17种清热中药抗活性氧作用的研究△
作者：龙盛京 罗佩卓 覃日昌
单位：龙盛京，广西医科大学(南宁530021)；罗佩卓 覃日昌，广西中医学院
关键词：化学发光分析法；抗活性氧；双氧水；清热中药
中草药/990120 摘 要 为从天然产物中筛选出具有较好抗氧化性能的药物，利用H2O2-CTMAB-鲁米诺发光体系，研究了17种清热中药水提取物抗活性氧的作用。结果表明其对H2O2均有不同程度的清除作用，并呈量效关系。从抗氧化值(AOV)比较，白头翁(AOV＝-0.836)抗氧化作用比维生素C强；连翘、鸦胆子、鱼腥草、半枝莲和大青叶(AOV<3)也具有较强的抗氧化能力。结果提示：白头翁、连翘、鸦胆子、鱼腥草、半枝莲和大青叶是首选的抗活性氧的药物。
H2O2为活性氧之一，活性氧分子在生物体内所引起的脂质过氧化可造成组织和细胞的损伤，从而引起病理过程。而机体内清除活性氧的活性物质不足是造成这种损伤的直接原因〔1〕。因此，从天然产物中寻找抗活性氧的物质已经引起国内外广泛重视。与人工合成的抗氧化剂相比较，中药抗氧化剂具有易得、经济，已有长期使用经验和毒副作用小等明显优点，故寻找和筛选具有良好的抗氧化性能的中草药对探索开发新药、指导老药临床新用及了解中药的作用机制等都有俾益。我们采用化学发光分析法，利用H2O2-CTMAB-鲁米诺发光体系，研究17种常用清热中药水提取物抗活性氧的作用。
, http://www.100md.com
1 实验材料与仪器
1.1 试样：受检中药均购自南宁药材站，经广西中医学院药学系周子静教授鉴定。金银花为忍冬科植物忍冬Lonioera Japonica Thunb的干燥花蕾；白头翁为毛茛科植物白头翁Pulsatilla chinensis (Bge) Regel的干燥根茎；黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch的干燥根茎；山豆根为豆科植物越南槐Sophora tonkinensis Gapnep的干燥根及根茎；黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根；天花粉为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirlowii Maxim的干燥根；知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bunge的干燥根茎；射干为鸢尾科植物射干Belamcanda chinensis (L)DC的干燥根茎；黄柏为芸香科植物黄柏Phellodendron amurense Rupr除去栓皮的树皮；大青叶为十字花科植物松蓝Lsatis indigotica Fort的干燥叶；连翘为木犀科植物连翘Forsythia Suspensa (Thunb)Vahl的干燥果实；鱼腥草为三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb的干燥全草；栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实；半边莲为桔梗科植物半边莲Lobelia chinensis Lour的干燥全草；鸦胆子为苦木科植物鸦胆子Brucea javaniea(L) Merr的干燥成熟果实；半枝莲为唇形科植物半枝莲Scutellaria barbata D.Don的干燥全草；玉竹为百合科植物玉竹Polygonatum oddratum (Mill) Drnce的干燥根茎。
, 百拇医药
1.2 试剂：鲁米诺(Luminol)为德国Merck-schuchrat公司产品；溴代十六烷基三甲胺(CTMAB)、双氧水、碳酸钠和碳酸氢钠等均为国产分析纯试剂；所用水均为双蒸水。
1.3 仪器：DG3030发光光度计(南京华东电子管厂生产)。
2 方法
2.1 供试液的制备：分别称取各受检中药材5 g，用150 mL蒸馏水冷浸1 h后，煮沸15 min，过滤，药渣第2次、第3次分别加水100 mL第4次加水50 mL，各煮沸15 min，合并4次滤液，水浴浓缩至20 mL，装瓶备用(样品液1 mL相当于药材0.25 g)，临用时取原液1份，加双蒸水4份稀释成(1 mL溶液相当于原药材0.05 g)供试液。
2.2 固体物质含量的测定：准确量取中药水提液各1.00 mL，置于经洗净，干燥至恒重的称量瓶中，于105℃烘箱中烘烤3 h，冷后称重，平行做2次，取平均值，以总固体含量mg/mL提取液表示。
, 百拇医药
2.3 测定方法：参照文献〔2〕的方法略加改进，以提高发光体系的发光强度和稳定性。在测定管中依次加入10 mmol/L H2O2(临用时新配)100 μL、0.2 mol/L pH 10.77碳酸盐缓冲液500 μL，加入不同体积的供试液(同时用双蒸水作空白对照)，混匀后置于仪器测定室中于30℃加入5 mmol/L鲁米诺和10 mmol/L CTMAB的等量混合液500 μL，启动反应，延时15 s后，测定10 s内发光强度的平均值。每种样品平行测定3次，取平均值。以下式计算相对清除率，用发光清除率的大小来表示中药清除H2O2作用的大小。
3 结果
3.1 表面活性剂对鲁米诺-H2O2发光体系的影响：按实验方法加入混合液500 μL(鲁米诺5 mL与表面活性剂5 mL混合)，同时以鲁米诺与双蒸水等量混合液作为空白对照，结果见表1。结果表明，非离子型表面活性剂和阴离子型表面活性剂对H2O2-鲁米诺发光体系基本无增强发光作用。而阳离子型表面活性剂CTMAB能增强该体系的发光强度。
, 百拇医药
表1 不同表面活性剂对鲁米诺-H2O2发光体系的影响(n=6) 表面活性剂
浓 度
发光值(
±s)
吐温-20
1%
477.0±41.0
吐温-40
1%
467.8±58.1
吐温-80
, 百拇医药
1%
577.8±15.5
聚乙烯醇
1%
503.0±62.3
CTMAB
10 mmol/L
2464.0±62.3
十二烷基硫酸钠
10 mmol/L
489.0±90.5
曲拉通-100
, 百拇医药
10 mmol/L
482.2±68.1
十二烷基磺酸钠
10 mmol/L
444.5±55.8
空白对照
—
475.1±85.8
3.2 鲁米诺与CTMAB不同浓度混合液对发光体系的影响：按实验方法加入鲁米诺与CTMAB不同浓度混合液500 μL。表2结果所示：鲁米诺与CTMAB按1∶1混合比其它比例混合时的发光强度大，并且稳定性增加。这表明CTMAB表面活性剂对H2O2-鲁米诺发光体系具有增敏增稳作用。表2 鲁米诺与CTMAB不同浓度混合液对发光体系的影响(n＝6) 编号
, 百拇医药
用 量(mL)
发光强度
(±s)
鲁米诺
(5 mmol/L)
CTMAB
(10 mmol/L)
双蒸水
1
5
1
4
, 百拇医药
911.67±236.84
2
5
2
3
1 391.00±116.15
3
5
3
2
1 956.80±124.05
4
5
, 百拇医药
4
1
2 186.00±92.39
5
5
5
0
2 464.00±62.33
6
4
5
1
2 029.60±283.28
, 百拇医药
7
3
5
2
1 748.40±309.37
8
2
5
3
1 440.17±157.94
9
1
5
, 百拇医药
4
1 193.00±179.83
10
5
0
5
477.83±20.49
3.3 清热中药抗活性氧作用：在弱碱条件下，H2O2氧化鲁米诺而发光，发光体系在CTMAB的存在下，可使发光体系增敏和增稳。在这发光体系中加入待测液，若待测液能清除H2O2，则体系发光强度下降，故可用发光抑制率的大小来表示待测液清除H2O2的程度。我们用公认的抗氧剂——Vit C作阳性对照物。17种清热中药水提液对H2O2的消除作用见表3。表3 17种清热中药水提液对H2O2的清除率(%) 药 名
, 百拇医药
颜 色
提取液总固体含量
(mg/mL)
0.05 g/mL中药水提液用量(μL)
CI50
AOV
10
5
2
原液
(μL)
固体
, 百拇医药 (μL)
金银花
棕褐
123.0
98.52
89.27
40.04
2.31
284.13
3.207
半枝莲
黑褐
42.2
, 百拇医药
64.46
71.84
38.92
2.82
119.00
1.151
黄 柏
棕褐
34.3
52.68
41.09
19.58
8.37
, http://www.100md.com
287.09
14.40
栀 子
棕褐
69.8
52.86
70.82
25.39
4.72
329.46
8.966
山豆根
棕褐
, 百拇医药
6.6
37.22
9.91
10.27
32.54
214.76
43.79
连 翘
棕黑
31.6
13.30
60.55
50.88
, 百拇医药
3.14
99.22
0.9968
射 干
棕褐
43.8
36.18
24.91
10.39
23.79
1042.0
157.87
半边莲
, 百拇医药
棕黑
87.7
64.29
18.13
2.59
8.31
728.79
37.81
黄 连
棕黑
32.7
66.27
41.69
, 百拇医药
28.58
5.64
184.43
5.811
知 母
黄棕
117.6
70.82
70.35
32.28
3.39
398.66
7.662
, 百拇医药
白头翁
棕黑
28.9
96.42
92.67
63.04
0.94
27.17
-0.836
黄 芩
棕褐
76.6
81.38
, 百拇医药
78.57
33.88
2.88
220.61
3.072
鸦胆子
黄褐
21.3
88.43
68.59
26.64
3.48
74.12
, http://www.100md.com
0.6533
鱼腥草
棕褐
53.1
75.04
62.42
46.13
2.49
132.22
1.11
大青叶
棕褐
95.5
, http://www.100md.com
83.86
69.95
45.86
2.31
229.85
2.403
天花粉
橙黄
38.7
27.24
8.83
4.06
64.44
, http://www.100md.com
2493.8
1028.97
玉 竹
橙黄
168.9
42.61
24.95
20.27
21.74
3671.9
510.63
Vit C
10.0
, 百拇医药
97.83
66.76
11.63
3.95
39.50
0.00
结果表明：17种清热中药水提取物对H2O2都有一定的清除作用，并且大多数呈线性量效关系，揭示它们都有直接清除H2O2的作用，但清除能力不同。如果单从量效关系曲线回归方程所推出的原液CI50(当清除率为50%时所需提取液用量的体积量)或固体CI50(当清除率为50%时所需水提取物中固体量)来比较抗氧化程度的大小，往往有些情况不好比较，为了便于统一比较，我们以生物体内公认的抗氧化剂Vit C做为抗氧化能力的比较标准，按下式计算中药对H2O2的抗氧化值(AOV)。
, http://www.100md.com
SL测＝原液CI50×固体CI50
SL标＝Vit C原液CI50×Vit C固体CI50
规定Vit C的AOV为零，当AOV为负值时，该中药抗双氧水的能力就比Vit C强，反之亦然。正值越大，与Vit C相比，抗双氧水的能力就越弱。从表3中AOV值来看，白头翁的抗H2O2氧化能力比维生素强；AOV值<3的有连翘、鸦胆子、鱼腥草、半枝莲、大青叶，这5种中药水提液具有强的抗双氧水的能力；3
4 讨论
4.1 H2O2-鲁米诺反应启动后发光强度在几秒内出现最高值，随后逐渐下降，发光强度和H2O2含量成正比〔2〕。在H2O2-鲁米诺体系中加入表面活性剂，结果表明非离子型和阴离子型的表面活性剂对H2O2-鲁米诺发光体系没有增敏增稳作用，而阳离子型表面活性剂CTMAB可以使该体系发光强度增大。这种增敏作用是由于鲁米诺与双氧水在碱性条件下的化学发光是一种亲核加成反应过程，CTMAB胶束的生成可加快反应速度，从而引发化学发光反应输出信号的增加〔3〕。此外，CTMAB胶束的形成有利于反应物激发态寿命的延长，并且在胶束的stern区较小极性的环境中也有利于长时间辐射〔4〕，这两方面作用的结果可增大发光体系的稳定性。因此用H2O2-鲁米诺-CTMAB化学发光体系来研究天然产物抗活性氧的作用，具有稳定性高、试剂用量少、发光强度大的优点。
, 百拇医药
4.2 从研究结果来看，大多数中药水提取液的量效关系呈线型关系，但也有例外，如半边莲、栀子、连翘，当药液用量为10 μL时的清除率反而比5 μL时的小，这可能是因为水提液中含有某些金属微量元素，当金属浓度到达一定程度时，对发光有增大的影响。
4.3 中药抗氧化能力的大小与植物所含化学成分性质有关，与有效成分的溶解性有关。在比较天然产物水溶性物质的抗氧化能力时，以Vit C这种世界公认的体内优良抗氧化剂作为比较标准是合理并可被人们所接受的。AOV能较全面反映水溶性物质抗氧化能力大小。笔者认为AOV值<5的中药具有比较强的抗氧化能力，而AOV值>10的中药其抗氧化能力就比较弱。从提取液的颜色来看，一般颜色较深者，其对H2O2的清除率较高，这也提示这些清热中药水提液对H2O2的清除率与其所含的有效成分即溶出浓度有关，可能也与植物色素有关。
我们的研究证明了清热中药在体外对H2O2具有直接清除作用，而在体内是否也有或仅间接发挥作用，尚待进一步研究。
, 百拇医药
*Address:LongShengjing,Guangxi University of Medical Sciences ,Nanning
作者简介：龙盛京 男,副教授.广西师范大学化学系毕业,现任广西医科大学基础部副主任,广西高校化学学会常务理事.从事教学工作及医学自由基研究工作,目前研究方向:用化学发光方法研究天然产物抗活性氧的作用.曾参与承担并完成两项国家自然科学基金项目;现主持两项省教育厅科研项目.发表科研论文30余篇.
△国家自然科学基金资助项目No39060028
参考文献
[1] 陈 缓，等.自由基医学.北京：人民军医出版社，1991：223
[2] 龙盛京，等.广西医学院学报，1992，9(3)：1
[3] CA，94:21898o;105:6904 l
[4] Paleos CM. J Photochem,1982，18(4):327
(1998-01-28 收稿), http://www.100md.com
单位：龙盛京，广西医科大学(南宁530021)；罗佩卓 覃日昌，广西中医学院
关键词：化学发光分析法；抗活性氧；双氧水；清热中药
中草药/990120 摘 要 为从天然产物中筛选出具有较好抗氧化性能的药物，利用H2O2-CTMAB-鲁米诺发光体系，研究了17种清热中药水提取物抗活性氧的作用。结果表明其对H2O2均有不同程度的清除作用，并呈量效关系。从抗氧化值(AOV)比较，白头翁(AOV＝-0.836)抗氧化作用比维生素C强；连翘、鸦胆子、鱼腥草、半枝莲和大青叶(AOV<3)也具有较强的抗氧化能力。结果提示：白头翁、连翘、鸦胆子、鱼腥草、半枝莲和大青叶是首选的抗活性氧的药物。
H2O2为活性氧之一，活性氧分子在生物体内所引起的脂质过氧化可造成组织和细胞的损伤，从而引起病理过程。而机体内清除活性氧的活性物质不足是造成这种损伤的直接原因〔1〕。因此，从天然产物中寻找抗活性氧的物质已经引起国内外广泛重视。与人工合成的抗氧化剂相比较，中药抗氧化剂具有易得、经济，已有长期使用经验和毒副作用小等明显优点，故寻找和筛选具有良好的抗氧化性能的中草药对探索开发新药、指导老药临床新用及了解中药的作用机制等都有俾益。我们采用化学发光分析法，利用H2O2-CTMAB-鲁米诺发光体系，研究17种常用清热中药水提取物抗活性氧的作用。
, http://www.100md.com
1 实验材料与仪器
1.1 试样：受检中药均购自南宁药材站，经广西中医学院药学系周子静教授鉴定。金银花为忍冬科植物忍冬Lonioera Japonica Thunb的干燥花蕾；白头翁为毛茛科植物白头翁Pulsatilla chinensis (Bge) Regel的干燥根茎；黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch的干燥根茎；山豆根为豆科植物越南槐Sophora tonkinensis Gapnep的干燥根及根茎；黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根；天花粉为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirlowii Maxim的干燥根；知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bunge的干燥根茎；射干为鸢尾科植物射干Belamcanda chinensis (L)DC的干燥根茎；黄柏为芸香科植物黄柏Phellodendron amurense Rupr除去栓皮的树皮；大青叶为十字花科植物松蓝Lsatis indigotica Fort的干燥叶；连翘为木犀科植物连翘Forsythia Suspensa (Thunb)Vahl的干燥果实；鱼腥草为三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb的干燥全草；栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实；半边莲为桔梗科植物半边莲Lobelia chinensis Lour的干燥全草；鸦胆子为苦木科植物鸦胆子Brucea javaniea(L) Merr的干燥成熟果实；半枝莲为唇形科植物半枝莲Scutellaria barbata D.Don的干燥全草；玉竹为百合科植物玉竹Polygonatum oddratum (Mill) Drnce的干燥根茎。
, 百拇医药
1.2 试剂：鲁米诺(Luminol)为德国Merck-schuchrat公司产品；溴代十六烷基三甲胺(CTMAB)、双氧水、碳酸钠和碳酸氢钠等均为国产分析纯试剂；所用水均为双蒸水。
1.3 仪器：DG3030发光光度计(南京华东电子管厂生产)。
2 方法
2.1 供试液的制备：分别称取各受检中药材5 g，用150 mL蒸馏水冷浸1 h后，煮沸15 min，过滤，药渣第2次、第3次分别加水100 mL第4次加水50 mL，各煮沸15 min，合并4次滤液，水浴浓缩至20 mL，装瓶备用(样品液1 mL相当于药材0.25 g)，临用时取原液1份，加双蒸水4份稀释成(1 mL溶液相当于原药材0.05 g)供试液。
2.2 固体物质含量的测定：准确量取中药水提液各1.00 mL，置于经洗净，干燥至恒重的称量瓶中，于105℃烘箱中烘烤3 h，冷后称重，平行做2次，取平均值，以总固体含量mg/mL提取液表示。
, 百拇医药
2.3 测定方法：参照文献〔2〕的方法略加改进，以提高发光体系的发光强度和稳定性。在测定管中依次加入10 mmol/L H2O2(临用时新配)100 μL、0.2 mol/L pH 10.77碳酸盐缓冲液500 μL，加入不同体积的供试液(同时用双蒸水作空白对照)，混匀后置于仪器测定室中于30℃加入5 mmol/L鲁米诺和10 mmol/L CTMAB的等量混合液500 μL，启动反应，延时15 s后，测定10 s内发光强度的平均值。每种样品平行测定3次，取平均值。以下式计算相对清除率，用发光清除率的大小来表示中药清除H2O2作用的大小。
3 结果
3.1 表面活性剂对鲁米诺-H2O2发光体系的影响：按实验方法加入混合液500 μL(鲁米诺5 mL与表面活性剂5 mL混合)，同时以鲁米诺与双蒸水等量混合液作为空白对照，结果见表1。结果表明，非离子型表面活性剂和阴离子型表面活性剂对H2O2-鲁米诺发光体系基本无增强发光作用。而阳离子型表面活性剂CTMAB能增强该体系的发光强度。
, 百拇医药
表1 不同表面活性剂对鲁米诺-H2O2发光体系的影响(n=6) 表面活性剂
浓 度
发光值(
±s)吐温-20
1%
477.0±41.0
吐温-40
1%
467.8±58.1
吐温-80
, 百拇医药
1%
577.8±15.5
聚乙烯醇
1%
503.0±62.3
CTMAB
10 mmol/L
2464.0±62.3
十二烷基硫酸钠
10 mmol/L
489.0±90.5
曲拉通-100
, 百拇医药
10 mmol/L
482.2±68.1
十二烷基磺酸钠
10 mmol/L
444.5±55.8
空白对照
—
475.1±85.8
3.2 鲁米诺与CTMAB不同浓度混合液对发光体系的影响：按实验方法加入鲁米诺与CTMAB不同浓度混合液500 μL。表2结果所示：鲁米诺与CTMAB按1∶1混合比其它比例混合时的发光强度大，并且稳定性增加。这表明CTMAB表面活性剂对H2O2-鲁米诺发光体系具有增敏增稳作用。表2 鲁米诺与CTMAB不同浓度混合液对发光体系的影响(n＝6) 编号
, 百拇医药
用 量(mL)
发光强度
(
±s)鲁米诺
(5 mmol/L)
CTMAB
(10 mmol/L)
双蒸水
1
5
1
4
, 百拇医药
911.67±236.84
2
5
2
3
1 391.00±116.15
3
5
3
2
1 956.80±124.05
4
5
, 百拇医药
4
1
2 186.00±92.39
5
5
5
0
2 464.00±62.33
6
4
5
1
2 029.60±283.28
, 百拇医药
7
3
5
2
1 748.40±309.37
8
2
5
3
1 440.17±157.94
9
1
5
, 百拇医药
4
1 193.00±179.83
10
5
0
5
477.83±20.49
3.3 清热中药抗活性氧作用：在弱碱条件下，H2O2氧化鲁米诺而发光，发光体系在CTMAB的存在下，可使发光体系增敏和增稳。在这发光体系中加入待测液，若待测液能清除H2O2，则体系发光强度下降，故可用发光抑制率的大小来表示待测液清除H2O2的程度。我们用公认的抗氧剂——Vit C作阳性对照物。17种清热中药水提液对H2O2的消除作用见表3。表3 17种清热中药水提液对H2O2的清除率(%) 药 名
, 百拇医药
颜 色
提取液总固体含量
(mg/mL)
0.05 g/mL中药水提液用量(μL)
CI50
AOV
10
5
2
原液
(μL)
固体
, 百拇医药 (μL)
金银花
棕褐
123.0
98.52
89.27
40.04
2.31
284.13
3.207
半枝莲
黑褐
42.2
, 百拇医药
64.46
71.84
38.92
2.82
119.00
1.151
黄 柏
棕褐
34.3
52.68
41.09
19.58
8.37
, http://www.100md.com
287.09
14.40
栀 子
棕褐
69.8
52.86
70.82
25.39
4.72
329.46
8.966
山豆根
棕褐
, 百拇医药
6.6
37.22
9.91
10.27
32.54
214.76
43.79
连 翘
棕黑
31.6
13.30
60.55
50.88
, 百拇医药
3.14
99.22
0.9968
射 干
棕褐
43.8
36.18
24.91
10.39
23.79
1042.0
157.87
半边莲
, 百拇医药
棕黑
87.7
64.29
18.13
2.59
8.31
728.79
37.81
黄 连
棕黑
32.7
66.27
41.69
, 百拇医药
28.58
5.64
184.43
5.811
知 母
黄棕
117.6
70.82
70.35
32.28
3.39
398.66
7.662
, 百拇医药
白头翁
棕黑
28.9
96.42
92.67
63.04
0.94
27.17
-0.836
黄 芩
棕褐
76.6
81.38
, 百拇医药
78.57
33.88
2.88
220.61
3.072
鸦胆子
黄褐
21.3
88.43
68.59
26.64
3.48
74.12
, http://www.100md.com
0.6533
鱼腥草
棕褐
53.1
75.04
62.42
46.13
2.49
132.22
1.11
大青叶
棕褐
95.5
, http://www.100md.com
83.86
69.95
45.86
2.31
229.85
2.403
天花粉
橙黄
38.7
27.24
8.83
4.06
64.44
, http://www.100md.com
2493.8
1028.97
玉 竹
橙黄
168.9
42.61
24.95
20.27
21.74
3671.9
510.63
Vit C
10.0
, 百拇医药
97.83
66.76
11.63
3.95
39.50
0.00
结果表明：17种清热中药水提取物对H2O2都有一定的清除作用，并且大多数呈线性量效关系，揭示它们都有直接清除H2O2的作用，但清除能力不同。如果单从量效关系曲线回归方程所推出的原液CI50(当清除率为50%时所需提取液用量的体积量)或固体CI50(当清除率为50%时所需水提取物中固体量)来比较抗氧化程度的大小，往往有些情况不好比较，为了便于统一比较，我们以生物体内公认的抗氧化剂Vit C做为抗氧化能力的比较标准，按下式计算中药对H2O2的抗氧化值(AOV)。
, http://www.100md.com
SL测＝原液CI50×固体CI50
SL标＝Vit C原液CI50×Vit C固体CI50
规定Vit C的AOV为零，当AOV为负值时，该中药抗双氧水的能力就比Vit C强，反之亦然。正值越大，与Vit C相比，抗双氧水的能力就越弱。从表3中AOV值来看，白头翁的抗H2O2氧化能力比维生素强；AOV值<3的有连翘、鸦胆子、鱼腥草、半枝莲、大青叶，这5种中药水提液具有强的抗双氧水的能力；3
4 讨论
4.1 H2O2-鲁米诺反应启动后发光强度在几秒内出现最高值，随后逐渐下降，发光强度和H2O2含量成正比〔2〕。在H2O2-鲁米诺体系中加入表面活性剂，结果表明非离子型和阴离子型的表面活性剂对H2O2-鲁米诺发光体系没有增敏增稳作用，而阳离子型表面活性剂CTMAB可以使该体系发光强度增大。这种增敏作用是由于鲁米诺与双氧水在碱性条件下的化学发光是一种亲核加成反应过程，CTMAB胶束的生成可加快反应速度，从而引发化学发光反应输出信号的增加〔3〕。此外，CTMAB胶束的形成有利于反应物激发态寿命的延长，并且在胶束的stern区较小极性的环境中也有利于长时间辐射〔4〕，这两方面作用的结果可增大发光体系的稳定性。因此用H2O2-鲁米诺-CTMAB化学发光体系来研究天然产物抗活性氧的作用，具有稳定性高、试剂用量少、发光强度大的优点。
, 百拇医药
4.2 从研究结果来看，大多数中药水提取液的量效关系呈线型关系，但也有例外，如半边莲、栀子、连翘，当药液用量为10 μL时的清除率反而比5 μL时的小，这可能是因为水提液中含有某些金属微量元素，当金属浓度到达一定程度时，对发光有增大的影响。
4.3 中药抗氧化能力的大小与植物所含化学成分性质有关，与有效成分的溶解性有关。在比较天然产物水溶性物质的抗氧化能力时，以Vit C这种世界公认的体内优良抗氧化剂作为比较标准是合理并可被人们所接受的。AOV能较全面反映水溶性物质抗氧化能力大小。笔者认为AOV值<5的中药具有比较强的抗氧化能力，而AOV值>10的中药其抗氧化能力就比较弱。从提取液的颜色来看，一般颜色较深者，其对H2O2的清除率较高，这也提示这些清热中药水提液对H2O2的清除率与其所含的有效成分即溶出浓度有关，可能也与植物色素有关。
我们的研究证明了清热中药在体外对H2O2具有直接清除作用，而在体内是否也有或仅间接发挥作用，尚待进一步研究。
, 百拇医药
*Address:LongShengjing,Guangxi University of Medical Sciences ,Nanning
作者简介：龙盛京 男,副教授.广西师范大学化学系毕业,现任广西医科大学基础部副主任,广西高校化学学会常务理事.从事教学工作及医学自由基研究工作,目前研究方向:用化学发光方法研究天然产物抗活性氧的作用.曾参与承担并完成两项国家自然科学基金项目;现主持两项省教育厅科研项目.发表科研论文30余篇.
△国家自然科学基金资助项目No39060028
参考文献
[1] 陈 缓，等.自由基医学.北京：人民军医出版社，1991：223
[2] 龙盛京，等.广西医学院学报，1992，9(3)：1
[3] CA，94:21898o;105:6904 l
[4] Paleos CM. J Photochem,1982，18(4):327
(1998-01-28 收稿), http://www.100md.com