清热中药对大鼠下丘脑组织AVP含量的影响
作者：徐 刚 张 冰 叶武军
单位：广州 510315 解放军广州医学高等专科学校药理室
关键词：清热中药；大鼠；体温调节中枢；精氨酸加压素
中国现代应用药学990108摘要 目的：清热中药大多具有一定的解热作用，为探讨其解热作用机理，我们选用典型的清热中药黄芩、银花、连翘组成清热方，从体温调节中枢神经介质方面来研究其解热作用机制。方法：选用Wistar大鼠，按体重随机分作3组，背部皮下注射酵母混悬液制造发热模型，给药组灌服清热方颗粒剂，模型组予等量饮用水，正常对照组不作处理。给药2h后断头取脑，用放免方法检测大鼠下丘脑组织中AVP含量。结果：模型组大鼠体温和下丘脑组织中AVP含量均高于正常对照组，给药组大鼠体温低于模型组，而给药组大鼠下丘脑组织中AVP含量高于模型组。结论：实验结果表明AVP参与了酵母致大鼠发热的发热反应，影响体温调节中枢解热介质AVP代谢，增加其含量，从而抑制体温调节点上移是清热中药解热作用机理之一。
, http://www.100md.com
Effect of clearing-heat herbs on content of AVP in rat hypothalamus
Xu Gang(Xu G)，Zhang Bin(Zhang B),Ye Wujun(Ye WJ)(Department of Pharmacology of Guangzhou Medical College,PLA,Guangzhou 510315)
ABSTRACT OBJECTIVE：Antipyretic action is the common effect of clearing-heat herbs.But its mechanism is not very clear.So we selected typical clearing-heat herbs scutellaria root,honeysuckle flower and forsythia fruit to form clearing-heat prescription(CHP) and probed in its antipyretic mechanism on temperature regulation center.METHODS:We divided wistar rats into three groups.Yeast was injected subtaneously to establish fever model.The rats of CHP group were given CHP orally.The rats of model group were given drinking water of equal amount.The control group was not handled.After two hours the rats were put to death by cutting head.The content of AVP in rat hypothalamus was examined with radioimmunoassay(RIA).RESULTS:The temperature and content of AVP in rat hypothalamus of model group was higher than those of control group.The temperature of rat of CHP group was lower than that of model group.But the content of AVP in rat hypothalamus of CHP group was higher than that of model group.CONCLUSION:The first,AVP in rat hypothalamus played a role in fever caused by yeast.The second,affecting metabolism of antipyretic central medium AVP,raising its content and suppressing going up of temperature regulation point was one of antipyretic mechanism of clearing-heat herbs.
, 百拇医药
KEY WORDS clearing-heat herbs,rat,temperature regulation center,AVP
清热中药大多具有一定的解热作用，为探讨其解热作用机制，我们选用典型的清热药黄芩、银花、连翘组成清热方。临床观察及药效实验证明有较好解热作用，我们进一步观察了其对体温调节中枢发热介质前列腺素E2(PGE2)[1]、环磷酸腺苷(cAMP)[2]、去甲肾上腺素(NA)、5-羟色胺(5-HT)[3]、Na+/Ca2+及解热介质精氨酸加压素(AVP)、β-内啡肽(β-EN)的影响。以从中枢体温的正负调节方面来研究其解热作用机理，本文报告清热方对酵母致发热大鼠下丘脑组织中AVP含量的影响。
1 材料与方法
, http://www.100md.com 1.1 实验材料：动物:Wistar大鼠,160～180g,雌雄兼用(北京医科大学实验动物中心，京动字第8910R016)。药物：清热方颗粒剂(北京中医药大学制剂室)。药盒及试剂:125I-AVP RIA KIT(第二军医大学神经生物学教研室);0.9%氯化钠注射液(石家庄第四制药厂，批号:95102301);氢氧化钠(分析纯，齐齐哈尔化工总厂，批号:910623);盐酸(分析纯，北京市北郊化工厂，批号:931023);酵母浸出粉(北京市红星生物化学制品厂，批号:930512)。器材:SN-682放射免疫γ计数器(中国科学院上海原子核研究所日环仪器厂)；手术器械。
1.2 实验方法：选取体温基本一致的大鼠，按体重随机分作3组，清热方组灌服清热方颗粒剂4g/kg，模型组予等量饮用水，正常对照组不作处理，两次体温波动>0.3℃者剔除不用。模型组及给药组大鼠背部皮下注射20%酵母混悬液10ml/kg,5h后测体温给药或饮用水，剔除ΔT<0.8℃者，给药后2h测体温，于安静状态下快速断头取脑，于1min内取出全脑，将全脑立即置于沸生理盐水中煮5min,以灭活酶，保持神经肽的稳定。以灰结节和视交叉之间的中心点为中心确定下丘脑组织，取下丘脑组织30mg左右，称重后移入微型匀浆器中，加入1mol/L HCl 0.5ml,充分匀浆后倒入塑料指形管中，在室温中放置100min使生物活性肽充分溶解在酸中，加入1mol/L NaOH 0.5ml中和酸，离心，取上清液，低温(-20℃以下)保存待测。按平衡饱和加样程序测定下丘脑组织中AVP含量，加样及结果计算按125I-AVP RIA KIT操作说明书进行。AVP含量以pg/mg脑组织湿重表示。
, 百拇医药
2 结 果
模型组及清热方组大鼠致热5h后体温显著升高，与正常对照组之间的差别有非常显著意义。模型组大鼠下丘脑组织中AVP含量明显高于正常对照组，两组之间的差别有显著意义。清热方组大鼠给药后2h体温明显低于模型组，其差别有非常显著意义，大鼠下丘脑组织中AVP含量高于模型组，与模型组比较其差别有显著意义。结果见表1。
3 讨 论
近年来随着对体温正调节研究的深入，有关体温负调节的作用亦日益受到重视，首先人们注意到发热时体温上升并不是无限的，无论感染性或非感染性发热，体温升高大多不超过41℃，这显然是由于人体在发热过程中启动了某种能自动控制以限制体温无限上升的机制，这一机制可将体温控制在一定范围内(热限fever limit)，以避免机体受到伤害，因此发热时体温上升的高度是正负调节相互作用的结果。而且发热在稽留期之后体温还会下降，导致体温回降可能也有负调表1 清热方对酵母致发热大鼠下丘脑组织中AVP含量的影响(±s) 组 别
, 百拇医药
动物数(n)
正常体温
致热后5h体温(ΔT)
给药后2h体温(ΔT)
下丘脑组织中含量(pg/mg)
正常对照组
8
37.45±0.60
37.42±0.59
37.45±0.62
11.42±5.71
模型组
, 百拇医药
9
37.41±0.58
38.57±0.53(1.16±0.23)*1
38.73±0.43(1.32±0.32)*1
19.34±8.94*2
清热方组
8
37.46±0.54
38.70±0.41(1.24±0.32)*1
38.00±0.53(0.53±0.31)*3
, 百拇医药
34.43±18.60*4
注：与正常组比较，*1P<0.01，*2P<0.05；与模型组比较，*3P<0.01，*4P<0.05
节的参与。七、八十年代报道神经肽中有些有降温或解热作用，包括P物质、神经降压素、ACTH、β-内啡肽、精氨酸加压素等[4，5]。
AVP是一种9肽神经递质，分布于中枢神经系统的细胞体、轴突及神经终末，包括其作用部位腹中膈区(ventral septal area,VSA)及中杏仁核(medial amygdaloid nucleus)的神经终末。发热时VSA及中杏仁核部位AVP含量增多；将微量AVP引入VSA能抑制ET、PGE2及IL-1性发热；将微量AVP注入双侧中杏仁核也能抑制IL-1性发热[6，7]。
, 百拇医药
本实验采用大鼠背部皮下注射酵母混悬液复制发热模型，酵母混悬液皮下注射引起炎症反应，通过内生致热原(EP)导致体温调定点上移而发热。大鼠致热5h后体温显著升高，表明造模成功，给药(或饮用水)后2h，模型组大鼠体温未见下降，给药组大鼠体温显著下降，表明清热方对酵母致大鼠发热有解热作用。用RIA方法检测大鼠下丘脑组织中AVP含量，结果模型组大鼠下丘脑组织中AVP含量显著高于正常对照组，说明体温调节中枢AVP参与了酵母致大鼠发热时的体温调节(负调节)。清热方组大鼠下丘脑组织中AVP含量显著高于模型组，与其解热作用有关，清热方可能通过某种途径增加中枢AVP合成、释放，或抑制其灭活，增加体温调节中枢AVP含量，通过其对体温的负调节、限制体温正调节而达到解热作用，是其解热作用机理之一。
作者简介：徐刚，男，35岁。1996年毕业于北京中医药大学中药学院，获博士学位
参考文献
[1] 徐刚，张冰.清热中药对下丘脑组织中PGE2含量的影响.中国中医药科技，1996，5∶16.
, 百拇医药
[2] 徐刚，张冰.清热中药解热作用机理探讨对大鼠下丘脑组织中cAMP含量的影响.中药药理与临床，1997，5∶26.
[3] 徐刚.清热中药解热作用机理探讨对大鼠下丘脑中NA，5-HT含量的影响.中药药理与临床，1996，6∶14.
[4] 李楚杰.发热机制研究的新进展.中国病理生理杂志，1990，6(5)∶375.
[5] 张永和，杜葵琴，刑德君.大鼠内生致热原双相热各期不同脑区神经降压素含量的变化.中国病理生理杂志，1994，10(3)∶254.
[6] Cooper KE.Evidence supporting a role for endogenous vasopressin in fever suppression in the rat.J Physiol,1987,387∶163.
[7] 李文，杜葵琴，张永和.大鼠内生致热原性发热时不同脑区精氨酸加压素和亮氨酸脑啡肽含量的变化.中国病理生理杂志，1994，10(3)∶249.
收稿日期：1998-01-09, 百拇医药
单位：广州 510315 解放军广州医学高等专科学校药理室
关键词：清热中药；大鼠；体温调节中枢；精氨酸加压素
中国现代应用药学990108摘要 目的：清热中药大多具有一定的解热作用，为探讨其解热作用机理，我们选用典型的清热中药黄芩、银花、连翘组成清热方，从体温调节中枢神经介质方面来研究其解热作用机制。方法：选用Wistar大鼠，按体重随机分作3组，背部皮下注射酵母混悬液制造发热模型，给药组灌服清热方颗粒剂，模型组予等量饮用水，正常对照组不作处理。给药2h后断头取脑，用放免方法检测大鼠下丘脑组织中AVP含量。结果：模型组大鼠体温和下丘脑组织中AVP含量均高于正常对照组，给药组大鼠体温低于模型组，而给药组大鼠下丘脑组织中AVP含量高于模型组。结论：实验结果表明AVP参与了酵母致大鼠发热的发热反应，影响体温调节中枢解热介质AVP代谢，增加其含量，从而抑制体温调节点上移是清热中药解热作用机理之一。
, http://www.100md.com
Effect of clearing-heat herbs on content of AVP in rat hypothalamus
Xu Gang(Xu G)，Zhang Bin(Zhang B),Ye Wujun(Ye WJ)(Department of Pharmacology of Guangzhou Medical College,PLA,Guangzhou 510315)
ABSTRACT OBJECTIVE：Antipyretic action is the common effect of clearing-heat herbs.But its mechanism is not very clear.So we selected typical clearing-heat herbs scutellaria root,honeysuckle flower and forsythia fruit to form clearing-heat prescription(CHP) and probed in its antipyretic mechanism on temperature regulation center.METHODS:We divided wistar rats into three groups.Yeast was injected subtaneously to establish fever model.The rats of CHP group were given CHP orally.The rats of model group were given drinking water of equal amount.The control group was not handled.After two hours the rats were put to death by cutting head.The content of AVP in rat hypothalamus was examined with radioimmunoassay(RIA).RESULTS:The temperature and content of AVP in rat hypothalamus of model group was higher than those of control group.The temperature of rat of CHP group was lower than that of model group.But the content of AVP in rat hypothalamus of CHP group was higher than that of model group.CONCLUSION:The first,AVP in rat hypothalamus played a role in fever caused by yeast.The second,affecting metabolism of antipyretic central medium AVP,raising its content and suppressing going up of temperature regulation point was one of antipyretic mechanism of clearing-heat herbs.
, 百拇医药
KEY WORDS clearing-heat herbs,rat,temperature regulation center,AVP
清热中药大多具有一定的解热作用，为探讨其解热作用机制，我们选用典型的清热药黄芩、银花、连翘组成清热方。临床观察及药效实验证明有较好解热作用，我们进一步观察了其对体温调节中枢发热介质前列腺素E2(PGE2)[1]、环磷酸腺苷(cAMP)[2]、去甲肾上腺素(NA)、5-羟色胺(5-HT)[3]、Na+/Ca2+及解热介质精氨酸加压素(AVP)、β-内啡肽(β-EN)的影响。以从中枢体温的正负调节方面来研究其解热作用机理，本文报告清热方对酵母致发热大鼠下丘脑组织中AVP含量的影响。
1 材料与方法
, http://www.100md.com 1.1 实验材料：动物:Wistar大鼠,160～180g,雌雄兼用(北京医科大学实验动物中心，京动字第8910R016)。药物：清热方颗粒剂(北京中医药大学制剂室)。药盒及试剂:125I-AVP RIA KIT(第二军医大学神经生物学教研室);0.9%氯化钠注射液(石家庄第四制药厂，批号:95102301);氢氧化钠(分析纯，齐齐哈尔化工总厂，批号:910623);盐酸(分析纯，北京市北郊化工厂，批号:931023);酵母浸出粉(北京市红星生物化学制品厂，批号:930512)。器材:SN-682放射免疫γ计数器(中国科学院上海原子核研究所日环仪器厂)；手术器械。
1.2 实验方法：选取体温基本一致的大鼠，按体重随机分作3组，清热方组灌服清热方颗粒剂4g/kg，模型组予等量饮用水，正常对照组不作处理，两次体温波动>0.3℃者剔除不用。模型组及给药组大鼠背部皮下注射20%酵母混悬液10ml/kg,5h后测体温给药或饮用水，剔除ΔT<0.8℃者，给药后2h测体温，于安静状态下快速断头取脑，于1min内取出全脑，将全脑立即置于沸生理盐水中煮5min,以灭活酶，保持神经肽的稳定。以灰结节和视交叉之间的中心点为中心确定下丘脑组织，取下丘脑组织30mg左右，称重后移入微型匀浆器中，加入1mol/L HCl 0.5ml,充分匀浆后倒入塑料指形管中，在室温中放置100min使生物活性肽充分溶解在酸中，加入1mol/L NaOH 0.5ml中和酸，离心，取上清液，低温(-20℃以下)保存待测。按平衡饱和加样程序测定下丘脑组织中AVP含量，加样及结果计算按125I-AVP RIA KIT操作说明书进行。AVP含量以pg/mg脑组织湿重表示。
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2 结 果
模型组及清热方组大鼠致热5h后体温显著升高，与正常对照组之间的差别有非常显著意义。模型组大鼠下丘脑组织中AVP含量明显高于正常对照组，两组之间的差别有显著意义。清热方组大鼠给药后2h体温明显低于模型组，其差别有非常显著意义，大鼠下丘脑组织中AVP含量高于模型组，与模型组比较其差别有显著意义。结果见表1。
3 讨 论
近年来随着对体温正调节研究的深入，有关体温负调节的作用亦日益受到重视，首先人们注意到发热时体温上升并不是无限的，无论感染性或非感染性发热，体温升高大多不超过41℃，这显然是由于人体在发热过程中启动了某种能自动控制以限制体温无限上升的机制，这一机制可将体温控制在一定范围内(热限fever limit)，以避免机体受到伤害，因此发热时体温上升的高度是正负调节相互作用的结果。而且发热在稽留期之后体温还会下降，导致体温回降可能也有负调表1 清热方对酵母致发热大鼠下丘脑组织中AVP含量的影响(±s) 组 别
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动物数(n)
正常体温
致热后5h体温(ΔT)
给药后2h体温(ΔT)
下丘脑组织中含量(pg/mg)
正常对照组
8
37.45±0.60
37.42±0.59
37.45±0.62
11.42±5.71
模型组
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9
37.41±0.58
38.57±0.53(1.16±0.23)*1
38.73±0.43(1.32±0.32)*1
19.34±8.94*2
清热方组
8
37.46±0.54
38.70±0.41(1.24±0.32)*1
38.00±0.53(0.53±0.31)*3
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34.43±18.60*4
注：与正常组比较，*1P<0.01，*2P<0.05；与模型组比较，*3P<0.01，*4P<0.05
节的参与。七、八十年代报道神经肽中有些有降温或解热作用，包括P物质、神经降压素、ACTH、β-内啡肽、精氨酸加压素等[4，5]。
AVP是一种9肽神经递质，分布于中枢神经系统的细胞体、轴突及神经终末，包括其作用部位腹中膈区(ventral septal area,VSA)及中杏仁核(medial amygdaloid nucleus)的神经终末。发热时VSA及中杏仁核部位AVP含量增多；将微量AVP引入VSA能抑制ET、PGE2及IL-1性发热；将微量AVP注入双侧中杏仁核也能抑制IL-1性发热[6，7]。
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本实验采用大鼠背部皮下注射酵母混悬液复制发热模型，酵母混悬液皮下注射引起炎症反应，通过内生致热原(EP)导致体温调定点上移而发热。大鼠致热5h后体温显著升高，表明造模成功，给药(或饮用水)后2h，模型组大鼠体温未见下降，给药组大鼠体温显著下降，表明清热方对酵母致大鼠发热有解热作用。用RIA方法检测大鼠下丘脑组织中AVP含量，结果模型组大鼠下丘脑组织中AVP含量显著高于正常对照组，说明体温调节中枢AVP参与了酵母致大鼠发热时的体温调节(负调节)。清热方组大鼠下丘脑组织中AVP含量显著高于模型组，与其解热作用有关，清热方可能通过某种途径增加中枢AVP合成、释放，或抑制其灭活，增加体温调节中枢AVP含量，通过其对体温的负调节、限制体温正调节而达到解热作用，是其解热作用机理之一。
作者简介：徐刚，男，35岁。1996年毕业于北京中医药大学中药学院，获博士学位
参考文献
[1] 徐刚，张冰.清热中药对下丘脑组织中PGE2含量的影响.中国中医药科技，1996，5∶16.
, 百拇医药
[2] 徐刚，张冰.清热中药解热作用机理探讨对大鼠下丘脑组织中cAMP含量的影响.中药药理与临床，1997，5∶26.
[3] 徐刚.清热中药解热作用机理探讨对大鼠下丘脑中NA，5-HT含量的影响.中药药理与临床，1996，6∶14.
[4] 李楚杰.发热机制研究的新进展.中国病理生理杂志，1990，6(5)∶375.
[5] 张永和，杜葵琴，刑德君.大鼠内生致热原双相热各期不同脑区神经降压素含量的变化.中国病理生理杂志，1994，10(3)∶254.
[6] Cooper KE.Evidence supporting a role for endogenous vasopressin in fever suppression in the rat.J Physiol,1987,387∶163.
[7] 李文，杜葵琴，张永和.大鼠内生致热原性发热时不同脑区精氨酸加压素和亮氨酸脑啡肽含量的变化.中国病理生理杂志，1994，10(3)∶249.
收稿日期：1998-01-09, 百拇医药