瘤体内注射OK-432和白细胞介素2治疗原发性肝癌
作者：吴建卫 陈汉 吴孟超
单位：200433 上海，中国人民解放军第二军医大学长海医院肝胆外科研究所
关键词：
中华医学杂志960424
我们观察了OK-432(人源性A组溶血性链球菌III型Su株，经青霉素灭活；45℃热处理后，冷冻干燥而成的制剂)和白细胞介素2(IL-2)联合应用，对荷瘤鼠免疫功能的影响，以及对原发性肝癌的治疗作用，并结合应用于临床。
一、材料和方法
1.动物实验：取体重20g左右的雄性昆明种小鼠120只，右腋部皮下注射，浓度为1010/L的H-22瘤细胞悬液0.2ml。于接种后第7天，将小鼠随机均分成5组。(1)对照组：每天瘤体内注射生理盐水0.2ml，连续5天。(2)OK-432组：每天瘤体内注射OK-432(日本产)0.5KE，连续5天。(3)IL-2组：每日瘤体内浒IL-2 2 000U，连续5天。(4)IL-2→OK-432组：第1天注射IL-2
, 百拇医药
2 000U，第2天开始注射OK-432 0.5KE，连续4天。(5)OK-432→IL-2组：第1天注射OK-432 0.5KE，第2天开始注射IL-2 2 000U，连续4天。(6)OK-432+IL-2组：每天注射OK-432 0.5KE和IL-2 2 000U，连续5天。接种后第15天，每组各处死10只小鼠，取外周血测天然杀伤细胞(NK)和LAK细胞活性，称肿瘤重量，观察肿瘤坏死程度。各剩余10只小鼠，在相同饲养条件下观察其存活时间。
2.临床观察：我们治疗了因各种原因不能手术切除的原发性肝癌患者12例。甲胎蛋白(αFP)阳性病例10例，阴性2例。B型超声引导下肝穿刺瘤体内注射给药，隔天1次，6次为1疗程。第1次注射OK-432 50KE，以后各次根据患者的耐受情况注射IL-2 50~100万U。治疗前和治疗后每周测定外周血T淋巴细胞亚群，NK、LAK细胞活性和肿瘤红细胞花环，以及AFP、血常规及肝肾功能。
二、结果
, 百拇医药
1.动物实验：各治疗组与对照给之间，联合用药组和单独给药组之间小鼠NK和LAK细胞活性、肿瘤重量、肿瘤坏死程度以及存活时间差异有显著意义(表1)。联合给药各组之间，OK-432→IL-2组和OK-432+IL-2组的LAK细胞活性、肿瘤重量和小鼠存活时间与IL-2→OK-432组比较差异有显著意义。OK-432→IL-2组和OK-432+IL-2组之间差异夫显著意义(t=1.825，P>0.05)。对照组小志肿瘤无明显坏死，OK-432组、IL-2组和IL-2→OK-432组均主要表现为瘤体I、II度坏死。OK-432→IL-2组和OK-432+IL-2组主要表现II、III度坏死。
表1 各组小鼠的NF和LAK细胞活性、肿瘤坏死程度和重量及存活时间(
±s) 组别
鼠数
NK(%)
, 百拇医药
LAK(%)
肿瘤重量(g)
坏死程度(鼠数)**
存活时间(d)
I
II
III
对照
10
2.6±0.4
1.6±0.4*
4.5±0.5
10
, 百拇医药
0
0
19.9±2.9
OK-432
10
15.9±2.0*
5.7±0.4*
3.1±0.5*
5
5
0
29.5±2.5*
IL-2
, 百拇医药
10
20.5±2.5*
5.5±0.5*
3.8±0.5*
6
4
0
29.7±2.5*
IL-2→OK-432
10
28.7±1.6*
6.5±0.5*
, 百拇医药 3.4±0.4*
2
8
0
30.1±2.8*
OK-432→IL-2
10
28.1±1.8*
18.3±1.2*△
0.8±0.8*△
1
4
, 百拇医药
5
56.1±9.1*△
OK-432+IL-2
10
29.5±1.8*
19.1±1.5*△
1.8±0.8*△
1
2
6
60.6±12.6*△
, 百拇医药
*与对照组比△ 与IL-2→OK-432组比，均P<0.05；** I度坏死(<30%)，II度坏死(30%~70%)，III度坏死(>70%)
2.临床观察：治疗后，外周血T淋巴细胞
和
数均明显升高，但下降较快，在第8周恢复到治疗前的水平(t=1.984，P>0.05)。数升高持续时间较长，第8周与治疗前相比差异仍然有显著意义(t=3.254，P<0.05)。治疗后，外周血NK、LAK细胞活性、红细胞与肿瘤细胞的结合也显著增强，第8周与治疗前相比差异仍然有显著意义(t=3.1552、2.543、2.781，P<0.05，表2)。有9例αFP明显下降，其中1例于第5周时，αFP小于20µg/L。整个治疗过程中，肝肾功能和血红细胞及血小板无明显变化。而淋巴细胞和嗜中性粒细胞都明显升高。
, 百拇医药
表2 治疗后患者外周NK和LAK细胞活性，T细胞亚群以及红细胞药环的变化(±s) 项目
治疗前
治疗后(W)
1*
2*
3*
4*
5*
6*
7*
8*
, http://www.100md.com
NK
16±6
37±12
39±12
35±12
32±11
28±9.4
24.6±9
22±8
19±8*
LAK
10±4
25±6
, 百拇医药
25±7
23±7
20±6
18±5
15.6±4
13±4
11±4*
36±4
49±4
50±4
47±4
44±4
, 百拇医药
42±3.8
40±4
38±4
37±4*
32±4
51±4
52±4
47±4
45±3
41±2.7
39±3
36±6
, 百拇医药
35±7*
红细胞花环
11±3
35±7
37±8
34±7
30±7
26±5.9
23±5
19±4
15±4*
*与治疗前比较P<0.05
, 百拇医药
三、讨论
OK-432和IL-2均能增强NK细胞和LAK细胞的活性，并有协同作用。由于OK-432能够促使淋巴细胞表面IL-2受体的大量表达，所以注射OK-432或者OK-432、IL-2同时给药，其协同作用强于先予IL-2再给OK-432[1]。
OK-432对肝脏的NK活性刺激作用明显强于对其他器官的NK活性刺激作用[2]。瘤体内注射OK-432后，不但刺激肝脏的巨噬细胞和NK细胞的抗肿瘤活性，而且能使嗜中性粒细胞和淋巴细胞身肿瘤局部聚集[3]，随后注射的IL-2又能在体内激活和扩增肿瘤浸润淋巴细胞，起到杀伤肿瘤的作用。因此，先注射OK-432或OK-432、IL-2同时给药，其抑瘤作用也明显强于IL-2→OK-432方式给药。
红细胞粘附肿瘤细胞能力的增强对预防恶性肿瘤的血路转移有着重要意义。和细胞在抗肿瘤免疫中起着重要作用，外周血和数量的啬表明机体抗肿瘤能力的增强。提示瘤体内注射OK-432后接着注射IL-2，是原发性肝癌非手术治疗的一种有效途径。
, http://www.100md.com
参考文献
1 神代尚芳，美馬 亨，伊藤正已OK-432經口投与によウIL-2セブタ-陽性細胞と可溶型IL-2セブタ-.医学のあゆみ,1989,151:311.
2. Natio H, Ziegler M, Miyakawa A, et al. Establishment of animal liver metastic model for C-1300 murine neuroblastoma and immunotherapy for in using OK-432: streptococcus preparation. J Surg Res, 1992, 52: 79.
3 Hayashi Y, torisu M. New approach to management of malignant ascites with streptococcal preparation OK-432. III. OK-432 attracts nature killer cell through a chemotactic factor released from activated neutrophils. Surgery, 1990, 107: 74.
(收稿：1995-05-18 修回：1995-12-12), 百拇医药
单位：200433 上海，中国人民解放军第二军医大学长海医院肝胆外科研究所
关键词：
中华医学杂志960424
我们观察了OK-432(人源性A组溶血性链球菌III型Su株，经青霉素灭活；45℃热处理后，冷冻干燥而成的制剂)和白细胞介素2(IL-2)联合应用，对荷瘤鼠免疫功能的影响，以及对原发性肝癌的治疗作用，并结合应用于临床。
一、材料和方法
1.动物实验：取体重20g左右的雄性昆明种小鼠120只，右腋部皮下注射，浓度为1010/L的H-22瘤细胞悬液0.2ml。于接种后第7天，将小鼠随机均分成5组。(1)对照组：每天瘤体内注射生理盐水0.2ml，连续5天。(2)OK-432组：每天瘤体内注射OK-432(日本产)0.5KE，连续5天。(3)IL-2组：每日瘤体内浒IL-2 2 000U，连续5天。(4)IL-2→OK-432组：第1天注射IL-2
, 百拇医药
2 000U，第2天开始注射OK-432 0.5KE，连续4天。(5)OK-432→IL-2组：第1天注射OK-432 0.5KE，第2天开始注射IL-2 2 000U，连续4天。(6)OK-432+IL-2组：每天注射OK-432 0.5KE和IL-2 2 000U，连续5天。接种后第15天，每组各处死10只小鼠，取外周血测天然杀伤细胞(NK)和LAK细胞活性，称肿瘤重量，观察肿瘤坏死程度。各剩余10只小鼠，在相同饲养条件下观察其存活时间。
2.临床观察：我们治疗了因各种原因不能手术切除的原发性肝癌患者12例。甲胎蛋白(αFP)阳性病例10例，阴性2例。B型超声引导下肝穿刺瘤体内注射给药，隔天1次，6次为1疗程。第1次注射OK-432 50KE，以后各次根据患者的耐受情况注射IL-2 50~100万U。治疗前和治疗后每周测定外周血T淋巴细胞亚群，NK、LAK细胞活性和肿瘤红细胞花环，以及AFP、血常规及肝肾功能。
二、结果
, 百拇医药
1.动物实验：各治疗组与对照给之间，联合用药组和单独给药组之间小鼠NK和LAK细胞活性、肿瘤重量、肿瘤坏死程度以及存活时间差异有显著意义(表1)。联合给药各组之间，OK-432→IL-2组和OK-432+IL-2组的LAK细胞活性、肿瘤重量和小鼠存活时间与IL-2→OK-432组比较差异有显著意义。OK-432→IL-2组和OK-432+IL-2组之间差异夫显著意义(t=1.825，P>0.05)。对照组小志肿瘤无明显坏死，OK-432组、IL-2组和IL-2→OK-432组均主要表现为瘤体I、II度坏死。OK-432→IL-2组和OK-432+IL-2组主要表现II、III度坏死。
表1 各组小鼠的NF和LAK细胞活性、肿瘤坏死程度和重量及存活时间(
±s) 组别鼠数
NK(%)
, 百拇医药
LAK(%)
肿瘤重量(g)
坏死程度(鼠数)**
存活时间(d)
I
II
III
对照
10
2.6±0.4
1.6±0.4*
4.5±0.5
10
, 百拇医药
0
0
19.9±2.9
OK-432
10
15.9±2.0*
5.7±0.4*
3.1±0.5*
5
5
0
29.5±2.5*
IL-2
, 百拇医药
10
20.5±2.5*
5.5±0.5*
3.8±0.5*
6
4
0
29.7±2.5*
IL-2→OK-432
10
28.7±1.6*
6.5±0.5*
, 百拇医药 3.4±0.4*
2
8
0
30.1±2.8*
OK-432→IL-2
10
28.1±1.8*
18.3±1.2*△
0.8±0.8*△
1
4
, 百拇医药
5
56.1±9.1*△
OK-432+IL-2
10
29.5±1.8*
19.1±1.5*△
1.8±0.8*△
1
2
6
60.6±12.6*△
, 百拇医药
*与对照组比△ 与IL-2→OK-432组比，均P<0.05；** I度坏死(<30%)，II度坏死(30%~70%)，III度坏死(>70%)
2.临床观察：治疗后，外周血T淋巴细胞
和数均明显升高，但下降较快，在第8周恢复到治疗前的水平(t=1.984，P>0.05)。数升高持续时间较长，第8周与治疗前相比差异仍然有显著意义(t=3.254，P<0.05)。治疗后，外周血NK、LAK细胞活性、红细胞与肿瘤细胞的结合也显著增强，第8周与治疗前相比差异仍然有显著意义(t=3.1552、2.543、2.781，P<0.05，表2)。有9例αFP明显下降，其中1例于第5周时，αFP小于20µg/L。整个治疗过程中，肝肾功能和血红细胞及血小板无明显变化。而淋巴细胞和嗜中性粒细胞都明显升高。, 百拇医药
表2 治疗后患者外周NK和LAK细胞活性，T细胞亚群以及红细胞药环的变化(
±s) 项目治疗前
治疗后(W)
1*
2*
3*
4*
5*
6*
7*
8*
, http://www.100md.com
NK
16±6
37±12
39±12
35±12
32±11
28±9.4
24.6±9
22±8
19±8*
LAK
10±4
25±6
, 百拇医药
25±7
23±7
20±6
18±5
15.6±4
13±4
11±4*
36±4
49±4
50±4
47±4
44±4
, 百拇医药
42±3.8
40±4
38±4
37±4*
32±4
51±4
52±4
47±4
45±3
41±2.7
39±3
36±6
, 百拇医药
35±7*
红细胞花环
11±3
35±7
37±8
34±7
30±7
26±5.9
23±5
19±4
15±4*
*与治疗前比较P<0.05
, 百拇医药
三、讨论
OK-432和IL-2均能增强NK细胞和LAK细胞的活性，并有协同作用。由于OK-432能够促使淋巴细胞表面IL-2受体的大量表达，所以注射OK-432或者OK-432、IL-2同时给药，其协同作用强于先予IL-2再给OK-432[1]。
OK-432对肝脏的NK活性刺激作用明显强于对其他器官的NK活性刺激作用[2]。瘤体内注射OK-432后，不但刺激肝脏的巨噬细胞和NK细胞的抗肿瘤活性，而且能使嗜中性粒细胞和淋巴细胞身肿瘤局部聚集[3]，随后注射的IL-2又能在体内激活和扩增肿瘤浸润淋巴细胞，起到杀伤肿瘤的作用。因此，先注射OK-432或OK-432、IL-2同时给药，其抑瘤作用也明显强于IL-2→OK-432方式给药。
红细胞粘附肿瘤细胞能力的增强对预防恶性肿瘤的血路转移有着重要意义。
和细胞在抗肿瘤免疫中起着重要作用，外周血和数量的啬表明机体抗肿瘤能力的增强。提示瘤体内注射OK-432后接着注射IL-2，是原发性肝癌非手术治疗的一种有效途径。, http://www.100md.com
参考文献
1 神代尚芳，美馬 亨，伊藤正已OK-432經口投与によウIL-2セブタ-陽性細胞と可溶型IL-2セブタ-.医学のあゆみ,1989,151:311.
2. Natio H, Ziegler M, Miyakawa A, et al. Establishment of animal liver metastic model for C-1300 murine neuroblastoma and immunotherapy for in using OK-432: streptococcus preparation. J Surg Res, 1992, 52: 79.
3 Hayashi Y, torisu M. New approach to management of malignant ascites with streptococcal preparation OK-432. III. OK-432 attracts nature killer cell through a chemotactic factor released from activated neutrophils. Surgery, 1990, 107: 74.
(收稿：1995-05-18 修回：1995-12-12), 百拇医药