溶血性贫血的实验室检查.ppt
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参见附件(258kb)。
溶血性贫血的实验室检查
溶血指征实验项目
血浆游离血红蛋白测定(Hb )
* 原理：联苯胺在酸性溶液中和H2O2与Hb作用可以生成氧化联苯胺并产生由绿至兰最后形成紫红色的一系列颜色反应。根据所呈颜色反应测定血浆中血红蛋白的浓度。
* 正常参考值： F-Hb：0~50mg/L
临床意义
* 血管内溶血的指征
* Hb超过血流中的结合珠蛋白的结合能力时，血浆游离血红蛋白便增加。如蚕豆黄、PNH、阵发性寒冷性Hb尿、冷凝集综合征及其它微血管病性溶血性贫血。
* 血管外溶血则可正常
血清结合珠蛋白测定(Hb-HP)
* 原理：血清结合珠蛋白(Hp)由肝和脾脏合成，存在于血清蛋白中，其分子量为310000，电泳速度与球蛋白相似，它能与Hb结合成Hb-Hp复合物。当在血浆中加入过量Hb，37度温育后；血清中Hp即可与Hb结合形成Hb-Hp。应用电泳法，可将高铁Hb、Hb-Hp和未结合Hb(游离Hb)区带完全分开。根据游离Hb区带的存在与否可判定Hp的含量。
* 正常参考值：0.7~1.5 g/L
临床意义
* Hp-Hb复合物的廓清率为每小时15mg/100ml血浆，Hp结合能力为100~135mg/Hb/100ml血浆。超过此结合能力的游离Hb从肾脏排出。
* Hp↓，甚至缺如，主要见于各种血管内溶血性疾病，如PNH、蚕豆病、中毒性肝炎、肝硬化等脏脏疾患、传单急慢性炎症。
* Hp↑：慢性感染、风湿病、胶原性疾病、肝外阻塞性黄疸和肿瘤及妊娠。
含铁血黄素尿试验(Rous test)
* 原理：普鲁士蓝反应--铁离子在酸化的低铁氰化钾溶液中生成蓝色的铁氰化钾。
* 尿中脱落的肾小管上皮细胞有含铁血黄素，显微镜下观察尿沉渣中可有深蓝色物质出现，为阳性。
* 正常值：阴性
* 临床意义：慢性血管内溶血时可阳性，多为PNH。
红细胞膜缺陷实验检查项目
红细胞脆性试验：EOF
* 原理：即测定红细胞对不同浓度低渗氯化钠溶血的抵抗力。悬浮于低张溶液中的红细胞，由于溶液张力差异，可使红细胞外的水渐渐进入红细胞中。红细胞先变为球形；当达到临界容量时，则红细胞破裂溶解。观察上清液游离Hb量即可反映出红细胞脆性。
* 结果：
* 开始溶血：上层液开始呈透明红色且管底有红细胞者；
* 完全溶血：溶液为透明红色且管底无红细胞者；必要时可离心后再观察结果。
* 正常参考值：开始溶血 0.42%~0.46%
* 完全溶血 0.28%~0.34%
临床意义
* 脆性↑：遗传性球形红细胞增多症，口形红细胞增多症，椭圆形红细胞增多症(部分病例)，新生儿ABO溶血病，已糖激酶缺乏伴球形红细胞增多症，自免溶贫伴球形红细胞增多症等。
* 脆性↓：正常头几个月的婴儿，珠蛋白合成障碍性贫血综合征，Hb-C、D、E、G病，IDA，切脾后，MA，PV(少数病例)，阻塞性黄疸及肝病等。
Ham's test
* 原理：PNH有三种类型：
* PNHⅠ为敏感性正常
* PNHⅡ为中度敏感(为正常3~5倍)
* PNHⅢ为极度敏感(为正常15~25倍)
* 对补体敏感的红细胞能被正常新鲜血清所溶解，特别在酸性条件下(pH 6.6~6.8)经37℃孵育后。
* 血清加热后因补体破坏则失去对患者红细胞的溶解力。
* 正常参考值：阴性
* 临床意义
* 阳性见于PNH，某些自免溶贫发作严重时可阳性。
蛇毒试验(COF)
* 原理：与Ham's基本相同，在试验中加入一种蛇毒因子，其可与C3激活酶前体结合激活C3，促进对补体敏感的红细胞破坏溶解。本试验比Ham's敏感，比糖水试验特异性强。
* 正常参考值：<5%
* > 10%为异常
* 临床意义：
* PNH绝大部分阳性，假阴性少。骨髓增生低下者，自免溶贫等可阴性。
自身溶血试验及纠正试验
* 原理：正常人血液经温育后，会逐渐产生轻微溶血，但先天性球形红细胞增多症和先天性非球形红细胞增多症等贫血，由于红细胞内酶缺陷，葡萄糖酵解障碍，可不同程度地溶血增强。当加入葡萄糖或ATP后，溶血现象可得到纠正，故此试验可作为鉴别某些疾病的根据。
* 正常参考值：
* 溶血度 24小时：NS<0.5%; 10%GS < 0.4%
* 48小时：NS < 3.5%; 10%GS < 0.6%
* 临床意义：脆性增高的疾病(如遗传球、先天性非球形细胞性溶贫)机械脆性增加
* 先天性非球形细胞性溶贫：
* Ⅰ型(葡萄糖6磷酸脱氢酶缺乏症)可被葡萄糖和ATP纠正，* Ⅱ型(丙酮酸激酶缺乏症)只能被ATP纠正。
酸化甘油溶解试验 AGLT
* 原理：甘油和脂质有亲和性，可使脂质减少，促进红细胞破坏。不同红细胞在酸化甘油中溶解速度不同，在PH6.85的0.3M 甘油中，红细胞发生溶血，光密度随溶血增加而下降，当下降到起始光密度的一半时称AGLT50，下降到10%称AGLT10。HS病人因膜质减少，因而在酸化甘油中溶解加快。
* 正常参考值：AGLT50>290秒
* 临床意义：
* 本试验对遗传性球形红细胞增多症敏感性和特异性较高。患者AGLT50<150秒，AGLT10<200秒。
微量补体溶血试验
* 原理：PNH患者血液中有不同的红细胞对补体敏感性不一；用兔抗人红细胞抗体激活补体而产生不同的溶血程度来计算出不同红细胞对补体敏感度。
* 正常参考值：Ⅰ型细胞 100%；补体敏感度<15%；不可见Ⅱ、Ⅲ型细胞。
临床意义
* PNH患者血液中有不同的红细胞对补体敏感性不一；PNHⅠ为敏感性正常、PNHⅡ为中度敏感(为正常2-3倍)、PNHⅢ为极度敏感(为正常15-25倍)。
糖溶血试验
* 原理：PNH患者红细胞膜有缺陷，对补体较为敏感，在小量血清存在时，蔗糖发酵，改变了氢离子强度，加强了补体与红细胞膜的结合，以致红细胞膜出现小洞而发生溶血。
* 正常参考值：阴性
* 临床意义：PNH，部分自免贫和先天性球形红细胞增多症者阳性。
免疫及其它因素溶贫实验检查项目
抗人球蛋白试验(Coomb's)
* 原理：温抗体溶血的自身抗体为IgG，在AIHA的患者中，此抗体能与表面附有相应抗原的红细胞结合，使红细胞致敏而不发生凝集，待加入抗人球蛋白血清(AHGS)后 ......
溶血性贫血的实验室检查
溶血指征实验项目
血浆游离血红蛋白测定(Hb )
* 原理：联苯胺在酸性溶液中和H2O2与Hb作用可以生成氧化联苯胺并产生由绿至兰最后形成紫红色的一系列颜色反应。根据所呈颜色反应测定血浆中血红蛋白的浓度。
* 正常参考值： F-Hb：0~50mg/L
临床意义
* 血管内溶血的指征
* Hb超过血流中的结合珠蛋白的结合能力时，血浆游离血红蛋白便增加。如蚕豆黄、PNH、阵发性寒冷性Hb尿、冷凝集综合征及其它微血管病性溶血性贫血。
* 血管外溶血则可正常
血清结合珠蛋白测定(Hb-HP)
* 原理：血清结合珠蛋白(Hp)由肝和脾脏合成，存在于血清蛋白中，其分子量为310000，电泳速度与球蛋白相似，它能与Hb结合成Hb-Hp复合物。当在血浆中加入过量Hb，37度温育后；血清中Hp即可与Hb结合形成Hb-Hp。应用电泳法，可将高铁Hb、Hb-Hp和未结合Hb(游离Hb)区带完全分开。根据游离Hb区带的存在与否可判定Hp的含量。
* 正常参考值：0.7~1.5 g/L
临床意义
* Hp-Hb复合物的廓清率为每小时15mg/100ml血浆，Hp结合能力为100~135mg/Hb/100ml血浆。超过此结合能力的游离Hb从肾脏排出。
* Hp↓，甚至缺如，主要见于各种血管内溶血性疾病，如PNH、蚕豆病、中毒性肝炎、肝硬化等脏脏疾患、传单急慢性炎症。
* Hp↑：慢性感染、风湿病、胶原性疾病、肝外阻塞性黄疸和肿瘤及妊娠。
含铁血黄素尿试验(Rous test)
* 原理：普鲁士蓝反应--铁离子在酸化的低铁氰化钾溶液中生成蓝色的铁氰化钾。
* 尿中脱落的肾小管上皮细胞有含铁血黄素，显微镜下观察尿沉渣中可有深蓝色物质出现，为阳性。
* 正常值：阴性
* 临床意义：慢性血管内溶血时可阳性，多为PNH。
红细胞膜缺陷实验检查项目
红细胞脆性试验：EOF
* 原理：即测定红细胞对不同浓度低渗氯化钠溶血的抵抗力。悬浮于低张溶液中的红细胞，由于溶液张力差异，可使红细胞外的水渐渐进入红细胞中。红细胞先变为球形；当达到临界容量时，则红细胞破裂溶解。观察上清液游离Hb量即可反映出红细胞脆性。
* 结果：
* 开始溶血：上层液开始呈透明红色且管底有红细胞者；
* 完全溶血：溶液为透明红色且管底无红细胞者；必要时可离心后再观察结果。
* 正常参考值：开始溶血 0.42%~0.46%
* 完全溶血 0.28%~0.34%
临床意义
* 脆性↑：遗传性球形红细胞增多症，口形红细胞增多症，椭圆形红细胞增多症(部分病例)，新生儿ABO溶血病，已糖激酶缺乏伴球形红细胞增多症，自免溶贫伴球形红细胞增多症等。
* 脆性↓：正常头几个月的婴儿，珠蛋白合成障碍性贫血综合征，Hb-C、D、E、G病，IDA，切脾后，MA，PV(少数病例)，阻塞性黄疸及肝病等。
Ham's test
* 原理：PNH有三种类型：
* PNHⅠ为敏感性正常
* PNHⅡ为中度敏感(为正常3~5倍)
* PNHⅢ为极度敏感(为正常15~25倍)
* 对补体敏感的红细胞能被正常新鲜血清所溶解，特别在酸性条件下(pH 6.6~6.8)经37℃孵育后。
* 血清加热后因补体破坏则失去对患者红细胞的溶解力。
* 正常参考值：阴性
* 临床意义
* 阳性见于PNH，某些自免溶贫发作严重时可阳性。
蛇毒试验(COF)
* 原理：与Ham's基本相同，在试验中加入一种蛇毒因子，其可与C3激活酶前体结合激活C3，促进对补体敏感的红细胞破坏溶解。本试验比Ham's敏感，比糖水试验特异性强。
* 正常参考值：<5%
* > 10%为异常
* 临床意义：
* PNH绝大部分阳性，假阴性少。骨髓增生低下者，自免溶贫等可阴性。
自身溶血试验及纠正试验
* 原理：正常人血液经温育后，会逐渐产生轻微溶血，但先天性球形红细胞增多症和先天性非球形红细胞增多症等贫血，由于红细胞内酶缺陷，葡萄糖酵解障碍，可不同程度地溶血增强。当加入葡萄糖或ATP后，溶血现象可得到纠正，故此试验可作为鉴别某些疾病的根据。
* 正常参考值：
* 溶血度 24小时：NS<0.5%; 10%GS < 0.4%
* 48小时：NS < 3.5%; 10%GS < 0.6%
* 临床意义：脆性增高的疾病(如遗传球、先天性非球形细胞性溶贫)机械脆性增加
* 先天性非球形细胞性溶贫：
* Ⅰ型(葡萄糖6磷酸脱氢酶缺乏症)可被葡萄糖和ATP纠正，* Ⅱ型(丙酮酸激酶缺乏症)只能被ATP纠正。
酸化甘油溶解试验 AGLT
* 原理：甘油和脂质有亲和性，可使脂质减少，促进红细胞破坏。不同红细胞在酸化甘油中溶解速度不同，在PH6.85的0.3M 甘油中，红细胞发生溶血，光密度随溶血增加而下降，当下降到起始光密度的一半时称AGLT50，下降到10%称AGLT10。HS病人因膜质减少，因而在酸化甘油中溶解加快。
* 正常参考值：AGLT50>290秒
* 临床意义：
* 本试验对遗传性球形红细胞增多症敏感性和特异性较高。患者AGLT50<150秒，AGLT10<200秒。
微量补体溶血试验
* 原理：PNH患者血液中有不同的红细胞对补体敏感性不一；用兔抗人红细胞抗体激活补体而产生不同的溶血程度来计算出不同红细胞对补体敏感度。
* 正常参考值：Ⅰ型细胞 100%；补体敏感度<15%；不可见Ⅱ、Ⅲ型细胞。
临床意义
* PNH患者血液中有不同的红细胞对补体敏感性不一；PNHⅠ为敏感性正常、PNHⅡ为中度敏感(为正常2-3倍)、PNHⅢ为极度敏感(为正常15-25倍)。
糖溶血试验
* 原理：PNH患者红细胞膜有缺陷，对补体较为敏感，在小量血清存在时，蔗糖发酵，改变了氢离子强度，加强了补体与红细胞膜的结合，以致红细胞膜出现小洞而发生溶血。
* 正常参考值：阴性
* 临床意义：PNH，部分自免贫和先天性球形红细胞增多症者阳性。
免疫及其它因素溶贫实验检查项目
抗人球蛋白试验(Coomb's)
* 原理：温抗体溶血的自身抗体为IgG，在AIHA的患者中，此抗体能与表面附有相应抗原的红细胞结合，使红细胞致敏而不发生凝集，待加入抗人球蛋白血清(AHGS)后 ......
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