钙泊三醇外用治疗可减少银屑病皮损中ICAM-3阳性浸润细胞的表达
作者：蔡绥勍 郑敏 孙国均
单位：310009 杭州，浙江医科大学附属第二医院皮肤科
关键词：银屑病；钙泊三醇；胞间粘附分子
中华皮肤科杂志980606 【摘要】 目的 了解钙泊三醇局部外用治疗对银屑病皮损中细胞间粘附分子3 (ICAM-3) 表达的影响。方法 采用ABC免疫组化法对20例银屑病患者皮损与非皮损部位以及皮损部位治疗前后的ICAM-3、Ki-67和其它免疫分子的表达进行了研究。结果 银屑病皮损部位ICAM-3阳性浸润细胞的表达均明显高于非皮损部位及正常对照组(P均< 0.01)，而且ICAM-3的表达和皮损部位Ki-67、CD3等免疫分子的表达呈正相关。经钙泊三醇外用治疗6周后，皮损部位ICAM-3、Ki-67和CD3的表达均明显减少(P均< 0.01)。结论 外用钙泊三醇治疗银屑病的机制除了有抗角朊细胞增殖的作用外，对可能参与银屑病发病机制的ICAM-3阳性浸润细胞也有作用。
, 百拇医药
Topical Treatment of Calcipotriol Decreases Expression of ICAM-3 Positive Infiltrating Leukocytes in Psoriatic Skin Cai Suiqing, Zheng Min, Sun Guojun. Department of Dermatology, the Second Affiliated Hospital of Zhejiang Medical University, Hangzhou 310009
【Abstract】 Objective To study the effect of topical calcipotriol treatment on the expression of ICAM-3 molecule in infiltrating leukocytes of skin lesions of patients with psoriasis before and after treatment. Methods Expression of ICAM-3,Ki-67 and CD3 was studied in the skin biopsies from 20 patients with chronic plaque type psoriasis before and after topical calcipotriol treatment by using an immunohistochemical techniqueAvidin Biotin Complex (ABC) System. Results ICAM-3, Ki-67 and CD3 positive staining cells in the skin lesions were significantly higher than those in uninvolved skin as well as those of normal controls, and there was a positive correlation between the lesional expression of ICAM-3 and Ki-67 molecules, as well as between lesional expression of ICAM-3 and CD3 molecules. After six weeks of topical application with cacipotriol, the expression of ICAM-3, Ki-67 and CD3 in involved skin were significant decreased (P< 0.01). Conclusion It is indicated that the ,mechanism of topical treatment with calcipotriol in psoriasis involves not only inhibiting keratinocyte proliferation, but also effecting ICAM-3 positive infiltrating leukocytes in lesional skin, which may be involved in the pathogenesis of psoriasis.
, 百拇医药
【Key words】 Psoriasis Calcipotriol Intercellular adhesion molecule
细胞间粘附分子3(ICAM-3)是一种免疫球蛋白超基因家族的成员，与淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)互为配受体，我们已报道ICAM-3在银屑病皮损部位表达异常增高[1]。银屑病作为一种以表皮角朊细胞过度增殖和炎症细胞浸润为特征的慢性炎症性皮肤病，其治疗方法有多种，钙泊三醇是治疗银屑病的一种外用新药，其抗病机理许多国外学者已进行了研究[2，3]。现在我们采用免疫组化方法，观察外用钙泊三醇治疗对银屑病皮损部位ICAM-3、增殖抗原Ki-67和浸润淋巴细胞CD3表达的影响，旨在初步探讨钙泊三醇的治疗机制。
资料和方法
(一)病例：寻常型银屑病患者20例，男16例，女4例；年龄18～67岁，平均44岁；病程16周至30年，平均13年。停止系统治疗至少1个月，停止局部治疗至少2周。活检取材于斑块型银屑病患者胸背部皮损部位及局部外用钙泊三醇(Diavonex)治疗6周后的相应皮肤部位。非皮损部位取材与疗前皮损部位相距至少10cm。取10例正常人背部皮肤为对照。
, 百拇医药
(二)方法与步骤：皮肤标本均用4mm环钻常规取材。标本经OCT复合物包埋后置-80℃冰箱储存待检。用恒冷冰冻切片机制成厚度为4～6μm的连续切片，风干，冷丙酮固定10分后行免疫组化染色。所用的ICAM-3、Ki-67和CD3单抗均为德国Dianova产品。其中ICAM-3单抗系鼠抗人单抗(IgG2a)，能特异性地与组织中炎症细胞表面上的ICAM-3分子结合。Ki-67单抗系鼠抗人单抗(IgG1 kappa)，能特异性地与增殖旺盛的细胞的核抗原结合。CD3单抗系鼠抗人单抗(IgG1)，能特异性地与T细胞结合。ABC染色步骤按参考文献[1]步骤进行：先用正常马血清孵育30分钟，然后在室温中对每一份切片标本分别加入1∶50稀释的ICAM-3、Ki-67和CD3单抗，室温孵育1小时后加生物素标记的二抗，再室温孵育30分钟。滴加AB复合物后室温孵育30分钟，DABH2O2显色，苏木素复染封片。以上步骤间均用0.05mol/L、pH=7.4的PBS冲洗3遍，每次5分钟。省略第一抗体或代之以同种型Isotype相同的不相关抗体为阴性对照。ABC药盒购自美国Vector公司。
, http://www.100md.com
(三)统计方法：本文数据的统计学处理应用SPSS软件进行q检验，两样本秩和检验及两样本相关系数分析。
结 果
1.在胞浆或胞膜处有棕黄色或棕红色颗粒状物质沉积的为阳性细胞。染色结果以阳性细胞密度来表示：即在放大400倍镜下，对每一标本取6个不同视野，观察计数每个视野的平均阳性细胞数。在正常人，ICAM-3阳性细胞在表皮部位的树突状细胞上有少量表达；银屑病皮损部位ICAM-3阳性细胞主要表达在皮损的真皮部位浸润细胞上，而表皮部位ICAM-3阳性细胞极少表达。在正常人，Ki-67在表皮基底层的少量角朊细胞上表达，而银屑病皮损部位Ki-67在表皮基底层的角朊细胞上大量表达。在银屑病皮损中，CD3阳性细胞主要在真皮部位浸润细胞上表达，而在正常人皮肤很少表达。银屑病皮损部位ICAM-3、Ki-67和CD3的表达明显高于非皮损部位及正常人对照组(P均< 0.01)。经外用钙泊三醇6周治疗后，银屑病皮损部位ICAM-3、Ki-67和CD3的表达均明显减少(P均< 0.01)。详见附表。
, 百拇医药
附表 银屑病患者在钙泊三醇外用治疗前后ICAM-3、Ki-67、CD3表达() 组别
例数
ICAM-3
Ki-67
CD3
正常对照组
10
2.0±1.8
17.1±9.5
11.4±7.8
银屑病
非皮损组
, 百拇医药
20
2.1±1.6
28.0±20.0
18.2±6.4
皮损组治疗前
20
45.0±4.7
87.2±9.2
80.3±7.8
皮损组治疗后
20
6.4±2.3
, 百拇医药
18.3±7.1
12.1±5.2
T
-
55
55
55
q1
-
47.0
16.7
29.2
q2
, 百拇医药
-
43.7
22.9
29.7
T 为治疗前组与正常对照组比较的秩和值，P均<0.01
q1 为治疗前组与非皮损组比较的q值，P均<0.01
q2 为治疗前组与治疗后组比较的q值，P均<0.01
2.银屑病皮损部位ICAM-3表达的阳性细胞数与Ki67表达的阳性细胞数呈正相关，r=0.6458，P< 0.01。皮损部位ICAM-3表达的阳性细胞数与CD3表达的阳性细胞数也呈正相关，r=0.7251，P< 0.01。
, 百拇医药
讨 论
ICAM-3和细胞间粘附分子1(ICAM-1)、细胞间粘附分子2(ICAM-2)都是免疫球蛋白超基因家族成员，与LFA-1互为配受体。与ICAM-1、ICAM-2不同的是ICAM-3高水平地表达在休止期的白细胞上， 而在内皮细胞上缺如，它被认为在功能上是最重要的ICAM， 对调节白细胞功能和调节T淋巴细胞与抗原提呈细胞的相互作用非常重要[4]。另外，ICAM-3对细胞粘附的LFA-1/ICAM-1途径有调节作用[5]，而LFA-1/ICAM-1途径在银屑病疾病加重或病程延长中，在银屑病皮损的浸润细胞的细胞粘附中起主要作用[6]。在我们的实验中，银屑病皮损部位ICAM-3、Ki-67和CD3的表达明显高于非皮损部位和正常对照，且皮损部位ICAM-3的表达和角朊细胞增殖抗原Ki-67的表达、T淋巴细胞CD3抗原的表达呈正相关。Griffiths等还发现银屑病患者血清中循环的ICAM-3(cICAM-3)水平也增高且其水平与疾病的严重指数(PASI)相关，与血清中增加的cICAM-1和cTNF-R1相关，所以ICAM-3可能参与银屑病的发病，可能在调节疾病炎症反应的发生中起作用[4]。钙泊三醇作为一种抗银屑病的新型外用药，在临床上取得了良好疗效。我们发现经外用钙泊三醇治疗后的银屑病皮损部位表皮基底层细胞上的Ki-67的表达明显减少，说明钙泊三醇具有抑制角朊细胞增殖的功能。此外，经钙泊三醇外用治疗后的银屑病皮损部位的ICAM-3阳性浸润细胞数量也明显减少，伴随着淋巴细胞CD3抗原表达的明显减少，提示钙泊三醇外用治疗还具有抗炎作用。
, 百拇医药
参考文献
1 蔡绥 , 孙国均, 郑敏. 银屑病皮损ICAM-3表达的免疫组化研究.中国皮肤性病学杂志, 1997,11∶131-132.
2 Chen ML, Perez A, Sanan DK, et al. Induction of Vitamin D receptor mRNA expression in psoriatic plaques correlates with clinical response to 1,25-dihydroxyvitamin D3. J Invest Dermatol, 1996,106∶637-641.
3 Lu I, Gilleaudeau P, Mclane JA, et al. Modulation of epidermal differentiation, tissue inflammation and T-lymphocyte infiltration in psoriatic plaques by topical calcipotriol. J Cutan Pathol, 1996,23∶419-430.
, http://www.100md.com
4 Griffiths CE, Boffa MJ, Gallatin WM, et al. Elevated levels of circulating intercellular adhesion molecule-3 (cICAM-3) in psoriasis. Acta Derm Venereol, 1996,76∶2-5.
5 Campanero MR, del Pozo MA, Arroyo AG, et al. ICAM-3 interacts with LFA1 regulates the LFA-1/ICAM-1 cell adhesion pathway. J Cell Biol, 1993,123∶1007-1016.
6 Onuma S. Immunohistichemical studies of infiltrating cells in early and chronic lesions of psoriasis. J Dermatol, 1994,21∶223-232.
(收稿：1997-09-22 修回：1998-01-04), http://www.100md.com
单位：310009 杭州，浙江医科大学附属第二医院皮肤科
关键词：银屑病；钙泊三醇；胞间粘附分子
中华皮肤科杂志980606 【摘要】 目的 了解钙泊三醇局部外用治疗对银屑病皮损中细胞间粘附分子3 (ICAM-3) 表达的影响。方法 采用ABC免疫组化法对20例银屑病患者皮损与非皮损部位以及皮损部位治疗前后的ICAM-3、Ki-67和其它免疫分子的表达进行了研究。结果 银屑病皮损部位ICAM-3阳性浸润细胞的表达均明显高于非皮损部位及正常对照组(P均< 0.01)，而且ICAM-3的表达和皮损部位Ki-67、CD3等免疫分子的表达呈正相关。经钙泊三醇外用治疗6周后，皮损部位ICAM-3、Ki-67和CD3的表达均明显减少(P均< 0.01)。结论 外用钙泊三醇治疗银屑病的机制除了有抗角朊细胞增殖的作用外，对可能参与银屑病发病机制的ICAM-3阳性浸润细胞也有作用。
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Topical Treatment of Calcipotriol Decreases Expression of ICAM-3 Positive Infiltrating Leukocytes in Psoriatic Skin Cai Suiqing, Zheng Min, Sun Guojun. Department of Dermatology, the Second Affiliated Hospital of Zhejiang Medical University, Hangzhou 310009
【Abstract】 Objective To study the effect of topical calcipotriol treatment on the expression of ICAM-3 molecule in infiltrating leukocytes of skin lesions of patients with psoriasis before and after treatment. Methods Expression of ICAM-3,Ki-67 and CD3 was studied in the skin biopsies from 20 patients with chronic plaque type psoriasis before and after topical calcipotriol treatment by using an immunohistochemical techniqueAvidin Biotin Complex (ABC) System. Results ICAM-3, Ki-67 and CD3 positive staining cells in the skin lesions were significantly higher than those in uninvolved skin as well as those of normal controls, and there was a positive correlation between the lesional expression of ICAM-3 and Ki-67 molecules, as well as between lesional expression of ICAM-3 and CD3 molecules. After six weeks of topical application with cacipotriol, the expression of ICAM-3, Ki-67 and CD3 in involved skin were significant decreased (P< 0.01). Conclusion It is indicated that the ,mechanism of topical treatment with calcipotriol in psoriasis involves not only inhibiting keratinocyte proliferation, but also effecting ICAM-3 positive infiltrating leukocytes in lesional skin, which may be involved in the pathogenesis of psoriasis.
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【Key words】 Psoriasis Calcipotriol Intercellular adhesion molecule
细胞间粘附分子3(ICAM-3)是一种免疫球蛋白超基因家族的成员，与淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)互为配受体，我们已报道ICAM-3在银屑病皮损部位表达异常增高[1]。银屑病作为一种以表皮角朊细胞过度增殖和炎症细胞浸润为特征的慢性炎症性皮肤病，其治疗方法有多种，钙泊三醇是治疗银屑病的一种外用新药，其抗病机理许多国外学者已进行了研究[2，3]。现在我们采用免疫组化方法，观察外用钙泊三醇治疗对银屑病皮损部位ICAM-3、增殖抗原Ki-67和浸润淋巴细胞CD3表达的影响，旨在初步探讨钙泊三醇的治疗机制。
资料和方法
(一)病例：寻常型银屑病患者20例，男16例，女4例；年龄18～67岁，平均44岁；病程16周至30年，平均13年。停止系统治疗至少1个月，停止局部治疗至少2周。活检取材于斑块型银屑病患者胸背部皮损部位及局部外用钙泊三醇(Diavonex)治疗6周后的相应皮肤部位。非皮损部位取材与疗前皮损部位相距至少10cm。取10例正常人背部皮肤为对照。
, 百拇医药
(二)方法与步骤：皮肤标本均用4mm环钻常规取材。标本经OCT复合物包埋后置-80℃冰箱储存待检。用恒冷冰冻切片机制成厚度为4～6μm的连续切片，风干，冷丙酮固定10分后行免疫组化染色。所用的ICAM-3、Ki-67和CD3单抗均为德国Dianova产品。其中ICAM-3单抗系鼠抗人单抗(IgG2a)，能特异性地与组织中炎症细胞表面上的ICAM-3分子结合。Ki-67单抗系鼠抗人单抗(IgG1 kappa)，能特异性地与增殖旺盛的细胞的核抗原结合。CD3单抗系鼠抗人单抗(IgG1)，能特异性地与T细胞结合。ABC染色步骤按参考文献[1]步骤进行：先用正常马血清孵育30分钟，然后在室温中对每一份切片标本分别加入1∶50稀释的ICAM-3、Ki-67和CD3单抗，室温孵育1小时后加生物素标记的二抗，再室温孵育30分钟。滴加AB复合物后室温孵育30分钟，DABH2O2显色，苏木素复染封片。以上步骤间均用0.05mol/L、pH=7.4的PBS冲洗3遍，每次5分钟。省略第一抗体或代之以同种型Isotype相同的不相关抗体为阴性对照。ABC药盒购自美国Vector公司。
, http://www.100md.com
(三)统计方法：本文数据的统计学处理应用SPSS软件进行q检验，两样本秩和检验及两样本相关系数分析。
结 果
1.在胞浆或胞膜处有棕黄色或棕红色颗粒状物质沉积的为阳性细胞。染色结果以阳性细胞密度来表示：即在放大400倍镜下，对每一标本取6个不同视野，观察计数每个视野的平均阳性细胞数。在正常人，ICAM-3阳性细胞在表皮部位的树突状细胞上有少量表达；银屑病皮损部位ICAM-3阳性细胞主要表达在皮损的真皮部位浸润细胞上，而表皮部位ICAM-3阳性细胞极少表达。在正常人，Ki-67在表皮基底层的少量角朊细胞上表达，而银屑病皮损部位Ki-67在表皮基底层的角朊细胞上大量表达。在银屑病皮损中，CD3阳性细胞主要在真皮部位浸润细胞上表达，而在正常人皮肤很少表达。银屑病皮损部位ICAM-3、Ki-67和CD3的表达明显高于非皮损部位及正常人对照组(P均< 0.01)。经外用钙泊三醇6周治疗后，银屑病皮损部位ICAM-3、Ki-67和CD3的表达均明显减少(P均< 0.01)。详见附表。
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附表 银屑病患者在钙泊三醇外用治疗前后ICAM-3、Ki-67、CD3表达() 组别
例数
ICAM-3
Ki-67
CD3
正常对照组
10
2.0±1.8
17.1±9.5
11.4±7.8
银屑病
非皮损组
, 百拇医药
20
2.1±1.6
28.0±20.0
18.2±6.4
皮损组治疗前
20
45.0±4.7
87.2±9.2
80.3±7.8
皮损组治疗后
20
6.4±2.3
, 百拇医药
18.3±7.1
12.1±5.2
T
-
55
55
55
q1
-
47.0
16.7
29.2
q2
, 百拇医药
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43.7
22.9
29.7
T 为治疗前组与正常对照组比较的秩和值，P均<0.01
q1 为治疗前组与非皮损组比较的q值，P均<0.01
q2 为治疗前组与治疗后组比较的q值，P均<0.01
2.银屑病皮损部位ICAM-3表达的阳性细胞数与Ki67表达的阳性细胞数呈正相关，r=0.6458，P< 0.01。皮损部位ICAM-3表达的阳性细胞数与CD3表达的阳性细胞数也呈正相关，r=0.7251，P< 0.01。
, 百拇医药
讨 论
ICAM-3和细胞间粘附分子1(ICAM-1)、细胞间粘附分子2(ICAM-2)都是免疫球蛋白超基因家族成员，与LFA-1互为配受体。与ICAM-1、ICAM-2不同的是ICAM-3高水平地表达在休止期的白细胞上， 而在内皮细胞上缺如，它被认为在功能上是最重要的ICAM， 对调节白细胞功能和调节T淋巴细胞与抗原提呈细胞的相互作用非常重要[4]。另外，ICAM-3对细胞粘附的LFA-1/ICAM-1途径有调节作用[5]，而LFA-1/ICAM-1途径在银屑病疾病加重或病程延长中，在银屑病皮损的浸润细胞的细胞粘附中起主要作用[6]。在我们的实验中，银屑病皮损部位ICAM-3、Ki-67和CD3的表达明显高于非皮损部位和正常对照，且皮损部位ICAM-3的表达和角朊细胞增殖抗原Ki-67的表达、T淋巴细胞CD3抗原的表达呈正相关。Griffiths等还发现银屑病患者血清中循环的ICAM-3(cICAM-3)水平也增高且其水平与疾病的严重指数(PASI)相关，与血清中增加的cICAM-1和cTNF-R1相关，所以ICAM-3可能参与银屑病的发病，可能在调节疾病炎症反应的发生中起作用[4]。钙泊三醇作为一种抗银屑病的新型外用药，在临床上取得了良好疗效。我们发现经外用钙泊三醇治疗后的银屑病皮损部位表皮基底层细胞上的Ki-67的表达明显减少，说明钙泊三醇具有抑制角朊细胞增殖的功能。此外，经钙泊三醇外用治疗后的银屑病皮损部位的ICAM-3阳性浸润细胞数量也明显减少，伴随着淋巴细胞CD3抗原表达的明显减少，提示钙泊三醇外用治疗还具有抗炎作用。
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参考文献
1 蔡绥 , 孙国均, 郑敏. 银屑病皮损ICAM-3表达的免疫组化研究.中国皮肤性病学杂志, 1997,11∶131-132.
2 Chen ML, Perez A, Sanan DK, et al. Induction of Vitamin D receptor mRNA expression in psoriatic plaques correlates with clinical response to 1,25-dihydroxyvitamin D3. J Invest Dermatol, 1996,106∶637-641.
3 Lu I, Gilleaudeau P, Mclane JA, et al. Modulation of epidermal differentiation, tissue inflammation and T-lymphocyte infiltration in psoriatic plaques by topical calcipotriol. J Cutan Pathol, 1996,23∶419-430.
, http://www.100md.com
4 Griffiths CE, Boffa MJ, Gallatin WM, et al. Elevated levels of circulating intercellular adhesion molecule-3 (cICAM-3) in psoriasis. Acta Derm Venereol, 1996,76∶2-5.
5 Campanero MR, del Pozo MA, Arroyo AG, et al. ICAM-3 interacts with LFA1 regulates the LFA-1/ICAM-1 cell adhesion pathway. J Cell Biol, 1993,123∶1007-1016.
6 Onuma S. Immunohistichemical studies of infiltrating cells in early and chronic lesions of psoriasis. J Dermatol, 1994,21∶223-232.
(收稿：1997-09-22 修回：1998-01-04), http://www.100md.com