HPLC法测定盐酸美沙酮口服液的含量
作者：陈 英
单位：广州 510180 广东省药品检验所
关键词：HPLC；盐酸美沙酮；口服液
中国现代应用药学990116摘要 目的：建立了测定盐酸美沙酮口服液中盐酸美沙酮含量的方法。方法：高效液相色谱法。固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相：甲醇-水-三乙胺(88∶12∶0.24)(用磷酸调节pH值至7.3)，检测波长为292nm。结果：方法回收率为99.8%，n=6,RSD为0.85%，线性范围为0.1～2.0mg/ml，相关系数为0.9999。结论：该方法操作简便，结果准确，适用于该制剂的含量测定。
Determination of methadone hydrochloride in oral solution by HPLC
Chen Ying(Chen Y)(Guangdong Provincial Iustitute for Drug Control,Guangzhou 510180)
, http://www.100md.com
ABSTRACT OBJECTIVE：The HPLC method was established for determination of methadone hydrochloride in oral solution.METHODS:The HPLC method was developed under the following conditions:column,C18;the wavelength of the UV detector was set at 292nm;the mobile phase was methanol-water-triethylamine(88∶12∶0.24),adjusted the solution with phosphoric acid to pH 7.3.RESULTS:The recovery was 99.8%(n=6),the RSD was 0.85%.The linear range was from 0.1～2.0mg/ml(r=0.9999).CONCLUSION:The method was simple and accurate and suitable for quantitation analysis on the preparation.
, 百拇医药
KEY WORDS HPLC,methadone hydrochloride,oral solution
美沙酮是一种合成类麻醉性镇痛药，具有吗啡样药理作用，它是典型的μ-受体激动剂，能控制阿片类的戒断症状，是当今许多国家用于戒毒和维持疗法的有效药物之一。对盐酸美沙酮制剂的含量测定，有以乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相，在苯基柱上进行的HPLC法[1]、UV法[2]及提取容量法[3]等，国内尚未见有HPLC法报道。本文采用的HPLC法，具有与辅料峰分离效果好，专属性强，定量准确可靠，方法简便易行的特点，可满足制剂含量测定的要求。
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津LC-10A型高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，岛津C-R4A型数据处理机。
, http://www.100md.com
1.2 试药
盐酸美沙酮口服液及辅料由广东某药厂提供，盐酸美沙酮对照品为符合药典规格的原料(含量为100.0%)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
固定相：十八烷基硅烷键合硅胶(4.6×250mm，大连化学物理所)；柱温：30℃；流动相：甲醇-水-三乙胺(88∶12∶0.24)(用磷酸调节pH值至7.3)；流速：1.0ml/min;检测波长：292nm;进样量：20μl；灵敏度：0.02AUFS。在此色谱条件下，得色谱图见图1。
2.2 线性关系
取盐酸美沙酮对照品适量，精密称定，加水制成每1ml中含10mg的溶液，精密量取1,3,5,10,15及20ml,分别置于100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。取20μl注入液相色谱仪，以峰面积(A)对浓度(c)进行线性回归，得线性回归方程为:c=2.15×10-7A-1.15×10-2,r=0.9999(n=6)。线性范围为0.1～2.0mg/ml。
, 百拇医药
2.3 回收率试验
按处方配比，在辅料中精密加入一定量的盐酸美沙酮对照品，加水至50ml摇匀。取20μl注入液相色谱仪，测定含量，计算回收率(表1)，求得平均回收率为99.8%,RSD为0.85%。
图1 盐酸美沙酮高效液相色谱图
1-盐酸美沙酮；2-辅料
表1 回收率试验结果 编 号
投入量(mg)
测得量(mg)
回收率(%)
1
50.95
, http://www.100md.com
50.89
99.88
2
51.05
50.92
99.74
3
49.27
49.01
99.47
4
50.00
49.23
, http://www.100md.com
98.46
5
50.23
50.36
100.25
6
50.91
51.43
101.02
2.4 样品的测定
精密量取20μl样品，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积计算，6批样品经5次测定，平均含量分别为100.7%，96.4%，100.3%，99.9%，98.8%，99.7%；并与文献方法[1]做了对比实验，经3次测定，其平均结果分别相应为：99.8%，96.0%，100.9%，99.2%，99.3%和100.4%。
, 百拇医药
2.5 精密度与重现性
取一样品溶液连续进样6次，测定日内RSD为0.55%(n=6)，同一样品，连续3d每天取样测定1次，测定日间RSD为0.67%(n=3)。
3 讨 论
3.1 波长的选择：盐酸美沙酮溶液的紫外光吸收图谱显示在292nm波长处有最大吸收，因而选作检测波长。
3.2 流动相的选择：保持甲醇-水比例不变，改变流动相pH值，容量因子k′随pH值增大而增大；保持流动相pH值不变，容量因子k′随甲醇含量的增大而减小；在不同的pH值条件下，适当调节流动相中甲醇-水的比例，使容量因子k′恒定在4～5之间，此时柱效(N)及拖尾因子(T)与流动相pH值的关系见表2。经反复实验筛选，确定流动相为甲醇-水-三乙胺(88∶12∶0.24)(用磷酸调节pH值为7.3)，其中三乙胺作为封尾剂，该条件下，样品峰形尖锐、对称，容量因子约为5，与辅料峰分离完全，10min内即可完成一个实验周期。
, http://www.100md.com
3.3 与文献报道的HPLC法[1]比较，本法避免使用磷酸盐及价格昂贵的乙腈，而选用甲醇-水系统，有利于延长色谱柱的使用寿命，且节约实验经费；本法不需特表2 柱效(N)与拖尾因子(T)与流动相pH的关系殊的色谱柱，而采用常备的C18柱，使方法简便易行。曾在三种不同牌号的色谱柱上试验，均可获得满意的分离效果，且色谱峰形对称、尖锐，显示了该色谱体系具有良好的适用性。 pH
3.5
4.0
4.5
5.0
5.5
6.0
6.5
, 百拇医药
7.0
7.3
N
572
599
638
样品分叉
720
744
850
1012
1789
T
, http://www.100md.com
1.25
1.25
1.15
(原因未明)
1.15
1.12
1.12
1.11
1.01
参考文献
[1] USP.Ⅹ Ⅹ Ⅲ.1995∶970.
[2] BP.1993∶1002.
[3] 中国药典.二部.1995∶682.
收稿日期：1997-12-30, 百拇医药
单位：广州 510180 广东省药品检验所
关键词：HPLC；盐酸美沙酮；口服液
中国现代应用药学990116摘要 目的：建立了测定盐酸美沙酮口服液中盐酸美沙酮含量的方法。方法：高效液相色谱法。固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相：甲醇-水-三乙胺(88∶12∶0.24)(用磷酸调节pH值至7.3)，检测波长为292nm。结果：方法回收率为99.8%，n=6,RSD为0.85%，线性范围为0.1～2.0mg/ml，相关系数为0.9999。结论：该方法操作简便，结果准确，适用于该制剂的含量测定。
Determination of methadone hydrochloride in oral solution by HPLC
Chen Ying(Chen Y)(Guangdong Provincial Iustitute for Drug Control,Guangzhou 510180)
, http://www.100md.com
ABSTRACT OBJECTIVE：The HPLC method was established for determination of methadone hydrochloride in oral solution.METHODS:The HPLC method was developed under the following conditions:column,C18;the wavelength of the UV detector was set at 292nm;the mobile phase was methanol-water-triethylamine(88∶12∶0.24),adjusted the solution with phosphoric acid to pH 7.3.RESULTS:The recovery was 99.8%(n=6),the RSD was 0.85%.The linear range was from 0.1～2.0mg/ml(r=0.9999).CONCLUSION:The method was simple and accurate and suitable for quantitation analysis on the preparation.
, 百拇医药
KEY WORDS HPLC,methadone hydrochloride,oral solution
美沙酮是一种合成类麻醉性镇痛药，具有吗啡样药理作用，它是典型的μ-受体激动剂，能控制阿片类的戒断症状，是当今许多国家用于戒毒和维持疗法的有效药物之一。对盐酸美沙酮制剂的含量测定，有以乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相，在苯基柱上进行的HPLC法[1]、UV法[2]及提取容量法[3]等，国内尚未见有HPLC法报道。本文采用的HPLC法，具有与辅料峰分离效果好，专属性强，定量准确可靠，方法简便易行的特点，可满足制剂含量测定的要求。
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津LC-10A型高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，岛津C-R4A型数据处理机。
, http://www.100md.com
1.2 试药
盐酸美沙酮口服液及辅料由广东某药厂提供，盐酸美沙酮对照品为符合药典规格的原料(含量为100.0%)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
固定相：十八烷基硅烷键合硅胶(4.6×250mm，大连化学物理所)；柱温：30℃；流动相：甲醇-水-三乙胺(88∶12∶0.24)(用磷酸调节pH值至7.3)；流速：1.0ml/min;检测波长：292nm;进样量：20μl；灵敏度：0.02AUFS。在此色谱条件下，得色谱图见图1。
2.2 线性关系
取盐酸美沙酮对照品适量，精密称定，加水制成每1ml中含10mg的溶液，精密量取1,3,5,10,15及20ml,分别置于100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。取20μl注入液相色谱仪，以峰面积(A)对浓度(c)进行线性回归，得线性回归方程为:c=2.15×10-7A-1.15×10-2,r=0.9999(n=6)。线性范围为0.1～2.0mg/ml。
, 百拇医药
2.3 回收率试验
按处方配比，在辅料中精密加入一定量的盐酸美沙酮对照品，加水至50ml摇匀。取20μl注入液相色谱仪，测定含量，计算回收率(表1)，求得平均回收率为99.8%,RSD为0.85%。
图1 盐酸美沙酮高效液相色谱图
1-盐酸美沙酮；2-辅料
表1 回收率试验结果 编 号
投入量(mg)
测得量(mg)
回收率(%)
1
50.95
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50.89
99.88
2
51.05
50.92
99.74
3
49.27
49.01
99.47
4
50.00
49.23
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98.46
5
50.23
50.36
100.25
6
50.91
51.43
101.02
2.4 样品的测定
精密量取20μl样品，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积计算，6批样品经5次测定，平均含量分别为100.7%，96.4%，100.3%，99.9%，98.8%，99.7%；并与文献方法[1]做了对比实验，经3次测定，其平均结果分别相应为：99.8%，96.0%，100.9%，99.2%，99.3%和100.4%。
, 百拇医药
2.5 精密度与重现性
取一样品溶液连续进样6次，测定日内RSD为0.55%(n=6)，同一样品，连续3d每天取样测定1次，测定日间RSD为0.67%(n=3)。
3 讨 论
3.1 波长的选择：盐酸美沙酮溶液的紫外光吸收图谱显示在292nm波长处有最大吸收，因而选作检测波长。
3.2 流动相的选择：保持甲醇-水比例不变，改变流动相pH值，容量因子k′随pH值增大而增大；保持流动相pH值不变，容量因子k′随甲醇含量的增大而减小；在不同的pH值条件下，适当调节流动相中甲醇-水的比例，使容量因子k′恒定在4～5之间，此时柱效(N)及拖尾因子(T)与流动相pH值的关系见表2。经反复实验筛选，确定流动相为甲醇-水-三乙胺(88∶12∶0.24)(用磷酸调节pH值为7.3)，其中三乙胺作为封尾剂，该条件下，样品峰形尖锐、对称，容量因子约为5，与辅料峰分离完全，10min内即可完成一个实验周期。
, http://www.100md.com
3.3 与文献报道的HPLC法[1]比较，本法避免使用磷酸盐及价格昂贵的乙腈，而选用甲醇-水系统，有利于延长色谱柱的使用寿命，且节约实验经费；本法不需特表2 柱效(N)与拖尾因子(T)与流动相pH的关系殊的色谱柱，而采用常备的C18柱，使方法简便易行。曾在三种不同牌号的色谱柱上试验，均可获得满意的分离效果，且色谱峰形对称、尖锐，显示了该色谱体系具有良好的适用性。 pH
3.5
4.0
4.5
5.0
5.5
6.0
6.5
, 百拇医药
7.0
7.3
N
572
599
638
样品分叉
720
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850
1012
1789
T
, http://www.100md.com
1.25
1.25
1.15
(原因未明)
1.15
1.12
1.12
1.11
1.01
参考文献
[1] USP.Ⅹ Ⅹ Ⅲ.1995∶970.
[2] BP.1993∶1002.
[3] 中国药典.二部.1995∶682.
收稿日期：1997-12-30, 百拇医药