复发性口疮与细胞介导性免疫疾病的对照研究
作者：漆明 窦伟 刘菊年张敬 李晓凤张岩玲
单位：刘菊年 宁夏医学院神经内科实验室；李晓凤张岩玲 宁夏区人民医院口腔科 750021；漆 明 窦 伟 张 敬 (宁夏医学院附属医院口腔科 银川 750004)
关键词：口疮；胃癌；红斑狼疮；免疫学
摘要 采用单克隆抗体 摘要 采用单克隆抗体、间接致敏红细胞花环试验法对复发性口疮(Recurrent aphthous ulcer,RAU)、胃癌及系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus, SLE)患者外周血WuT3、WuT4、WuT8及T4/T8比值进行检测。结果：胃癌患者WuT3、WuT4低于对照组(P<0.05)，WuT8高于对照组，T4/T8比值明显低于对照组(P<0.001)。SLE组患者WuT8较对照组低下，T4/T8比值增高(P<0.05)。RAU组患者WuT3低于对照组，WuT8高于对照组，T4/T8比值下降(P<0.05)。认为：①胃癌的发生是机体总的细胞免疫处于低下无能状态，不能对肿瘤进行正常的免疫监视及免疫应答。②SLE的发病与WuT8功能降低有关，其导致自身反应细胞发生脱抑制而功能亢进。③RAU的发生是因WuT8细胞功能增强，致使Tc细胞的作用增强，其直接攻击粘膜靶细胞造成粘膜坏死、溃疡。
, 百拇医药
A CONTRASTING RESEARCH BETWEEN RECURRENT
APHTHOUS UCLER AND CELLMEDIATED IMMUNITY DISEASES
Qi Ming, Dou Wei ,Liu Junian et al
(Department of Stomatology and Oncology，Affiliated Hospital of Ningxia Medical College)
Abstract WuT3、WuT4、WuT8、T4/T8 were tested in cases among recurrent aphthous ucler(RAU) ,stomach carcinoma and systemic lupus erythematosus (SLE) using monoclonal antibody and indirect sensitized rad cell rosette formation test.The results showed that WuT3 and WuT4 were lower (P<0.05),WuT8 was higher, the ratio of T4/T8 was significantly lower (P<0.001) in stomach carcinoma than that in control group.WuT8 was lower,the ratio of T4/T8 was higher (P<0.05)in SLE cases than that of control group.WuT3 was lower, WuT8 was higher, T4/T8 was lower (P<0.05) in RAU cases than those in control group.The research suggests that (1) The function of cellmediated immunity is in inhibition and incompetent state in stomach carcinoma, it can't keep watch in and answer to the immunoreaction;(2)The pathogenesis of SLE relates to lower of WuT8, which causes self-reaction cell to escape control and gets hyperfunction of WuT8 leas to Tc cell of mucosa and causes mucosa local necrosis ,ulcer.
, 百拇医药
Key words aphthous ucler;stomach carcinoma;lupus erythematosus;immunology
免疫调节细胞主要有辅助性T细胞(TH细胞)及抑制性T细胞/细胞毒性T细胞(Ts/Tc细胞)。TH细胞与Ts/Tc细胞比值的动态平衡是决定机体免疫状态和免疫反应水平的中心环节，此比值的失衡可能导致免疫紊乱及一系列的免疫病理改变[1]。恶性肿瘤的发生、发展是肿瘤细胞逃脱机体免疫监视的结果[2]。系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus ,SLE)为自身免疫性疾病，出现了“病理性”自身免疫应答，以产生自身抗体为特征[2]。从免疫调节细胞及其功能而言，恶性肿瘤与SLE为免疫调节失衡(Immune regulatory dysfunction)的两个反方向的免疫异常。近年来许多学者认为复发性口疮(Recurrent aphthous ulcer ,RAU)与细胞介导的免疫反应有关[3]。本文以单克隆抗体、间接致敏红细胞花环试验法检测RAU，胃癌及SLE患者外周血中T淋巴细胞及亚群，旨在为研究RAU的细胞免疫状况及发病机理提供资料。
, 百拇医药
对象与方法
1 研究对象 正常对照组：30例健康体检者，男19例，女11例，年龄19～73岁，平均年龄(44±15)岁。均无全身系统性疾病及口腔疾病。胃癌组：30例，均经胃镜活检或手术切除标本病检证实。男28例，女2例，年龄32～72岁，平均年龄(55±10)岁。SLE组：30例，均符合SLE诊断标准。均为女性，年龄25～42岁。活动型19例，非活动型11例。RAU组：60例，均符合口腔内科学RAU诊断标准。男29例，女31例，年龄16～70岁，平均年龄(43±13)岁。病程2～20年。其中轻型口疮42例，重型口疮12例，白塞综合征6例。
2 材料 单克隆抗体及二抗致敏的红细胞花环试剂均为卫生部武汉生物制品研究所提供。
3 检测方法 ①取肝素抗凝血3～5ml，分离出外周血淋巴细胞，用D-Hank's液配成浓度为5×106个/ml的细胞悬液。将细胞悬液分别加入4管，每管25μl(WuT3、WuT4、WuT8及对照管)，再分别加入25μl WuT3、WuT4、WuT8抗体，空白对照管加D-Hank's液25μl，然后除去未结合的单体。②将用二抗致敏的红细胞花环试剂加入0.5ml蒸馏水溶解，取一定量致敏红细胞悬液，离心去上清，用D-Hanks液悬浮，恢复至量。③将已与一抗结合了的淋巴细胞，与用二抗致敏的红细胞悬液等量混合(各25μl)，离心过夜后轻轻悬浮后涂片、固定、HE染色，油镜下观察。淋巴细胞周围粘附有三个以上红细胞者为花环阳性细胞，计算出花环形成细胞百分率。其计算公式为：
, 百拇医药
4 统计学处理 各组均数之间差异性比较用t检验或t′检验。
结果
各组T细胞亚群检测结果见附表。由表可见，RAU组WuT3细胞百分率低于对照组，WuT8高于对照组，T4/T8比值下降(P<0.05)；胃癌组WuT3、WuT4低于对照组，WuT8高于对照组，T4/T8比值较对照组明显下降(P<0.01)；SLE组WuT8低于对照组，T4/T8比值增高(P<0.05)。RAU组与胃癌组、SLE组比较，WuT8低于胃癌组，高于SLE组，造成T4/T8比值的差异性(P<0.05)。
, 百拇医药
附表 RAU组、胃癌组、SLE组与正常对照组T细胞亚群检测结果(%) (±s)
组 别
例数
WuT3
(总T细胞)
WuT4
(Th/Ti)
WuT8
(Ts/Tc)
T4/T8
对照组
, 百拇医药
30
63.71±8.77
41.74±7.03
20.47±4.55
2.13±0.62
RAU组
60
59.32±6.55*
39.80±6.49
22.97±3.78*
1.78±0.42*
, 百拇医药
胃癌组
30
57.57±13.92*
35.87±11.84*
29.66±8.98**△
1.24±0.47**△
SLE组
30
61.90±10.11
39.6±8.51
16.8±6.62*△
, 百拇医药
2.31±0.49*△
注：与对照组比较*P<0.05,**P<0.001,与RAU组比较△P<0.05
讨论
1 胃癌患者的T细胞状态 有学者认为凡可导致细胞免疫缺陷的均为肿瘤高发条件，其中免疫抑制细胞活力过亢为主要因素[2]。本结果显示胃癌患者WuT3、WuT4低于对照组，WuT8明显高于对照组，使T4/T8比值明显下降。说明胃癌患者免疫功能表现为抑制、低下无能状态。证实了上述学者的观点。恶性肿瘤发生时，肿瘤细胞释放的一些抑制产物，及带瘤组织中的抑制性T细胞(Ts)的被激活，均可抑制机体对肿瘤细胞的免疫应答，造成机体细胞免疫功能低下。免疫功能的低下又促使肿瘤形成、扩展、转移成一恶性循环。
, 百拇医药
2 SLE患者的T细胞状态 SLE的主要免疫异常表现为多种高滴度自身抗体。早在70年代中期即已推测很可能是Ts细胞选择性缺陷[4]，现已确认为Ts细胞功能低下。本文检测结果与吴裕火 斤报道相同。WuT8明显降低致使T4/T8比值增高。说明SLE患者Ts细胞功能低下。其引起B淋巴细胞功能过亢，使机体产生自身抗体，对多种抗原的反应增强，形成的抗原抗体复合物造成了许多脏器的损害。
3 RAU患者的T细胞状态 RAU的特点为反复发作的口腔溃疡，主要病变为口腔粘膜上皮细胞的变性坏死。Savage认为RAU的发生与Tc/Ts细胞的毒性作用有关。而细胞毒性T细胞(Tc)在细胞介导的细胞溶解中起着重要作用。本结果显示WuT3较对照组降低，WuT8较对照组升高，T4/T8比值下降。说明RAU患者存在着淋巴细胞数量不足和细胞间比例的不平衡及功能缺陷；Tc/Ts细胞在RAU上皮细胞坏死，溃疡形成中起着细胞毒作用。与Savage报道一致，即当WuT3降低、WuT8升高时，激活了Tc细胞，对靶细胞发起“致死性攻击”，造成粘膜坏死、溃疡。
, http://www.100md.com
综上所述，RAU、胃癌、SLE患者均存在着T细胞免疫功能异常。胃癌的发生是由于机体总的细胞免疫处于低下无能状态，使机体不能对肿瘤进行正常的免疫监视及免疫应答。SLE的发病则是WuT8细胞功能降低，导致自身反应细胞发生脱抑制而功能亢进，造成自身免疫病的发生。RAU的发生与前两者有区别。是由于WuT3细胞功能低下，WuT8细胞功能增强，致使细胞毒性T细胞的作用增强。其反应的发生不需抗体或补体系统参与，可直接作用于靶细胞，因此在RAU发病中，所有的粘膜上皮细胞均可能成为Tc细胞的靶细胞。
参考文献
1 汪美先,刘彦仿，姜绍淳等.免疫学基础.西安：陕西科学技术出版社，1981∶47～51
2 陆德源，马宝骊，王易等.现代免疫学.上海：上海科学技术出版社，1995∶166～210
, 百拇医药
3 萧燕.复发性阿弗它口炎(RAS)细胞免疫学研究—细胞介导的免疫反应与RAS发病的关系.国外医学口腔分册.1991；18(2)∶80
4 Alarcon-Segovia D,Ruiz-ArgiiellesA.Decreased circulating thymus-derived cells with receptors for the Fc parton of immunoglobulin G in system lupus erythematosas.J Clin Invest,1978;62(6)∶1390
5 吴裕火 斤，余春 ，江石湖等.以OKT单克隆抗体研究胃癌及系统性红斑狼疮(SLE)患者的外周血T淋巴细胞亚群.上海免疫学杂志，1985；5(3)∶157
6 Savage N,Seymour GJ ,Kruger BJ et al.Tlymphocyte subset changes in recurrent aphthous stomatitis.Oral Surg, 1985;60(2)∶175
(1999-01-25收稿 1999-03-20修回), 百拇医药
单位：刘菊年 宁夏医学院神经内科实验室；李晓凤张岩玲 宁夏区人民医院口腔科 750021；漆 明 窦 伟 张 敬 (宁夏医学院附属医院口腔科 银川 750004)
关键词：口疮；胃癌；红斑狼疮；免疫学
摘要 采用单克隆抗体 摘要 采用单克隆抗体、间接致敏红细胞花环试验法对复发性口疮(Recurrent aphthous ulcer,RAU)、胃癌及系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus, SLE)患者外周血WuT3、WuT4、WuT8及T4/T8比值进行检测。结果：胃癌患者WuT3、WuT4低于对照组(P<0.05)，WuT8高于对照组，T4/T8比值明显低于对照组(P<0.001)。SLE组患者WuT8较对照组低下，T4/T8比值增高(P<0.05)。RAU组患者WuT3低于对照组，WuT8高于对照组，T4/T8比值下降(P<0.05)。认为：①胃癌的发生是机体总的细胞免疫处于低下无能状态，不能对肿瘤进行正常的免疫监视及免疫应答。②SLE的发病与WuT8功能降低有关，其导致自身反应细胞发生脱抑制而功能亢进。③RAU的发生是因WuT8细胞功能增强，致使Tc细胞的作用增强，其直接攻击粘膜靶细胞造成粘膜坏死、溃疡。
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A CONTRASTING RESEARCH BETWEEN RECURRENT
APHTHOUS UCLER AND CELLMEDIATED IMMUNITY DISEASES
Qi Ming, Dou Wei ,Liu Junian et al
(Department of Stomatology and Oncology，Affiliated Hospital of Ningxia Medical College)
Abstract WuT3、WuT4、WuT8、T4/T8 were tested in cases among recurrent aphthous ucler(RAU) ,stomach carcinoma and systemic lupus erythematosus (SLE) using monoclonal antibody and indirect sensitized rad cell rosette formation test.The results showed that WuT3 and WuT4 were lower (P<0.05),WuT8 was higher, the ratio of T4/T8 was significantly lower (P<0.001) in stomach carcinoma than that in control group.WuT8 was lower,the ratio of T4/T8 was higher (P<0.05)in SLE cases than that of control group.WuT3 was lower, WuT8 was higher, T4/T8 was lower (P<0.05) in RAU cases than those in control group.The research suggests that (1) The function of cellmediated immunity is in inhibition and incompetent state in stomach carcinoma, it can't keep watch in and answer to the immunoreaction;(2)The pathogenesis of SLE relates to lower of WuT8, which causes self-reaction cell to escape control and gets hyperfunction of WuT8 leas to Tc cell of mucosa and causes mucosa local necrosis ,ulcer.
, 百拇医药
Key words aphthous ucler;stomach carcinoma;lupus erythematosus;immunology
免疫调节细胞主要有辅助性T细胞(TH细胞)及抑制性T细胞/细胞毒性T细胞(Ts/Tc细胞)。TH细胞与Ts/Tc细胞比值的动态平衡是决定机体免疫状态和免疫反应水平的中心环节，此比值的失衡可能导致免疫紊乱及一系列的免疫病理改变[1]。恶性肿瘤的发生、发展是肿瘤细胞逃脱机体免疫监视的结果[2]。系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus ,SLE)为自身免疫性疾病，出现了“病理性”自身免疫应答，以产生自身抗体为特征[2]。从免疫调节细胞及其功能而言，恶性肿瘤与SLE为免疫调节失衡(Immune regulatory dysfunction)的两个反方向的免疫异常。近年来许多学者认为复发性口疮(Recurrent aphthous ulcer ,RAU)与细胞介导的免疫反应有关[3]。本文以单克隆抗体、间接致敏红细胞花环试验法检测RAU，胃癌及SLE患者外周血中T淋巴细胞及亚群，旨在为研究RAU的细胞免疫状况及发病机理提供资料。
, 百拇医药
对象与方法
1 研究对象 正常对照组：30例健康体检者，男19例，女11例，年龄19～73岁，平均年龄(44±15)岁。均无全身系统性疾病及口腔疾病。胃癌组：30例，均经胃镜活检或手术切除标本病检证实。男28例，女2例，年龄32～72岁，平均年龄(55±10)岁。SLE组：30例，均符合SLE诊断标准。均为女性，年龄25～42岁。活动型19例，非活动型11例。RAU组：60例，均符合口腔内科学RAU诊断标准。男29例，女31例，年龄16～70岁，平均年龄(43±13)岁。病程2～20年。其中轻型口疮42例，重型口疮12例，白塞综合征6例。
2 材料 单克隆抗体及二抗致敏的红细胞花环试剂均为卫生部武汉生物制品研究所提供。
3 检测方法 ①取肝素抗凝血3～5ml，分离出外周血淋巴细胞，用D-Hank's液配成浓度为5×106个/ml的细胞悬液。将细胞悬液分别加入4管，每管25μl(WuT3、WuT4、WuT8及对照管)，再分别加入25μl WuT3、WuT4、WuT8抗体，空白对照管加D-Hank's液25μl，然后除去未结合的单体。②将用二抗致敏的红细胞花环试剂加入0.5ml蒸馏水溶解，取一定量致敏红细胞悬液，离心去上清，用D-Hanks液悬浮，恢复至量。③将已与一抗结合了的淋巴细胞，与用二抗致敏的红细胞悬液等量混合(各25μl)，离心过夜后轻轻悬浮后涂片、固定、HE染色，油镜下观察。淋巴细胞周围粘附有三个以上红细胞者为花环阳性细胞，计算出花环形成细胞百分率。其计算公式为：
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4 统计学处理 各组均数之间差异性比较用t检验或t′检验。
结果
各组T细胞亚群检测结果见附表。由表可见，RAU组WuT3细胞百分率低于对照组，WuT8高于对照组，T4/T8比值下降(P<0.05)；胃癌组WuT3、WuT4低于对照组，WuT8高于对照组，T4/T8比值较对照组明显下降(P<0.01)；SLE组WuT8低于对照组，T4/T8比值增高(P<0.05)。RAU组与胃癌组、SLE组比较，WuT8低于胃癌组，高于SLE组，造成T4/T8比值的差异性(P<0.05)。
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附表 RAU组、胃癌组、SLE组与正常对照组T细胞亚群检测结果(%) (±s)
组 别
例数
WuT3
(总T细胞)
WuT4
(Th/Ti)
WuT8
(Ts/Tc)
T4/T8
对照组
, 百拇医药
30
63.71±8.77
41.74±7.03
20.47±4.55
2.13±0.62
RAU组
60
59.32±6.55*
39.80±6.49
22.97±3.78*
1.78±0.42*
, 百拇医药
胃癌组
30
57.57±13.92*
35.87±11.84*
29.66±8.98**△
1.24±0.47**△
SLE组
30
61.90±10.11
39.6±8.51
16.8±6.62*△
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2.31±0.49*△
注：与对照组比较*P<0.05,**P<0.001,与RAU组比较△P<0.05
讨论
1 胃癌患者的T细胞状态 有学者认为凡可导致细胞免疫缺陷的均为肿瘤高发条件，其中免疫抑制细胞活力过亢为主要因素[2]。本结果显示胃癌患者WuT3、WuT4低于对照组，WuT8明显高于对照组，使T4/T8比值明显下降。说明胃癌患者免疫功能表现为抑制、低下无能状态。证实了上述学者的观点。恶性肿瘤发生时，肿瘤细胞释放的一些抑制产物，及带瘤组织中的抑制性T细胞(Ts)的被激活，均可抑制机体对肿瘤细胞的免疫应答，造成机体细胞免疫功能低下。免疫功能的低下又促使肿瘤形成、扩展、转移成一恶性循环。
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2 SLE患者的T细胞状态 SLE的主要免疫异常表现为多种高滴度自身抗体。早在70年代中期即已推测很可能是Ts细胞选择性缺陷[4]，现已确认为Ts细胞功能低下。本文检测结果与吴裕火 斤报道相同。WuT8明显降低致使T4/T8比值增高。说明SLE患者Ts细胞功能低下。其引起B淋巴细胞功能过亢，使机体产生自身抗体，对多种抗原的反应增强，形成的抗原抗体复合物造成了许多脏器的损害。
3 RAU患者的T细胞状态 RAU的特点为反复发作的口腔溃疡，主要病变为口腔粘膜上皮细胞的变性坏死。Savage认为RAU的发生与Tc/Ts细胞的毒性作用有关。而细胞毒性T细胞(Tc)在细胞介导的细胞溶解中起着重要作用。本结果显示WuT3较对照组降低，WuT8较对照组升高，T4/T8比值下降。说明RAU患者存在着淋巴细胞数量不足和细胞间比例的不平衡及功能缺陷；Tc/Ts细胞在RAU上皮细胞坏死，溃疡形成中起着细胞毒作用。与Savage报道一致，即当WuT3降低、WuT8升高时，激活了Tc细胞，对靶细胞发起“致死性攻击”，造成粘膜坏死、溃疡。
, http://www.100md.com
综上所述，RAU、胃癌、SLE患者均存在着T细胞免疫功能异常。胃癌的发生是由于机体总的细胞免疫处于低下无能状态，使机体不能对肿瘤进行正常的免疫监视及免疫应答。SLE的发病则是WuT8细胞功能降低，导致自身反应细胞发生脱抑制而功能亢进，造成自身免疫病的发生。RAU的发生与前两者有区别。是由于WuT3细胞功能低下，WuT8细胞功能增强，致使细胞毒性T细胞的作用增强。其反应的发生不需抗体或补体系统参与，可直接作用于靶细胞，因此在RAU发病中，所有的粘膜上皮细胞均可能成为Tc细胞的靶细胞。
参考文献
1 汪美先,刘彦仿，姜绍淳等.免疫学基础.西安：陕西科学技术出版社，1981∶47～51
2 陆德源，马宝骊，王易等.现代免疫学.上海：上海科学技术出版社，1995∶166～210
, 百拇医药
3 萧燕.复发性阿弗它口炎(RAS)细胞免疫学研究—细胞介导的免疫反应与RAS发病的关系.国外医学口腔分册.1991；18(2)∶80
4 Alarcon-Segovia D,Ruiz-ArgiiellesA.Decreased circulating thymus-derived cells with receptors for the Fc parton of immunoglobulin G in system lupus erythematosas.J Clin Invest,1978;62(6)∶1390
5 吴裕火 斤，余春 ，江石湖等.以OKT单克隆抗体研究胃癌及系统性红斑狼疮(SLE)患者的外周血T淋巴细胞亚群.上海免疫学杂志，1985；5(3)∶157
6 Savage N,Seymour GJ ,Kruger BJ et al.Tlymphocyte subset changes in recurrent aphthous stomatitis.Oral Surg, 1985;60(2)∶175
(1999-01-25收稿 1999-03-20修回), 百拇医药