紫外系数倍率法测定雷尼替丁血药浓度
作者：夏曙辉 谈恒山 唐薇 葛卫红
单位：夏曙辉 谈恒山(南京军区南京总医院 南京210002)；唐薇(昆明医学院第一附属医院)；葛卫红(南京市鼓楼医院)
关键词：系数倍率法，雷尼替丁；血药浓度
中国医院药学杂志990309 摘要 目的:建立测定雷尼替丁血药浓度的方法。方法:采用系数倍率法。结果:能不经分离直接消除血浆的背景干扰。平均回收率为99.08%，在0.1～10 μg.ml-1浓度范围内线性良好(r=0.999 9)。结论:方法简便、快速、经济、重复性好。适用于临床、特别是基层医疗单位的血药浓度检测和药动学研究。
Study on the determination of ranitidine in plasma by K-ratio spectrophotometry method
, http://www.100md.com
Xia Shuhui,Tan Hengshan,Tang Wei and Ge Weihong (General Hospital of Nanjing Command,PLA Nanjing 210002)
ABSTRACT OBJECTIVE:A K-ratio spectrophotometry method was developed for the determination of Ranitidine in plasma.METHODS:The results showed that this method could eliminate the interference of plasma itself.RESULTS:The average recovery was 99.08%.The linear range was 0.1～10 μg.ml-1 r=0.999 9,and detection limit was 0.1 μg.ml-1.CONCLUSIONS:The method is simple,rapid and accurate.
, 百拇医药
KEY WORDS K-ratio spectrophotometry method,ranitidine,plasma drug concentration
雷尼替丁为H2-受体阻断剂，能抑制胃酸分泌，在防治胃及十二指肠溃疡方面具有独特的疗效。随着药理研究的深入和临床新用途的开发，其应用范围不断扩大，但不良反应的报道亦渐增多[1.2]，因此有必要建立雷尼替丁血药浓度的检测方法，为研究其体内过程及指导临床合理用药提供重要依据。目前国外研究比较深入，国内报道文献较少，多为HPLC法[3～5]。本文探讨用紫外系数倍率法测定雷尼替丁的血药浓度，取得了较为满意的结果。
1 仪器与试药
UV-260型紫外分光光度计(日本岛津)；7541型紫外分光光度计(上海分析仪器厂)；盐酸雷尼替丁对照品(杭州民生药厂，纯度为99.51%，批号950507)；所用试剂均为分析纯。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 标准溶液的配制 精密称取盐酸雷尼替丁对照品10 mg,置10 ml量瓶中，用甲醇溶解稀释至刻度，即为1mg.ml-1标准储备液。
2.2 血样的预处理 取空白人血浆1 ml于10 ml具塞离心管中，加5 mol.L-1氢氧化钠0.1 ml，混匀后加二氯甲烷7 ml，摇匀，离心15 min(3 000 r.min-1)，取下层有机相6 ml于另一试管中，40 ℃以下氮气流下吹干，用2.5 ml甲醇溶解即为血样提取液。置分光光度计中测定其吸收度。
2.3 紫外吸收光谱的测定 分别将盐酸雷尼替丁甲醇液、盐酸雷尼替丁血样提取液及空白血浆提取液置分光光度计中，在200～400 nm范围内，以甲醇为对照液进行光谱扫描。结果见图1。
, 百拇医药
图 1 雷尼替丁紫外吸收光谱图
Ⅰ雷尼替丁血样提取液 Ⅱ空白血浆提取液 Ⅲ雷尼替丁甲醇液
2.4 最佳测定波长对选择及K值的确定 由图1可见，雷尼替丁血药浓度的最大吸收波长为324 nm，而空白血浆在此处也有吸收，对测定有影响，故采用系数倍率法以消除干扰。根据波长对选择原则，为获取较大的定量信息ΔA和合适的k值，选定测定波长对为λ1=324 nm，λ2=358 nm。另取10名正常人血浆各1 ml，按血样预处理项下操作，提取液在324 nm和358 nm波长处分别测定吸收度，以k=A324/A358计算，得k值平均数为1.636，RSD=1.97%。
ΔA=A324-1.636 A358
, http://www.100md.com 2.5 工作曲线的绘制 取空白血浆1 ml，分别加入不同量的盐酸雷尼替丁标准溶液，使血浆终浓度为0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0 μg.ml-1，按血样预处理项下操作，以甲醇为空白对照液，在324，358 nm波长处测定吸收值，由ΔA对浓度C(μg.ml-1)作回归计算，得ΔA=0.014 6 C-0.2×10-4；r=0.9999。血药浓度在0.1～10 μg.ml-1范围内线性良好，最低检测浓度为0.1 μg.ml-1。
2.6 回收率和精密度试验 在空白血浆中加入一定量的标准液，使成高、中、低三种浓度，依法操作，将测得的吸收值代入上述回归方程求出各自浓度，以实测值比理论值计算回收率。并分别于同日内及不同日间试验精密度，操作方法同前，结果见表1。
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表 1 回收率和精密度试验(n=5) 浓度
μg.ml-1
回收率
%
日内差
日间差
RSD/%
RSD/%
0.5
98.28
0.497
7.1
, 百拇医药
0.491
4.5
1.0
99.36
0.955
3.7
0.994
5.6
5.0
99.60
4.994
0.7
4.980
, 百拇医药
0.9
2.7 稳定性试验 测定血样提取液室温中不同放置时间内吸收度的变化情况，结果表明稳定性良好，8 h内测定值基本不变。
2.8 干扰试验 考虑临床有合并用药的可能，故对10多种常用药物进行干扰试验，结果表明西咪替丁、丙谷胺、盐酸地尔硫、维拉帕米、对乙酰氨基酚、非拉西丁、多虑平、布洛芬、氨茶碱、头孢拉定等药物对测定无干扰。
2.9 对比试验 为考查本法的可信性，本文参照文献方法[6]进行紫外系数倍率法(UV)与HPLC法的对比试验，结果见表2。表 2 UV法与HPLC法的测定结果比较(±s，n=5) 投入浓度
μg.ml-1
测得浓度/μg.ml-1
, 百拇医药
UV法
HPLC法
0.1
0.12±0.06
0.13±0.04
0.5
0.49±0.03
0.51±0.04
1.0
1.01±0.07
0.96±0.04
2.0
, 百拇医药
1.95±0.09
2.07±0.03
5.0
5.00±0.13
5.03±0.03
将两组数据进行相关性比较，r=0.996，UV=0.00816+0.9786 HPLC。结果表明两组数据线性良好，测定值基本相同。
2.10 血药浓度测定 取健康家兔禁食12 h后口服盐酸雷尼替丁胶囊1粒(150 mg)，分别于0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，4.5，5，6，8，10 h抽取耳静脉血2 ml，分离血浆，精取1 ml，依法操作，测定样品吸收度，代入回归方程得出血药浓度，绘制C-T曲线，见图2。从图上可见口服雷尼替丁血药浓度有明显的双峰现象，与文献报道相符。利用本方法进行药物动力学研究将另文报道。
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图 2 雷尼替丁血药浓度-时间曲线
3 讨论
目前血药浓度的测定普遍采用HPLC法。该法精确、灵敏、专属性强，但仪器价格昂贵、样品测定成本高。UV法虽然测定精密度、灵敏度、专属性方面不及HPLC法，但由于仪器较便宜、试剂价格低廉，若操作细致仍能达到测定要求，因而在基层医院得到广泛应用。本文建立了用UV系数倍率法测定雷尼替丁血药浓度的方法，直接消除吸收干扰，省去了测定时需用空白血浆作对照的繁琐，方法简便、快速、经济，对比试验表明，其测定准确度同HPLC法。该法若推广用于测定其它药物，可能为临床、特别是基层医疗单位进行血药浓度检测和药动学研究提供一种简便、快速的检测手段。
参考文献
1 王国村.雷尼替丁的临床进展.中国医药情报，1995，1(5)：301
, 百拇医药
2 曹国建，邬红萍，傅世源.雷尼替丁的不良反应.中国药事，1994，8(3)：181
3 赵 晶，朱无难，刘厚钰.正常人中雷尼替丁药代动力学的研究.中国临床药理学杂志，1986，2(2)：97
4 Shim C,Hong J.Inter and intrasubject variations of Ranitidine pharmacokinetics after oral administration to male subjects.J Pharm Sci,1989,78(2):990
5 Miller RJ.Pharmacokinetics and bioavailability of Ranitidine in humans.J Pharm Sci,1984,73(10):1 376
6 王平全.盐酸雷尼替丁口服液的生物利用度研究.中国药学杂志，1995，30(8)：477
(1998年3月24日收稿), 百拇医药
单位：夏曙辉 谈恒山(南京军区南京总医院 南京210002)；唐薇(昆明医学院第一附属医院)；葛卫红(南京市鼓楼医院)
关键词：系数倍率法，雷尼替丁；血药浓度
中国医院药学杂志990309 摘要 目的:建立测定雷尼替丁血药浓度的方法。方法:采用系数倍率法。结果:能不经分离直接消除血浆的背景干扰。平均回收率为99.08%，在0.1～10 μg.ml-1浓度范围内线性良好(r=0.999 9)。结论:方法简便、快速、经济、重复性好。适用于临床、特别是基层医疗单位的血药浓度检测和药动学研究。
Study on the determination of ranitidine in plasma by K-ratio spectrophotometry method
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Xia Shuhui,Tan Hengshan,Tang Wei and Ge Weihong (General Hospital of Nanjing Command,PLA Nanjing 210002)
ABSTRACT OBJECTIVE:A K-ratio spectrophotometry method was developed for the determination of Ranitidine in plasma.METHODS:The results showed that this method could eliminate the interference of plasma itself.RESULTS:The average recovery was 99.08%.The linear range was 0.1～10 μg.ml-1 r=0.999 9,and detection limit was 0.1 μg.ml-1.CONCLUSIONS:The method is simple,rapid and accurate.
, 百拇医药
KEY WORDS K-ratio spectrophotometry method,ranitidine,plasma drug concentration
雷尼替丁为H2-受体阻断剂，能抑制胃酸分泌，在防治胃及十二指肠溃疡方面具有独特的疗效。随着药理研究的深入和临床新用途的开发，其应用范围不断扩大，但不良反应的报道亦渐增多[1.2]，因此有必要建立雷尼替丁血药浓度的检测方法，为研究其体内过程及指导临床合理用药提供重要依据。目前国外研究比较深入，国内报道文献较少，多为HPLC法[3～5]。本文探讨用紫外系数倍率法测定雷尼替丁的血药浓度，取得了较为满意的结果。
1 仪器与试药
UV-260型紫外分光光度计(日本岛津)；7541型紫外分光光度计(上海分析仪器厂)；盐酸雷尼替丁对照品(杭州民生药厂，纯度为99.51%，批号950507)；所用试剂均为分析纯。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 标准溶液的配制 精密称取盐酸雷尼替丁对照品10 mg,置10 ml量瓶中，用甲醇溶解稀释至刻度，即为1mg.ml-1标准储备液。
2.2 血样的预处理 取空白人血浆1 ml于10 ml具塞离心管中，加5 mol.L-1氢氧化钠0.1 ml，混匀后加二氯甲烷7 ml，摇匀，离心15 min(3 000 r.min-1)，取下层有机相6 ml于另一试管中，40 ℃以下氮气流下吹干，用2.5 ml甲醇溶解即为血样提取液。置分光光度计中测定其吸收度。
2.3 紫外吸收光谱的测定 分别将盐酸雷尼替丁甲醇液、盐酸雷尼替丁血样提取液及空白血浆提取液置分光光度计中，在200～400 nm范围内，以甲醇为对照液进行光谱扫描。结果见图1。
, 百拇医药
图 1 雷尼替丁紫外吸收光谱图
Ⅰ雷尼替丁血样提取液 Ⅱ空白血浆提取液 Ⅲ雷尼替丁甲醇液
2.4 最佳测定波长对选择及K值的确定 由图1可见，雷尼替丁血药浓度的最大吸收波长为324 nm，而空白血浆在此处也有吸收，对测定有影响，故采用系数倍率法以消除干扰。根据波长对选择原则，为获取较大的定量信息ΔA和合适的k值，选定测定波长对为λ1=324 nm，λ2=358 nm。另取10名正常人血浆各1 ml，按血样预处理项下操作，提取液在324 nm和358 nm波长处分别测定吸收度，以k=A324/A358计算，得k值平均数为1.636，RSD=1.97%。
ΔA=A324-1.636 A358
, http://www.100md.com 2.5 工作曲线的绘制 取空白血浆1 ml，分别加入不同量的盐酸雷尼替丁标准溶液，使血浆终浓度为0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0 μg.ml-1，按血样预处理项下操作，以甲醇为空白对照液，在324，358 nm波长处测定吸收值，由ΔA对浓度C(μg.ml-1)作回归计算，得ΔA=0.014 6 C-0.2×10-4；r=0.9999。血药浓度在0.1～10 μg.ml-1范围内线性良好，最低检测浓度为0.1 μg.ml-1。
2.6 回收率和精密度试验 在空白血浆中加入一定量的标准液，使成高、中、低三种浓度，依法操作，将测得的吸收值代入上述回归方程求出各自浓度，以实测值比理论值计算回收率。并分别于同日内及不同日间试验精密度，操作方法同前，结果见表1。
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表 1 回收率和精密度试验(n=5) 浓度
μg.ml-1
回收率
%
日内差
日间差
RSD/%
RSD/%
0.5
98.28
0.497
7.1
, 百拇医药
0.491
4.5
1.0
99.36
0.955
3.7
0.994
5.6
5.0
99.60
4.994
0.7
4.980
, 百拇医药
0.9
2.7 稳定性试验 测定血样提取液室温中不同放置时间内吸收度的变化情况，结果表明稳定性良好，8 h内测定值基本不变。
2.8 干扰试验 考虑临床有合并用药的可能，故对10多种常用药物进行干扰试验，结果表明西咪替丁、丙谷胺、盐酸地尔硫、维拉帕米、对乙酰氨基酚、非拉西丁、多虑平、布洛芬、氨茶碱、头孢拉定等药物对测定无干扰。
2.9 对比试验 为考查本法的可信性，本文参照文献方法[6]进行紫外系数倍率法(UV)与HPLC法的对比试验，结果见表2。表 2 UV法与HPLC法的测定结果比较(±s，n=5) 投入浓度
μg.ml-1
测得浓度/μg.ml-1
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UV法
HPLC法
0.1
0.12±0.06
0.13±0.04
0.5
0.49±0.03
0.51±0.04
1.0
1.01±0.07
0.96±0.04
2.0
, 百拇医药
1.95±0.09
2.07±0.03
5.0
5.00±0.13
5.03±0.03
将两组数据进行相关性比较，r=0.996，UV=0.00816+0.9786 HPLC。结果表明两组数据线性良好，测定值基本相同。
2.10 血药浓度测定 取健康家兔禁食12 h后口服盐酸雷尼替丁胶囊1粒(150 mg)，分别于0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，4.5，5，6，8，10 h抽取耳静脉血2 ml，分离血浆，精取1 ml，依法操作，测定样品吸收度，代入回归方程得出血药浓度，绘制C-T曲线，见图2。从图上可见口服雷尼替丁血药浓度有明显的双峰现象，与文献报道相符。利用本方法进行药物动力学研究将另文报道。
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图 2 雷尼替丁血药浓度-时间曲线
3 讨论
目前血药浓度的测定普遍采用HPLC法。该法精确、灵敏、专属性强，但仪器价格昂贵、样品测定成本高。UV法虽然测定精密度、灵敏度、专属性方面不及HPLC法，但由于仪器较便宜、试剂价格低廉，若操作细致仍能达到测定要求，因而在基层医院得到广泛应用。本文建立了用UV系数倍率法测定雷尼替丁血药浓度的方法，直接消除吸收干扰，省去了测定时需用空白血浆作对照的繁琐，方法简便、快速、经济，对比试验表明，其测定准确度同HPLC法。该法若推广用于测定其它药物，可能为临床、特别是基层医疗单位进行血药浓度检测和药动学研究提供一种简便、快速的检测手段。
参考文献
1 王国村.雷尼替丁的临床进展.中国医药情报，1995，1(5)：301
, 百拇医药
2 曹国建，邬红萍，傅世源.雷尼替丁的不良反应.中国药事，1994，8(3)：181
3 赵 晶，朱无难，刘厚钰.正常人中雷尼替丁药代动力学的研究.中国临床药理学杂志，1986，2(2)：97
4 Shim C,Hong J.Inter and intrasubject variations of Ranitidine pharmacokinetics after oral administration to male subjects.J Pharm Sci,1989,78(2):990
5 Miller RJ.Pharmacokinetics and bioavailability of Ranitidine in humans.J Pharm Sci,1984,73(10):1 376
6 王平全.盐酸雷尼替丁口服液的生物利用度研究.中国药学杂志，1995，30(8)：477
(1998年3月24日收稿), 百拇医药