凝集素受体在胃癌及其癌前病变中的分布
作者：李春鸣 雷道年
单位：563003遵义医学院病理教研室(李春鸣)，北京医科大学病理教研室(雷道年)
关键词：外源凝集素；胃肿瘤；癌前病变
中华医学杂志930509 摘要 应用生物素标记的花生凝集素(PNA)、菜豆凝集素(PHA)及双花扁豆凝集素(DBA)等3种凝集素对人体胃癌66例、淋巴结转移癌32例、正常胃粘膜10例、异型增生30例及慢性胃炎伴肠化43例，进行了亲和组织化学法和粘液组织化学研究。发现带有PHA、DBA受体的肠化与胃癌关系密切。PHA受体阳性率按轻度增生、中度增生、重度增生及胃癌的顺序而递增。PHA、PNHA受体的分布与胃癌组织学类型及分化程度有关。81.3%淋巴结转移癌与其原发胃癌在凝集素标记的量上有差异，并且比原发肿瘤有更多的PHA受体。
凝集素是一类能与糖类特异性结合并能使细胞凝集的蛋白质或糖蛋白。细胞癌变、浸润和转移都可能与细胞膜上糖蛋白和糖脂改变有关〔1，2〕。我们利用花生凝集素(PNA)、菜豆凝集素(PHA)及双花扁豆凝集素(DBA)作为探针，应用亲和组织化学法及粘液组织化学方法，观察胃癌癌前病变中凝集素受体的分布特点，探讨其与胃癌的关系和意义。
, 百拇医药
材料与方法
一、组织
管状及乳头状腺癌27例，低分化及未分化癌20例，粘液细胞癌及粘液腺癌19例，淋巴结转移癌32例，正常胃窦及胃体粘膜各5例，慢性胃炎伴肠化43例，轻度、中度及重度异型增生各10例(简称轻增、中增及重增)。
二、试剂
生物素化凝集素和ABC试剂盒均系美国Vector公司产品，DAB为北京化工厂产品。
三、方法
凝集素亲和组织化学法采用许氏ABC法。对照试验应用Tris-HCL缓冲液代替生物素化凝集素作为空白对照。粘液组织化学染色，选用AB(pH2.5)-PAS和HID染色。组织切片为石蜡包埋。
, 百拇医药 四、染色结果判断
凝集素标记阳性部位可见棕色颗粒，按阳性细胞数在所标记的切片中所占比例进行分类：不见阳性细胞或个别细胞阳性为(一)，阳性细胞数<30%为(+)，30%～60%为(++)，>60%为(+++)。
结 果
一、正常胃粘膜
10例正常胃粘膜无一例PHA标记阳性。PNA不与正常胃粘膜表面上皮反应，胃窦腺组织3例阳性，胃体腺组织4例阳性。DBA标记，胃窦部表面上皮阴性，胃体部表面上皮1例阳性，胃窦腺组织2例阳性，而胃体腺组织均阴性。
二、肠上皮化生
3种凝集素标记肠上皮化生，分布方式相同，阳性颗粒主要分布于肠化上皮细胞浆内，尤以杯状细胞粘液颗粒最为显著(图1)。PHA标记胃炎伴肠化43例中阳性32例，阳性率74.4%；标记癌旁肠化28例中阳性26例，阳性率92.9%，两者相比，差异具有显著意义(P<0.05)。PNA标记中，胃炎伴肠化阳性率为79.1%(34/43)，癌旁肠化阳性率化为75%(21/28)，两者之间差异无显著意义。在DBA标记中，胃炎伴肠化阳性率为32.6%(14/43)，而癌旁肠化阳性率为60.7%(17/28)，两者间差异具有显著意义(P<0.05)。
, 百拇医药
图1 肠化上皮细胞，双花扁豆凝集素阳性物质位于细胞浆内，以杯状细胞粘液颗粒最为显著。ABC染色 ×200
经粘液组化染色，将肠化分为结肠型及小肠型，同时与凝集素标记阳性者进行比较，发现结肠型中3种凝集素受体阳性率均较小肠型高，差异具有显著意义(表1)。
表1 凝集素标记和粘液组化染色结果对照 类型
例数
PHA(+)
PHA(+)
PHA(+)
例数
%
例数
, http://www.100md.com
%
例数
%
结肠型
16
42
89.4*
43
91.5*
26
55.3*
小肠型
24
, 百拇医药
16
66.7
12
50.0
7
20.8
*与小肠型比较,P<0.05
三、胃癌
凝集素受体的分布与胃癌组织学类型有一定关系。一般来说，在管状及乳头状腺癌，PHA、PNA受体呈腔缘型及细胞核上方分布(图2)。而在低分化及未分化胃癌，主要分布在胞浆及胞膜。粘液细胞癌及粘液腺癌，其分布方式与低分化腺癌相似，并且癌性粘液亦阳性(图3)。PHA、PNA在胃癌各类型中的标记阳性率较高，但其阳性率与胃癌组织学类型无关。DBA标记粘液腺癌及粘液细胞癌阳性率为63.2%，明显高于低分化腺癌及管状腺癌，差异有显著意义(表2)。
, 百拇医药
图2 胃管状腺癌，花生凝集素(PNA)阳性物质呈核上方及腔缘型分布。ABC染色 ×400
图3 胃沾液腺癌，菜豆凝集素阳性物质呈胞浆型分布，粘液示阳性。ABC染色 ×400
表2 PHA、PNA及DBA在胃癌中的标记 类型
例数
PHA(+)
PHA(+)
PHA(+)
例数
%
例数
%
, 百拇医药
例数
%
管状及乳头状腺癌
27
24
88.9
26
96.3
7
25.9*
低分化及未分化癌
20
18
, 百拇医药
90.0
17
85.0
5
25.0
粘液细胞及粘液腺癌
19
17
89.5
18
94.7
12
63.2*
, http://www.100md.com
*与轻增比较,P<0.05
PHA受体在异型增生及癌的阳性率按轻增，中增、重增及癌的顺序递增，见表3。PNA及DBA受体在各级异型增生中的阳性率与癌相比，差异无显著意义。
表3 PHA、PNA及DBA在胃异型增生及癌中的标记 类型
例数
PHA(+)
PHA(+)
PHA(+)
例数
%
例数
%
, http://www.100md.com
例数
%
轻增
10
6
60
7
70
4
40
中增
10
7
70
, 百拇医药
9
90
6
60
重增
10
8
80
9
90
2
20
胃癌
, http://www.100md.com
66
59
89.4*
61
92.4
24
36.4
*与小肠型比较,P<0.05
原发肿瘤和它们的转移瘤在凝集素标记上存在差异。81.3%(26/32)淋巴结转移癌的凝集素受体标记与其原发肿瘤在量上不同，其中有22例转移瘤凝集素标记阳性细胞数多于原发肿瘤，4例低于原发肿瘤PHA受体++以上为59.4%，在转移瘤则为84.4%，差异有显著意义(P<0.05)。PNA及DBA受体在转移瘤中有增加趋势，但统计学上差异无显著意义。PHA及PNA标记淋巴结转移癌阳性率均为93.75%，PNA阳性物质呈胞浆型分布(图4)。
, http://www.100md.com
图4 胃低分化腺癌淋巴结转移，PNA阳性物质呈胞浆型分布。ABC染色 ×200
五、空白对照均为阴性。
讨 论
一、胃粘膜肠上皮化生的凝集素受体分布特点及意义。
本组资料表明PHA及DBA受体在癌旁肠化中表达明显高于胃炎伴肠化。结合粘液组化，发现结肠型肠化中PHA及DBA受体阳性率均较小肠型肠化高，说明具有PHA和DBA受体的肠化与胃癌关系密切。
二、凝集素在异型增生中的标记特点及意义
本实验结果表明，异型增生腺体的PHA受体阳性率按轻增、中增、重增及胃癌的顺序而递增。阳性率除轻增与胃癌之间差异具有显著意义外，其余差别无显著意义。提示中重度异型增生与胃癌的关系更为密切。异型增生腺体在形态上尚不能诊断为癌，但其细胞上的糖链结构已发生改变，已经带有癌细胞的标志。这种先于形态学改变而出现的生化异常，对异型增生的诊断、追踪观察及其与胃癌关系的研究均具有重大意义。对PHA受体阳性的异型增生进行定期检查，密切随访，有可能发现早期胃癌。
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三、凝集素在胃癌中的标记特点及意义
一般来说，在分化好的管状腺癌及乳头状腺癌，PHA、PNA受体呈腔缘型及细胞核上方分布；而在低分化及未分化胃癌，主要分布在胞浆及胞膜；粘液细胞癌及粘液腺癌，其分布方式与低分化腺癌相似，并且癌性粘液亦阳性。PNA受体在分化好的肠型胃癌，PNA阳性物质多出现在腺样结构的腔面或细胞顶浆，而分化差的弥漫型胃癌PNA阳性物质多出现在胞膜和胞浆小泡中〔3〕。本组资料均表明，PNA受体的分布与肿瘤类型和分化程度有关。PHA及PNA对胃癌细胞标记阳性率较高，一些HE染色不易观察的，散在于腺体或炎症病灶内的癌细胞，借助于这些标记物将有助于诊断。本实验发现DBA标记粘液细胞癌及粘液腺癌阳性率高，说明其癌细胞内含有较多N-乙酰氨基半乳糖。
四、凝集素在胃癌淋巴结转移中的标记特点及意义
本组资料中，原发肿瘤与其转移瘤在凝集素标记上存在差异。81.3%淋巴结转移癌的凝集素受体在量上与原发肿瘤不同，并且比原发肿瘤获得更多的PHA受体。凝集素标记原发肿瘤呈异质性，同一肿瘤内能见到凝集素不同程度阳性和阴性的肿瘤细胞，而淋巴结转移内的癌细胞凝集素标记相对较一致，表明胃癌细胞是由具有不同表型的细胞株组成，即在原发肿瘤内具有转移能力与无转移能力的癌细胞所产生的糖复合物不同。
, http://www.100md.com
注：本工作完成于北京医科大学
参考文献
1 Boland Cr,Chen YE,Rinderle SJ,et al.Use of the lectin from Amaranthus caudatus as a histochemical probe of proliferating colonic epithelial cells.Cancer Res,1991;51:657.
2 Kellokumpu IH.Differences in lectin reactivities of cellular glycoconjugates between primary human colorectal carcinomas and their metastases.Cancer Res,1986;46:4620.
3 近藤树俊.PNAぱて-カ-ピしあ胃癌の免疫组织学检索.日本病理学会会志，1982；71:284.
(收稿：1992-06-18 修回：1993-02-20), 百拇医药
单位：563003遵义医学院病理教研室(李春鸣)，北京医科大学病理教研室(雷道年)
关键词：外源凝集素；胃肿瘤；癌前病变
中华医学杂志930509 摘要 应用生物素标记的花生凝集素(PNA)、菜豆凝集素(PHA)及双花扁豆凝集素(DBA)等3种凝集素对人体胃癌66例、淋巴结转移癌32例、正常胃粘膜10例、异型增生30例及慢性胃炎伴肠化43例，进行了亲和组织化学法和粘液组织化学研究。发现带有PHA、DBA受体的肠化与胃癌关系密切。PHA受体阳性率按轻度增生、中度增生、重度增生及胃癌的顺序而递增。PHA、PNHA受体的分布与胃癌组织学类型及分化程度有关。81.3%淋巴结转移癌与其原发胃癌在凝集素标记的量上有差异，并且比原发肿瘤有更多的PHA受体。
凝集素是一类能与糖类特异性结合并能使细胞凝集的蛋白质或糖蛋白。细胞癌变、浸润和转移都可能与细胞膜上糖蛋白和糖脂改变有关〔1，2〕。我们利用花生凝集素(PNA)、菜豆凝集素(PHA)及双花扁豆凝集素(DBA)作为探针，应用亲和组织化学法及粘液组织化学方法，观察胃癌癌前病变中凝集素受体的分布特点，探讨其与胃癌的关系和意义。
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材料与方法
一、组织
管状及乳头状腺癌27例，低分化及未分化癌20例，粘液细胞癌及粘液腺癌19例，淋巴结转移癌32例，正常胃窦及胃体粘膜各5例，慢性胃炎伴肠化43例，轻度、中度及重度异型增生各10例(简称轻增、中增及重增)。
二、试剂
生物素化凝集素和ABC试剂盒均系美国Vector公司产品，DAB为北京化工厂产品。
三、方法
凝集素亲和组织化学法采用许氏ABC法。对照试验应用Tris-HCL缓冲液代替生物素化凝集素作为空白对照。粘液组织化学染色，选用AB(pH2.5)-PAS和HID染色。组织切片为石蜡包埋。
, 百拇医药 四、染色结果判断
凝集素标记阳性部位可见棕色颗粒，按阳性细胞数在所标记的切片中所占比例进行分类：不见阳性细胞或个别细胞阳性为(一)，阳性细胞数<30%为(+)，30%～60%为(++)，>60%为(+++)。
结 果
一、正常胃粘膜
10例正常胃粘膜无一例PHA标记阳性。PNA不与正常胃粘膜表面上皮反应，胃窦腺组织3例阳性，胃体腺组织4例阳性。DBA标记，胃窦部表面上皮阴性，胃体部表面上皮1例阳性，胃窦腺组织2例阳性，而胃体腺组织均阴性。
二、肠上皮化生
3种凝集素标记肠上皮化生，分布方式相同，阳性颗粒主要分布于肠化上皮细胞浆内，尤以杯状细胞粘液颗粒最为显著(图1)。PHA标记胃炎伴肠化43例中阳性32例，阳性率74.4%；标记癌旁肠化28例中阳性26例，阳性率92.9%，两者相比，差异具有显著意义(P<0.05)。PNA标记中，胃炎伴肠化阳性率为79.1%(34/43)，癌旁肠化阳性率化为75%(21/28)，两者之间差异无显著意义。在DBA标记中，胃炎伴肠化阳性率为32.6%(14/43)，而癌旁肠化阳性率为60.7%(17/28)，两者间差异具有显著意义(P<0.05)。
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图1 肠化上皮细胞，双花扁豆凝集素阳性物质位于细胞浆内，以杯状细胞粘液颗粒最为显著。ABC染色 ×200
经粘液组化染色，将肠化分为结肠型及小肠型，同时与凝集素标记阳性者进行比较，发现结肠型中3种凝集素受体阳性率均较小肠型高，差异具有显著意义(表1)。
表1 凝集素标记和粘液组化染色结果对照 类型
例数
PHA(+)
PHA(+)
PHA(+)
例数
%
例数
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%
例数
%
结肠型
16
42
89.4*
43
91.5*
26
55.3*
小肠型
24
, 百拇医药
16
66.7
12
50.0
7
20.8
*与小肠型比较,P<0.05
三、胃癌
凝集素受体的分布与胃癌组织学类型有一定关系。一般来说，在管状及乳头状腺癌，PHA、PNA受体呈腔缘型及细胞核上方分布(图2)。而在低分化及未分化胃癌，主要分布在胞浆及胞膜。粘液细胞癌及粘液腺癌，其分布方式与低分化腺癌相似，并且癌性粘液亦阳性(图3)。PHA、PNA在胃癌各类型中的标记阳性率较高，但其阳性率与胃癌组织学类型无关。DBA标记粘液腺癌及粘液细胞癌阳性率为63.2%，明显高于低分化腺癌及管状腺癌，差异有显著意义(表2)。
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图2 胃管状腺癌，花生凝集素(PNA)阳性物质呈核上方及腔缘型分布。ABC染色 ×400
图3 胃沾液腺癌，菜豆凝集素阳性物质呈胞浆型分布，粘液示阳性。ABC染色 ×400
表2 PHA、PNA及DBA在胃癌中的标记 类型
例数
PHA(+)
PHA(+)
PHA(+)
例数
%
例数
%
, 百拇医药
例数
%
管状及乳头状腺癌
27
24
88.9
26
96.3
7
25.9*
低分化及未分化癌
20
18
, 百拇医药
90.0
17
85.0
5
25.0
粘液细胞及粘液腺癌
19
17
89.5
18
94.7
12
63.2*
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*与轻增比较,P<0.05
PHA受体在异型增生及癌的阳性率按轻增，中增、重增及癌的顺序递增，见表3。PNA及DBA受体在各级异型增生中的阳性率与癌相比，差异无显著意义。
表3 PHA、PNA及DBA在胃异型增生及癌中的标记 类型
例数
PHA(+)
PHA(+)
PHA(+)
例数
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例数
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例数
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轻增
10
6
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中增
10
7
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9
90
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重增
10
8
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20
胃癌
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66
59
89.4*
61
92.4
24
36.4
*与小肠型比较,P<0.05
原发肿瘤和它们的转移瘤在凝集素标记上存在差异。81.3%(26/32)淋巴结转移癌的凝集素受体标记与其原发肿瘤在量上不同，其中有22例转移瘤凝集素标记阳性细胞数多于原发肿瘤，4例低于原发肿瘤PHA受体++以上为59.4%，在转移瘤则为84.4%，差异有显著意义(P<0.05)。PNA及DBA受体在转移瘤中有增加趋势，但统计学上差异无显著意义。PHA及PNA标记淋巴结转移癌阳性率均为93.75%，PNA阳性物质呈胞浆型分布(图4)。
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图4 胃低分化腺癌淋巴结转移，PNA阳性物质呈胞浆型分布。ABC染色 ×200
五、空白对照均为阴性。
讨 论
一、胃粘膜肠上皮化生的凝集素受体分布特点及意义。
本组资料表明PHA及DBA受体在癌旁肠化中表达明显高于胃炎伴肠化。结合粘液组化，发现结肠型肠化中PHA及DBA受体阳性率均较小肠型肠化高，说明具有PHA和DBA受体的肠化与胃癌关系密切。
二、凝集素在异型增生中的标记特点及意义
本实验结果表明，异型增生腺体的PHA受体阳性率按轻增、中增、重增及胃癌的顺序而递增。阳性率除轻增与胃癌之间差异具有显著意义外，其余差别无显著意义。提示中重度异型增生与胃癌的关系更为密切。异型增生腺体在形态上尚不能诊断为癌，但其细胞上的糖链结构已发生改变，已经带有癌细胞的标志。这种先于形态学改变而出现的生化异常，对异型增生的诊断、追踪观察及其与胃癌关系的研究均具有重大意义。对PHA受体阳性的异型增生进行定期检查，密切随访，有可能发现早期胃癌。
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三、凝集素在胃癌中的标记特点及意义
一般来说，在分化好的管状腺癌及乳头状腺癌，PHA、PNA受体呈腔缘型及细胞核上方分布；而在低分化及未分化胃癌，主要分布在胞浆及胞膜；粘液细胞癌及粘液腺癌，其分布方式与低分化腺癌相似，并且癌性粘液亦阳性。PNA受体在分化好的肠型胃癌，PNA阳性物质多出现在腺样结构的腔面或细胞顶浆，而分化差的弥漫型胃癌PNA阳性物质多出现在胞膜和胞浆小泡中〔3〕。本组资料均表明，PNA受体的分布与肿瘤类型和分化程度有关。PHA及PNA对胃癌细胞标记阳性率较高，一些HE染色不易观察的，散在于腺体或炎症病灶内的癌细胞，借助于这些标记物将有助于诊断。本实验发现DBA标记粘液细胞癌及粘液腺癌阳性率高，说明其癌细胞内含有较多N-乙酰氨基半乳糖。
四、凝集素在胃癌淋巴结转移中的标记特点及意义
本组资料中，原发肿瘤与其转移瘤在凝集素标记上存在差异。81.3%淋巴结转移癌的凝集素受体在量上与原发肿瘤不同，并且比原发肿瘤获得更多的PHA受体。凝集素标记原发肿瘤呈异质性，同一肿瘤内能见到凝集素不同程度阳性和阴性的肿瘤细胞，而淋巴结转移内的癌细胞凝集素标记相对较一致，表明胃癌细胞是由具有不同表型的细胞株组成，即在原发肿瘤内具有转移能力与无转移能力的癌细胞所产生的糖复合物不同。
, http://www.100md.com
注：本工作完成于北京医科大学
参考文献
1 Boland Cr,Chen YE,Rinderle SJ,et al.Use of the lectin from Amaranthus caudatus as a histochemical probe of proliferating colonic epithelial cells.Cancer Res,1991;51:657.
2 Kellokumpu IH.Differences in lectin reactivities of cellular glycoconjugates between primary human colorectal carcinomas and their metastases.Cancer Res,1986;46:4620.
3 近藤树俊.PNAぱて-カ-ピしあ胃癌の免疫组织学检索.日本病理学会会志，1982；71:284.
(收稿：1992-06-18 修回：1993-02-20), 百拇医药