季节性接触性皮炎花粉斑贴试验阳性部位皮肤IgE检测
作者：严道金 赵辨
单位：210001 南京解放军第四五四医院皮肤科(严道金)；南京医科大学附属第一医院皮肤科[赵辨(指导者)]
关键词：
中华皮肤科杂志/980417 最近研究表明，在季节性接触性皮炎患者中进行花粉斑贴试验[1]或皮肤划痕试验[2，3]呈阳性湿疹样过敏反应。季节性接触性皮炎患者血清总IgE水平、花粉变应原特异性IgE阳性率均高于非季节性变态反应性接触性皮炎[1]。为了观察季节性接触性皮炎局部皮损中IgE状况，我们利用花粉变应原行斑贴试验。对阳性过敏反应部位进行免疫组化检查，结果报道如下。
一、病例和方法
(一)临床资料：①季节性接触性皮炎：诊断标准见文献[1]。符合上述标准的季节性接触性皮炎患者5例(女3例，男2例)。经本人同意在花粉变应原(豚草、法梧、黄蒿和藜草各1例)阳性过敏斑试部位进行活检。②非季节性接触性皮炎(变态反应接触性皮炎)7例(女3例，男4例)，部位包括头、面、手和手臂。经本人同意在标准筛选抗原(硫酸镍、硫柳汞、环氧树脂各1例，卡巴混合物、芳香混合物各2例)阳性过敏斑试部位进行活检。③正常对照：无接触性皮炎、湿疹史，无特应性家族史，无寄生虫感染史的2例健康者分别在背部和面部活检。所有受试者在受试前2周及其研究过程中均未用皮质类固醇激素、抗组胺药。
, http://www.100md.com
(二)方法：
1.常规斑贴试验(简称斑试)：用我科研制的一套20种标准筛选系列抗原及斑试器，对临床诊断接触性皮炎进行常规斑试，斑试操作方法按国际通用方法，判断标准以国际接触性皮炎研究组规定的标准为依据，观察时间为斑试后48小时、72小时和96小时[4]。
2.花粉变应原斑试：临床诊断季节性接触性皮炎用花粉(徐州市变态反应研究中心提供的脱脂花粉)行斑试。种类为豚草、法梧、藜草、草、黄蒿、早春、晚春和夏秋。其中早春、晚春和夏秋为多价花粉[5]。方法：用胶带粘贴背部皮肤3次，分别将8种脱脂花粉100μg放入各斑试小室内，然后加入40μl的人工汗液(氯化钠3g、乳酸2ml、硫酸钠1g、尿素2g、硬脂酸2ml，加入蒸馏水使总量成为1L)。设人工汗液作阴性对照。贴于上背部，密封48小时后除去斑试物，隔30分钟观察结果。判断标准：红斑为(+)；红斑、丘疹为(++)；红斑、丘疹和水疱为(+++)。
, 百拇医药
3.病理及免疫组化检查：斑试48小时后，在利多卡因局麻下活检阳性过敏斑试部位的组织。分为2份，1份为常规病理，行HE染色，另1份OCT包埋，液氮中速冻，贮存于-70℃冰箱中备用。采用ABC(亲和素-生物素-过氧化物酶复合物)技术。ABC试剂盒购自美国Vector公司。用生物素结合羊抗人IgE抗体(美国，Vector，1∶100)对冰冻切片进行免疫组化染色。步骤见文献[6]。计数与单抗反应的阳性细胞。方法：C5型(0.5网形目镜R 5/10)显微镜用测微尺(上海第三光学仪器厂)，在酶标单抗阳性细胞数量最多部位的表皮或真皮内，用高倍镜连续4个视野计测微尺内的酶标单抗阳性细胞数，最后×4，则为每mm2表皮内或真皮内酶标单抗阳性细胞数。
二、结果
1.常规病理：季节性接触性皮炎和非季节性接触性皮炎常规病理无明显区别。均见表皮细胞内外水肿，真皮毛细血管扩张及炎性细胞浸润。
, http://www.100md.com
2.免疫组化：5例季节性接触性皮炎花粉变应原斑试阳性过敏反应的组织中，有4例在真皮内存在IgE+细胞。IgE+细胞分别为36个/mm2、56个/mm2、3个/mm2和68个/mm2。每mm2视野中，IgE+细胞占浸润细胞数的百分比分别为3.2、4.8、0.3和5.6。表皮内未见IgE+细胞。仅1例季节性接触性皮炎和7例非季节性接触性皮炎、2例正常对照在表皮和真皮内未检测到IgE+细胞。
三、讨论
本研究利用花粉行斑试诱发季节性接触性皮炎的皮损，然后进行免疫组化方法探讨。结果发现5例季节性接触性皮炎花粉诱发的阳性过敏反应的组织，4例在真皮组织内可检测到IgE+细胞，但表皮内未见IgE+细胞。这一分布特点，与异位性皮炎皮损中表皮和真皮均能检出IgE+细胞明显不同[7]。因为异位性皮炎表皮内IgE存在是取决于特应性状态[8]，所以季节性接触性皮炎可能不存在特应性状态。与此同时，在非季节性接触性皮炎的皮损及正常组织中未检测到IgE+细胞。从而表明：IgE在花粉引起季节性接触性皮炎的皮损中可能起作用。携带IgE的细胞包括郎格罕细胞、树枝状细胞、肥大细胞、嗜碱粒细胞、嗜酸粒细胞。但季节性接触性皮炎真皮IgE+细胞是哪类细胞，有待进一步探讨。
, 百拇医药
参 考 文 献
1 庄丽华, 赵辨. 43例季节性接触皮炎皮肤试验研究. 中华皮肤科杂志, 1996,29∶18-21.
2 大山克已. スキ花粉ガ原因と考ぇらかれゐ皮肤の5例. 日皮会, 1992,102∶31-40.
3 吉川伸子, 村田恭子, 桧垣子, 他. スギ花粉皮肤炎. 临皮,1995,49(5增)∶12-16.
4 庄丽华, 赵辨, 范卫新, 等. 我国斑贴试验标准筛选系列抗原临床实用性研究.临床皮肤科杂志, 1994,23∶175-178.
5 刘彦群, 赵辨. 季节性面部接触性皮炎致病因素及其发病机理的初步探讨. 中华皮肤科杂志, 1992,25∶224-227.
, http://www.100md.com
6 王秉鹤, 蔡钦朝, Rieger A, 等. 异位性皮炎病人皮肤含有异质性携带IgE细胞.临床皮肤科杂志, 1993,22∶171-174.
7 Leung DYM, Schneeberger EE, Siraganian RP. The presence of IgE on macrophages and dendritic cells infiltrating into the skin lesion of atopic dermatitis. Clin Immunol Immuno-pathol, 1987,42∶328-337.
8 Sugiura H, Uehara M, Maeda T. IgE-positive epidermal Langerhans cellsin allergic contact dermatitis lesions provoked in patients with atopic dermatitis. ArchDermatol Res, 1990,282∶295-299.
(收稿：1997-08-24 修回：1997-12-05), 百拇医药
单位：210001 南京解放军第四五四医院皮肤科(严道金)；南京医科大学附属第一医院皮肤科[赵辨(指导者)]
关键词：
中华皮肤科杂志/980417 最近研究表明，在季节性接触性皮炎患者中进行花粉斑贴试验[1]或皮肤划痕试验[2，3]呈阳性湿疹样过敏反应。季节性接触性皮炎患者血清总IgE水平、花粉变应原特异性IgE阳性率均高于非季节性变态反应性接触性皮炎[1]。为了观察季节性接触性皮炎局部皮损中IgE状况，我们利用花粉变应原行斑贴试验。对阳性过敏反应部位进行免疫组化检查，结果报道如下。
一、病例和方法
(一)临床资料：①季节性接触性皮炎：诊断标准见文献[1]。符合上述标准的季节性接触性皮炎患者5例(女3例，男2例)。经本人同意在花粉变应原(豚草、法梧、黄蒿和藜草各1例)阳性过敏斑试部位进行活检。②非季节性接触性皮炎(变态反应接触性皮炎)7例(女3例，男4例)，部位包括头、面、手和手臂。经本人同意在标准筛选抗原(硫酸镍、硫柳汞、环氧树脂各1例，卡巴混合物、芳香混合物各2例)阳性过敏斑试部位进行活检。③正常对照：无接触性皮炎、湿疹史，无特应性家族史，无寄生虫感染史的2例健康者分别在背部和面部活检。所有受试者在受试前2周及其研究过程中均未用皮质类固醇激素、抗组胺药。
, http://www.100md.com
(二)方法：
1.常规斑贴试验(简称斑试)：用我科研制的一套20种标准筛选系列抗原及斑试器，对临床诊断接触性皮炎进行常规斑试，斑试操作方法按国际通用方法，判断标准以国际接触性皮炎研究组规定的标准为依据，观察时间为斑试后48小时、72小时和96小时[4]。
2.花粉变应原斑试：临床诊断季节性接触性皮炎用花粉(徐州市变态反应研究中心提供的脱脂花粉)行斑试。种类为豚草、法梧、藜草、草、黄蒿、早春、晚春和夏秋。其中早春、晚春和夏秋为多价花粉[5]。方法：用胶带粘贴背部皮肤3次，分别将8种脱脂花粉100μg放入各斑试小室内，然后加入40μl的人工汗液(氯化钠3g、乳酸2ml、硫酸钠1g、尿素2g、硬脂酸2ml，加入蒸馏水使总量成为1L)。设人工汗液作阴性对照。贴于上背部，密封48小时后除去斑试物，隔30分钟观察结果。判断标准：红斑为(+)；红斑、丘疹为(++)；红斑、丘疹和水疱为(+++)。
, 百拇医药
3.病理及免疫组化检查：斑试48小时后，在利多卡因局麻下活检阳性过敏斑试部位的组织。分为2份，1份为常规病理，行HE染色，另1份OCT包埋，液氮中速冻，贮存于-70℃冰箱中备用。采用ABC(亲和素-生物素-过氧化物酶复合物)技术。ABC试剂盒购自美国Vector公司。用生物素结合羊抗人IgE抗体(美国，Vector，1∶100)对冰冻切片进行免疫组化染色。步骤见文献[6]。计数与单抗反应的阳性细胞。方法：C5型(0.5网形目镜R 5/10)显微镜用测微尺(上海第三光学仪器厂)，在酶标单抗阳性细胞数量最多部位的表皮或真皮内，用高倍镜连续4个视野计测微尺内的酶标单抗阳性细胞数，最后×4，则为每mm2表皮内或真皮内酶标单抗阳性细胞数。
二、结果
1.常规病理：季节性接触性皮炎和非季节性接触性皮炎常规病理无明显区别。均见表皮细胞内外水肿，真皮毛细血管扩张及炎性细胞浸润。
, http://www.100md.com
2.免疫组化：5例季节性接触性皮炎花粉变应原斑试阳性过敏反应的组织中，有4例在真皮内存在IgE+细胞。IgE+细胞分别为36个/mm2、56个/mm2、3个/mm2和68个/mm2。每mm2视野中，IgE+细胞占浸润细胞数的百分比分别为3.2、4.8、0.3和5.6。表皮内未见IgE+细胞。仅1例季节性接触性皮炎和7例非季节性接触性皮炎、2例正常对照在表皮和真皮内未检测到IgE+细胞。
三、讨论
本研究利用花粉行斑试诱发季节性接触性皮炎的皮损，然后进行免疫组化方法探讨。结果发现5例季节性接触性皮炎花粉诱发的阳性过敏反应的组织，4例在真皮组织内可检测到IgE+细胞，但表皮内未见IgE+细胞。这一分布特点，与异位性皮炎皮损中表皮和真皮均能检出IgE+细胞明显不同[7]。因为异位性皮炎表皮内IgE存在是取决于特应性状态[8]，所以季节性接触性皮炎可能不存在特应性状态。与此同时，在非季节性接触性皮炎的皮损及正常组织中未检测到IgE+细胞。从而表明：IgE在花粉引起季节性接触性皮炎的皮损中可能起作用。携带IgE的细胞包括郎格罕细胞、树枝状细胞、肥大细胞、嗜碱粒细胞、嗜酸粒细胞。但季节性接触性皮炎真皮IgE+细胞是哪类细胞，有待进一步探讨。
, 百拇医药
参 考 文 献
1 庄丽华, 赵辨. 43例季节性接触皮炎皮肤试验研究. 中华皮肤科杂志, 1996,29∶18-21.
2 大山克已. スキ花粉ガ原因と考ぇらかれゐ皮肤の5例. 日皮会, 1992,102∶31-40.
3 吉川伸子, 村田恭子, 桧垣子, 他. スギ花粉皮肤炎. 临皮,1995,49(5增)∶12-16.
4 庄丽华, 赵辨, 范卫新, 等. 我国斑贴试验标准筛选系列抗原临床实用性研究.临床皮肤科杂志, 1994,23∶175-178.
5 刘彦群, 赵辨. 季节性面部接触性皮炎致病因素及其发病机理的初步探讨. 中华皮肤科杂志, 1992,25∶224-227.
, http://www.100md.com
6 王秉鹤, 蔡钦朝, Rieger A, 等. 异位性皮炎病人皮肤含有异质性携带IgE细胞.临床皮肤科杂志, 1993,22∶171-174.
7 Leung DYM, Schneeberger EE, Siraganian RP. The presence of IgE on macrophages and dendritic cells infiltrating into the skin lesion of atopic dermatitis. Clin Immunol Immuno-pathol, 1987,42∶328-337.
8 Sugiura H, Uehara M, Maeda T. IgE-positive epidermal Langerhans cellsin allergic contact dermatitis lesions provoked in patients with atopic dermatitis. ArchDermatol Res, 1990,282∶295-299.
(收稿：1997-08-24 修回：1997-12-05), 百拇医药