肾移植患者致敏淋巴细胞检测的临床研究
作者:徐秀红 贾保祥 刘力 张玉海
单位:首都医科大学附属北京友谊医院泌尿外科
关键词:移植;致敏淋巴细胞;急性排斥
首都医科大学学报990406 提要: 用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,检测了41例肾移植患者移植前后的致敏淋巴细胞,以探讨致敏淋巴细胞与移植受者的早期排斥的关系。结果表明,急性排斥组(14例)受者术前致敏淋巴细胞OD值平均为0.56±0.20,感染组(5例)OD值为0.56±0.23,肾功能稳定组(22例)OD值为0.32±0.05。肾移植术后以上各组OD值为0.46±0.19、0.46±0.70、0.38±0.08。急性排斥期应用胸腺嘧啶(ATG)治疗前后致敏淋巴细胞也有很大的变化。结果提示移植前检测和术后跟踪检测移植受者致敏淋巴细胞状态,有助于预测术后移植肾的早期排斥反应,对ATG治疗也有一定的指导意义。
, http://www.100md.com 中图分类号: R617; R692
Clinical Study on Detection of Sensitized Lymphocytes Following Renal Transplantation
Xu Xiuhong, Jia Baoxiang, Liu Li, Zhang Yuhai
Department of Urology, Beijing Friendship Hospital,Affiliate of Capital University of Medical Sciences
Abstract:The relationship between sensitized lymphocytes and early rejection of recipient was studied by detecting sensitized lymphocyte of 41 cases before and after renal transplantation. The results showed that 14 cases out of 41 recipients suffered from acute rejections. Before operation, the mean OD value of sensitized lymphocyte was 0.56±0.20 in rejections cases(14 cases), 0.56±0.23 in infection cases (5 cases), and 0.32±0.05 in stable renal function cases (22 cases); after operation, the values changed to 0.64±0.19, 0.46±0.07, and 0.38±0.08 respectively. In acute rejection phase, the above values altered dramatically before and after treatment of ATG. The result suggested that it was helpful to predict the early rejection following renal transplantation by detecting the status of recipients sensitized lymphocytes preoperatively and postoperatively. It was also guidable for the treatment of ATG.
, 百拇医药
Key words:transplantation; sensitized lymphocyte; acute rejection
在同种异体移植所致的排斥反应中,尤其是急性反应的早期,病变组织中常见以T淋巴细胞为主的细胞浸润,表明T细胞介导的细胞免疫在此反应中起主要作用。本研究通过在体外对受者T淋巴细胞致敏状态的检测,以期为排斥反应的预测、治疗效果的评价提供科学的依据和方法。
1 临床资料和方法
1.1 病例选择和分组
1997年12月至1998年6月在我院行异体肾移植的患者41例,其中男性30例,女性11例,平均年龄39岁,平均住院日56 d。术前均行血液透析,均无活动性的免疫性和感染性疾病。淋巴细胞毒试验均在1%~4%之间。选择14例健康志愿者为对照组。其中男8例,女6例,平均年龄32岁。
, 百拇医药
41例患者进行移植前后观察。根据临床和检验指标,肾移植术后分为3组:①稳定组:未发生急性排斥反应,无环孢素A肾中毒和感染,移植肾功能良好,共22例(53.7%);②排斥组:临床上发生急性排斥反应,共14例(34.1%);③感染组(肾功能良好):共5例(12.2%)。
1.2 免疫抑制剂的应用
术后前3 d常规应用: 甲基泼尼松龙1 000 mg/d,环磷酰胺200 mg/d,然后改用泼尼松+硫唑嘌呤+环孢素A三联免疫抑制剂治疗,若发生加速排斥反应、急性排斥反应,应用地塞米松冲击治疗或胸腺嘧啶(ATG)或OKT3治疗。
1.3 样本采集和检测
肾移植患者均于术前、术后3 d、术后10 d分别取外周无菌抗凝血,分离单个核细胞。
致敏淋巴细胞检测应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法[1]。取外周血10 mL,分离淋巴细胞,调整细胞浓度为1.5×109 L-1,加入96孔培养板中,每孔100 μL,加入MTT 10 μL,置37 ℃CO2培养箱内培养4 h,加入SDS 100 μL,1 h后振荡10 min,用酶标仪(德国)选择波长570 nm,参考波长630 nm测OD值。
, 百拇医药
1.4 统计学处理
用SYSTAT 3.0统计系统进行处理。实验数据用均数±标准差表示,并进行方差分析。
2 结果
2.1 各组患者与正常对照组OD值比较
41例患者肾移植前OD值为0.43±0.18,与正常对照组OD值(0.37±0.05)比较,有显著性差异(P<0.05)。肾移植组中稳定组移植前后与正常对照组比较OD值无显著性差异(P>0.05);排斥组与感染组移植前与正常组比较均有非常显著性差异(P<0.01);移植术后排斥组与正常对照组比较有非常显著性差异(P<0.01);感染组与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05,表1)。
表1 移植前后各组致敏淋巴细胞活性(OD值)比较 分组
, 百拇医药
n
移植前
移植后#
对照组
14
0.37±0.05
稳定组
22
0.32±0.05
0.38±0.08
排斥组
14
0.56±0.20**△△
, 百拇医药
0.64±0.19**△△
感染组
5
0.56±0.23**△△
0.46±0.07*▲▲
#为移植后3、10 d平均值;与对照组比较*P<0.05,**P<0.01;△△与稳定组比较P<0.01;▲▲与排斥组比较P<0.01
由表1还可见,移植术后排斥组的OD值与稳定组相比有非常显著性差异(P<0.01),与感染组相比也有非常显著性差异(P<0.01)。表明肾移植排斥期患者淋巴细胞活化程度高于肾功能良好组和感染组,OD值的增高与临床肾移植患者排斥有关。
, 百拇医药
2.2 排斥组ATG治疗后肾功能恢复与未恢复患者用药前后致敏淋巴细胞检测
14例肾移植术后急性排斥患者应用ATG治疗后,8例肾功能恢复,6例肾功能未恢复。8例肾功能恢复者ATG治疗前OD值较高(0.768),治疗后OD值明显下降(0.491,P<0.05)。而6例肾功能未恢复者ATG治疗前OD值(0.477)较低,治疗后OD值明显增高(0.815,P<0.05)。从上可见,肾功能未恢复者ATG治疗前(平均值0.477)较肾功能恢复者治疗前(平均值0.768)OD值低。就是说,移植术后患者致敏淋巴细胞的活化程度,对免疫抑制剂的应用有重要的作用。
3 讨论
肾移植术后致敏淋巴细胞的产生将引起移植肾的急性排斥反应,而对术前致敏淋巴细胞与移植肾的急性排斥反应关系的研究并不多。本研究对肾移植术前和术后淋巴细胞活化程度的观察表明,移植肾排斥者在术前其淋巴细胞活化程度(0.56±0.20)就明显高于正常人(0.37±0.05)和移植肾功能良好者(0.32±0.05)。这是由于患者术前的输血、女性的妊娠、2次移植等因素,导致机体T淋巴细胞激活,其活化程度增高。而感染者则因术后应用免疫抑制剂及抗生素等药物,使其细胞活化程度(0.46±0.07)比术前(0.56±0.23)有所降低。患者可根据术前的致敏淋巴细胞活化程度来选择最佳手术时机,尽量避免术后急性排斥反应的发生。移植术后排斥组与肾功能良好组和感染组的观察表明,排斥患者移植术后体内淋巴细胞活化程度(0.64±0.19)高于移植前(0.56±0.20)[2],肾移植排斥期患者淋巴细胞活化程度(0.64±0.19)高于肾功能良好组(0.38±0.08)和感染组(0.46±0.07)。由此可见,移植肾排斥患者术前和术后淋巴细胞活化程度大大高于正常人和术后肾功能良好者及感染者。此结果证明移植术后淋巴细胞的增殖代表了机体的排斥反应[3]。
, 百拇医药
本研究中,由于急性排斥反应应用ATG治疗的患者,致敏淋巴细胞相对低(0.477)的患者(6例)治疗效果均不明显,而致敏淋巴细胞高(0.768)的患者(8例)排斥反应得到控制,肾功能恢复。由此可见,ATG的治疗对于致敏淋巴细胞低的患者治疗效果差,这是否表明其为非细胞免疫所致的排斥反应,对此还需做进一步研究。因此,是否考虑根据排斥期患者的淋巴细胞致敏状态选择ATG的治疗。
近来有报道应用第3代抗淋巴细胞抗体白细胞介素2-受体单克隆抗体[4,5],其机制是对抗活化T细胞、吞噬细胞以及B细胞表面的IL-2受体,有效地与IL-2竞争,从而抑制IL-2启动的T细胞增殖反应[6]。因此术前了解移植受者的T淋巴细胞致敏状态,及时给予抗排斥治疗或等待移植最佳时机对减少排斥反应的发生和移植肾的存活能起到一定的作用。术后针对T淋巴细胞致敏状态进行有效治疗,可降低排斥反应的发病率,最终使病人肾存活率进一步提高。
参考文献
, http://www.100md.com
1 周道洪.测定淋巴细胞转化和鼠白细胞介素2活性的新方法MTT比色分析法.中国免疫学杂志,1986,2(1):39~44
2 熊汝成.肾脏移植.北京:人民卫生出版社,1983.265
3 Tanaka J. Transplantation-related complications predicted by cytokine gene expression in the mixed lymphocyte culture in allogeneic bone marrow transplants. Leuk Lymph, 1995,19(1-2):27~32
4 Kupiec-Weglinski J W, Diamantstein T, Tilney N L. Interleukin-2. Receptor-targeted therapy-rationale and applications in organ transplantation. Transplantation, 1988,46:785~792
, http://www.100md.com
5 Sxhuler W, Sedrani R, Cottens S, et al. A new rapamycin derivative: Pharmacological properties in vitro and in rivo. Transplantation, 1997,64:36~42
6 Amlot P L, Rawlings E, Fernando O N, et al. Prolonged action antibody used in cadaveric renal transplantation. Transplantation, 1995,60:748~755
收稿日期:1998-10-05, 百拇医药
单位:首都医科大学附属北京友谊医院泌尿外科
关键词:移植;致敏淋巴细胞;急性排斥
首都医科大学学报990406 提要: 用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,检测了41例肾移植患者移植前后的致敏淋巴细胞,以探讨致敏淋巴细胞与移植受者的早期排斥的关系。结果表明,急性排斥组(14例)受者术前致敏淋巴细胞OD值平均为0.56±0.20,感染组(5例)OD值为0.56±0.23,肾功能稳定组(22例)OD值为0.32±0.05。肾移植术后以上各组OD值为0.46±0.19、0.46±0.70、0.38±0.08。急性排斥期应用胸腺嘧啶(ATG)治疗前后致敏淋巴细胞也有很大的变化。结果提示移植前检测和术后跟踪检测移植受者致敏淋巴细胞状态,有助于预测术后移植肾的早期排斥反应,对ATG治疗也有一定的指导意义。
, http://www.100md.com 中图分类号: R617; R692
Clinical Study on Detection of Sensitized Lymphocytes Following Renal Transplantation
Xu Xiuhong, Jia Baoxiang, Liu Li, Zhang Yuhai
Department of Urology, Beijing Friendship Hospital,Affiliate of Capital University of Medical Sciences
Abstract:The relationship between sensitized lymphocytes and early rejection of recipient was studied by detecting sensitized lymphocyte of 41 cases before and after renal transplantation. The results showed that 14 cases out of 41 recipients suffered from acute rejections. Before operation, the mean OD value of sensitized lymphocyte was 0.56±0.20 in rejections cases(14 cases), 0.56±0.23 in infection cases (5 cases), and 0.32±0.05 in stable renal function cases (22 cases); after operation, the values changed to 0.64±0.19, 0.46±0.07, and 0.38±0.08 respectively. In acute rejection phase, the above values altered dramatically before and after treatment of ATG. The result suggested that it was helpful to predict the early rejection following renal transplantation by detecting the status of recipients sensitized lymphocytes preoperatively and postoperatively. It was also guidable for the treatment of ATG.
, 百拇医药
Key words:transplantation; sensitized lymphocyte; acute rejection
在同种异体移植所致的排斥反应中,尤其是急性反应的早期,病变组织中常见以T淋巴细胞为主的细胞浸润,表明T细胞介导的细胞免疫在此反应中起主要作用。本研究通过在体外对受者T淋巴细胞致敏状态的检测,以期为排斥反应的预测、治疗效果的评价提供科学的依据和方法。
1 临床资料和方法
1.1 病例选择和分组
1997年12月至1998年6月在我院行异体肾移植的患者41例,其中男性30例,女性11例,平均年龄39岁,平均住院日56 d。术前均行血液透析,均无活动性的免疫性和感染性疾病。淋巴细胞毒试验均在1%~4%之间。选择14例健康志愿者为对照组。其中男8例,女6例,平均年龄32岁。
, 百拇医药
41例患者进行移植前后观察。根据临床和检验指标,肾移植术后分为3组:①稳定组:未发生急性排斥反应,无环孢素A肾中毒和感染,移植肾功能良好,共22例(53.7%);②排斥组:临床上发生急性排斥反应,共14例(34.1%);③感染组(肾功能良好):共5例(12.2%)。
1.2 免疫抑制剂的应用
术后前3 d常规应用: 甲基泼尼松龙1 000 mg/d,环磷酰胺200 mg/d,然后改用泼尼松+硫唑嘌呤+环孢素A三联免疫抑制剂治疗,若发生加速排斥反应、急性排斥反应,应用地塞米松冲击治疗或胸腺嘧啶(ATG)或OKT3治疗。
1.3 样本采集和检测
肾移植患者均于术前、术后3 d、术后10 d分别取外周无菌抗凝血,分离单个核细胞。
致敏淋巴细胞检测应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法[1]。取外周血10 mL,分离淋巴细胞,调整细胞浓度为1.5×109 L-1,加入96孔培养板中,每孔100 μL,加入MTT 10 μL,置37 ℃CO2培养箱内培养4 h,加入SDS 100 μL,1 h后振荡10 min,用酶标仪(德国)选择波长570 nm,参考波长630 nm测OD值。
, 百拇医药
1.4 统计学处理
用SYSTAT 3.0统计系统进行处理。实验数据用均数±标准差表示,并进行方差分析。
2 结果
2.1 各组患者与正常对照组OD值比较
41例患者肾移植前OD值为0.43±0.18,与正常对照组OD值(0.37±0.05)比较,有显著性差异(P<0.05)。肾移植组中稳定组移植前后与正常对照组比较OD值无显著性差异(P>0.05);排斥组与感染组移植前与正常组比较均有非常显著性差异(P<0.01);移植术后排斥组与正常对照组比较有非常显著性差异(P<0.01);感染组与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05,表1)。
表1 移植前后各组致敏淋巴细胞活性(OD值)比较 分组
, 百拇医药
n
移植前
移植后#
对照组
14
0.37±0.05
稳定组
22
0.32±0.05
0.38±0.08
排斥组
14
0.56±0.20**△△
, 百拇医药
0.64±0.19**△△
感染组
5
0.56±0.23**△△
0.46±0.07*▲▲
#为移植后3、10 d平均值;与对照组比较*P<0.05,**P<0.01;△△与稳定组比较P<0.01;▲▲与排斥组比较P<0.01
由表1还可见,移植术后排斥组的OD值与稳定组相比有非常显著性差异(P<0.01),与感染组相比也有非常显著性差异(P<0.01)。表明肾移植排斥期患者淋巴细胞活化程度高于肾功能良好组和感染组,OD值的增高与临床肾移植患者排斥有关。
, 百拇医药
2.2 排斥组ATG治疗后肾功能恢复与未恢复患者用药前后致敏淋巴细胞检测
14例肾移植术后急性排斥患者应用ATG治疗后,8例肾功能恢复,6例肾功能未恢复。8例肾功能恢复者ATG治疗前OD值较高(0.768),治疗后OD值明显下降(0.491,P<0.05)。而6例肾功能未恢复者ATG治疗前OD值(0.477)较低,治疗后OD值明显增高(0.815,P<0.05)。从上可见,肾功能未恢复者ATG治疗前(平均值0.477)较肾功能恢复者治疗前(平均值0.768)OD值低。就是说,移植术后患者致敏淋巴细胞的活化程度,对免疫抑制剂的应用有重要的作用。
3 讨论
肾移植术后致敏淋巴细胞的产生将引起移植肾的急性排斥反应,而对术前致敏淋巴细胞与移植肾的急性排斥反应关系的研究并不多。本研究对肾移植术前和术后淋巴细胞活化程度的观察表明,移植肾排斥者在术前其淋巴细胞活化程度(0.56±0.20)就明显高于正常人(0.37±0.05)和移植肾功能良好者(0.32±0.05)。这是由于患者术前的输血、女性的妊娠、2次移植等因素,导致机体T淋巴细胞激活,其活化程度增高。而感染者则因术后应用免疫抑制剂及抗生素等药物,使其细胞活化程度(0.46±0.07)比术前(0.56±0.23)有所降低。患者可根据术前的致敏淋巴细胞活化程度来选择最佳手术时机,尽量避免术后急性排斥反应的发生。移植术后排斥组与肾功能良好组和感染组的观察表明,排斥患者移植术后体内淋巴细胞活化程度(0.64±0.19)高于移植前(0.56±0.20)[2],肾移植排斥期患者淋巴细胞活化程度(0.64±0.19)高于肾功能良好组(0.38±0.08)和感染组(0.46±0.07)。由此可见,移植肾排斥患者术前和术后淋巴细胞活化程度大大高于正常人和术后肾功能良好者及感染者。此结果证明移植术后淋巴细胞的增殖代表了机体的排斥反应[3]。
, 百拇医药
本研究中,由于急性排斥反应应用ATG治疗的患者,致敏淋巴细胞相对低(0.477)的患者(6例)治疗效果均不明显,而致敏淋巴细胞高(0.768)的患者(8例)排斥反应得到控制,肾功能恢复。由此可见,ATG的治疗对于致敏淋巴细胞低的患者治疗效果差,这是否表明其为非细胞免疫所致的排斥反应,对此还需做进一步研究。因此,是否考虑根据排斥期患者的淋巴细胞致敏状态选择ATG的治疗。
近来有报道应用第3代抗淋巴细胞抗体白细胞介素2-受体单克隆抗体[4,5],其机制是对抗活化T细胞、吞噬细胞以及B细胞表面的IL-2受体,有效地与IL-2竞争,从而抑制IL-2启动的T细胞增殖反应[6]。因此术前了解移植受者的T淋巴细胞致敏状态,及时给予抗排斥治疗或等待移植最佳时机对减少排斥反应的发生和移植肾的存活能起到一定的作用。术后针对T淋巴细胞致敏状态进行有效治疗,可降低排斥反应的发病率,最终使病人肾存活率进一步提高。
参考文献
, http://www.100md.com
1 周道洪.测定淋巴细胞转化和鼠白细胞介素2活性的新方法MTT比色分析法.中国免疫学杂志,1986,2(1):39~44
2 熊汝成.肾脏移植.北京:人民卫生出版社,1983.265
3 Tanaka J. Transplantation-related complications predicted by cytokine gene expression in the mixed lymphocyte culture in allogeneic bone marrow transplants. Leuk Lymph, 1995,19(1-2):27~32
4 Kupiec-Weglinski J W, Diamantstein T, Tilney N L. Interleukin-2. Receptor-targeted therapy-rationale and applications in organ transplantation. Transplantation, 1988,46:785~792
, http://www.100md.com
5 Sxhuler W, Sedrani R, Cottens S, et al. A new rapamycin derivative: Pharmacological properties in vitro and in rivo. Transplantation, 1997,64:36~42
6 Amlot P L, Rawlings E, Fernando O N, et al. Prolonged action antibody used in cadaveric renal transplantation. Transplantation, 1995,60:748~755
收稿日期:1998-10-05, 百拇医药