的梗死区及其周边区注入含3×107个细胞的自体MSC悬浮液500 μl,给予对照组动物注入等体积的葡萄糖达尔贝科改良依格尔培养液(DMEM)。从实施MSC移植前3天至移植后4天使用通心络[0.05 g/ (kg·d)]进行预处理治疗。通过多种手段了解通心络干预对MSC移植的影响。
1. 组织学分析
减轻心肌组织纤维化和炎症细胞浸润 在细胞移植6周后,通过电镜观察炎症细胞浸润情况。结果显示,通心络+MSC干预可显著减轻心肌组织纤维化和炎症细胞浸润,减小梗死面积。
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增强心脏梗死区移植MSC的存活能力 采用荧光显微镜观察并计数对二脒基苯基吲哚(DAPI)和心脏肌钙蛋白T(cTn-T)呈阳性的细胞(为分化的类心肌细胞)。结果显示,通心络+MSC干预组心肌梗死区移植MSC细胞的生存率显著高于单纯移植MSC组(P<0.0001)。
提高移植MSC的成心肌和微血管分化效率 在移植MSC6周后,通心络干预组部分植入的MSC已经分化成心肌和微血管,通心络+MSC组移植的MSC成心肌分化效率显著高于单纯移植MSC组(P<0.0001)。
促进植入MSC细胞间联结通讯的建立 在移植MSC 6周后,通心络干预组心肌梗死区DAPI阳性细胞间的联结通讯已经建立,且通心络+MSC组显著优于单纯移植MSC组(P<0.0001)。
增加毛细血管密度 为测定梗死心肌及周边区域的毛细血管密度,采用vWF抗体对心肌梗死区及其周边区组织切片进行染色,根据vWF抗体的免疫组化染色测定每个高倍视野下阳性染色的毛细血管计数。结果显示,通心络+MSC干预可显著增加梗死心肌及周边区域的毛细血管密度。
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2. 磁共振成像与单光子发射计算机断层摄影
改善心肌功能指标 在细胞移植1周后和6周后,他们给予各组动物拍摄电影磁共振成像(MRI)和增强MRI图像,计数运动障碍节段以分析室壁增厚情况,检测室壁增厚、左心室射血分数(LVEF)、梗死区面积、舒张末容积(EDV)、收缩末容积(ESV)、左心室质量指数(LVMI)等参数。结果显示,通心络+MSC联合干预可显著改善心肌功能主要指标。
减轻心肌灌注损伤 在细胞移植1周和6周后,对各组动物进行心肌单光子发射计算机断层摄影(SPECT),测定心肌灌注障碍面积以确定其损伤程度。结果显示,单纯通心络干预组心肌灌注损伤轻于单纯移植MSC组,通心络+MSC联合干预组未见心肌灌注损伤。
3. 细胞特异性标志物检测
抑制梗死心肌周围细胞凋亡 为原位检测单细胞水平细胞凋亡,通过对梗死心肌细胞特异标志物抗结合蛋白抗体和DNA末端标记伴行染色,鉴定胞核内DNA断裂的凋亡心肌细胞,计数凋亡细胞百分比作为凋亡指数。结果显示,通心络+MSC抗凋亡保护心肌细胞的作用显著优于单纯通心络干预或单纯MSC移植。
[本文(二)见上期,未完待续], 百拇医药