大鼠心肌组织与肝脏组织中细胞色素P-450的含量测定
作者：耿益民 王雯 芦玲巧 杨啸林 张立克
单位：首都医科大学病理生理学教研室
关键词：
首都医科大学学报990123 对大鼠心肌组织中细胞色素P-450含量的测定国内未见报道。本方法利用双光束紫外分光光度计测定了正常大鼠的心肌组织中P-450的含量，并与肝组织P-450的含量进行比较，以期探讨细胞色素P-450与心脏疾病的关系。
Wistar大鼠8只，雄性，体质量200～250 g。动物禁食过夜，断头放血。取心脏及肝脏，以TMS缓冲液冲洗组织，称质量，用TMS缓冲液制成质量含量20%的匀浆。制备线粒体后上清液。用低温高速离心机(10 000～12 500 g)离心15 min，倒出保留上清部分。用CaCl2沉淀法制备微粒体，取适量线粒体后上清液加CaCl2，终浓度为8 mmol/L，高速离心后得含细胞色素P-450的微粒体悬液。组织蛋白含量用Lowry法，按Johannesen法测定[1]，取蛋白含量已知的组织样品置于2个比色杯中，置双光束紫外分光光度计中。扫描测定400～500 nm的差示光谱。根据其摩尔消光系数Δε(450～490 nm)91 cm-1mmol-1。 计算细胞色素P-450的含量。结果以均值±标准差(
±s)表示；统计学处理采用t检验(n=8)。
, 百拇医药
结果:2样品从400 nm扫描至500 nm时，均可在450 nm处见一明显吸收峰，提示此峰为细胞色素P-450(图1)。肝脏组织中细胞色素P-450质量摩尔浓度[(0.373±0.047) μmol/g]明显高于心肌组织[(0.138±0.042) μmol/g，P<0.001]。
图1 心肌组织和肝脏组织中P-450含量测定
细胞色素P-450是一种血红蛋白，在生物体内有重要功能，对许多内源性物质和外源性物质都有代谢作用。细胞色素P-450在体内分布很广，但不同组织的细胞色素P-450的含量和活性有很大差异。除肝脏外，肾、肺、脑组织中含量较高[1]。本研究利用CO差光谱分析法，测定了大鼠心肌组织中及肝脏组织中的细胞色素P-450含量，发现两者相似。心肌组织样品在λ450nm处获得一吸收峰，提示此峰为心肌组织中的细胞色素P-450。文献报道scup鱼心肌中细胞色素P-450的含量明显低于肝脏[2]。本实验中大鼠心肌组织中细胞色素P-450的含量也显著低于肝脏。这可能与哺乳动物心肌微粒体中缺乏活化的NADPH-P450还原酶有关[3]。心脏疾病时心肌细胞色素P-450的含量及其单氧化酶活性有何变化有待进一步研究。
北京市自然科学基金资助项目
, 百拇医药
参考文献
1 Johannesen K A M. Measurement of cytochrome P-450 in the presence of large amounts of contaminating hemoglobin and methemoglobin. Analy Biochem, 1978,86:725～732
2 Brittbo E B. Metabosm-dependent blinding of the heterocrclic amine Trip-P. 1 in endothelial cells of choroid plexus and in large cerebral veins of cytochrome P450-induced mice. Brain Res,1994,659(1-2):91～98
3 John J.Cytochrome P4501A1 induction and localization in endothelium of vertebrate(teleost) heart.Mol Pharmacol,1989,36:723～729
收稿日期：1998-09-21, 百拇医药
单位：首都医科大学病理生理学教研室
关键词：
首都医科大学学报990123 对大鼠心肌组织中细胞色素P-450含量的测定国内未见报道。本方法利用双光束紫外分光光度计测定了正常大鼠的心肌组织中P-450的含量，并与肝组织P-450的含量进行比较，以期探讨细胞色素P-450与心脏疾病的关系。
Wistar大鼠8只，雄性，体质量200～250 g。动物禁食过夜，断头放血。取心脏及肝脏，以TMS缓冲液冲洗组织，称质量，用TMS缓冲液制成质量含量20%的匀浆。制备线粒体后上清液。用低温高速离心机(10 000～12 500 g)离心15 min，倒出保留上清部分。用CaCl2沉淀法制备微粒体，取适量线粒体后上清液加CaCl2，终浓度为8 mmol/L，高速离心后得含细胞色素P-450的微粒体悬液。组织蛋白含量用Lowry法，按Johannesen法测定[1]，取蛋白含量已知的组织样品置于2个比色杯中，置双光束紫外分光光度计中。扫描测定400～500 nm的差示光谱。根据其摩尔消光系数Δε(450～490 nm)91 cm-1mmol-1。 计算细胞色素P-450的含量。结果以均值±标准差(
±s)表示；统计学处理采用t检验(n=8)。, 百拇医药
结果:2样品从400 nm扫描至500 nm时，均可在450 nm处见一明显吸收峰，提示此峰为细胞色素P-450(图1)。肝脏组织中细胞色素P-450质量摩尔浓度[(0.373±0.047) μmol/g]明显高于心肌组织[(0.138±0.042) μmol/g，P<0.001]。
图1 心肌组织和肝脏组织中P-450含量测定
细胞色素P-450是一种血红蛋白，在生物体内有重要功能，对许多内源性物质和外源性物质都有代谢作用。细胞色素P-450在体内分布很广，但不同组织的细胞色素P-450的含量和活性有很大差异。除肝脏外，肾、肺、脑组织中含量较高[1]。本研究利用CO差光谱分析法，测定了大鼠心肌组织中及肝脏组织中的细胞色素P-450含量，发现两者相似。心肌组织样品在λ450nm处获得一吸收峰，提示此峰为心肌组织中的细胞色素P-450。文献报道scup鱼心肌中细胞色素P-450的含量明显低于肝脏[2]。本实验中大鼠心肌组织中细胞色素P-450的含量也显著低于肝脏。这可能与哺乳动物心肌微粒体中缺乏活化的NADPH-P450还原酶有关[3]。心脏疾病时心肌细胞色素P-450的含量及其单氧化酶活性有何变化有待进一步研究。
北京市自然科学基金资助项目, 百拇医药
参考文献
1 Johannesen K A M. Measurement of cytochrome P-450 in the presence of large amounts of contaminating hemoglobin and methemoglobin. Analy Biochem, 1978,86:725～732
2 Brittbo E B. Metabosm-dependent blinding of the heterocrclic amine Trip-P. 1 in endothelial cells of choroid plexus and in large cerebral veins of cytochrome P450-induced mice. Brain Res,1994,659(1-2):91～98
3 John J.Cytochrome P4501A1 induction and localization in endothelium of vertebrate(teleost) heart.Mol Pharmacol,1989,36:723～729
收稿日期：1998-09-21, 百拇医药