图像分析仪对横纹肌肉瘤和非肌性肿瘤及其组织的肌红蛋白的免疫组化检测
作者：董小黎 王蓬文 刘国贞 王珏 王福
单位：首都医科大学病理解剖学教研室 董小黎 王蓬文 刘国贞 王珏；首都医科大学附属北京安贞医院 王福
关键词：
首都医科大学学报990421 由于横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma, RMS)组织形态表现的多样性和不典型性，常使低分化RMS的诊断有一定困难。以肌红蛋白(Mb)为横纹肌源性肿瘤的特异性标志以来，用免疫组化染色检测瘤细胞内Mb就成为辅助诊断RMS的重要方法[1]。但这种检测基本上是定性的，缺乏精密的定量数据[2]。这是因为显微观察的传统方法不能适应高精度的要求，对阳性着色及其程度缺乏客观评定指标，更无法进行色值分析。本研究使用真彩色图像分析仪，利用像素色值定量检测肿瘤细胞内Mb成分的含量，以探讨其在用免疫组化染色诊断RMS方面的应用价值及意义。
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1 材料和方法
标本：RMS组33例。非肌源性肿瘤组14例，包括神经母细胞瘤、滑膜肉瘤、淋巴肉瘤、骨肉瘤、血管内皮肉瘤、神经纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤及脑膜肉瘤各1例，肝癌、肺癌、胃癌各2例。非肌性组12例，包括肝、肾、肺等非肌性组织。所有材料均为10%甲醛固定、石蜡包埋。
免疫组化ABC染色：Ⅰ抗为DAKO公司提供兔抗人Mb(1∶200)，ABC复合物亦为DAKO公司提供，用DAB显色。
定量检测：应用CFG真彩色图像分析仪(台湾Visionetics Internationalgy公司产品)。首先由摄像头将光镜的免疫组化染色切片图像摄取进入电脑，数字化卡将视频信号数字化，再按512×512的像素排列方式将图像重现于监视器屏幕上。此分析仪能将每一像素的颜色分成红、绿、蓝3种组成成分，通过电脑能获取任一像素的红、绿、蓝色色值。每种颜色又分为32级，故能显示出32×32×32=32 768种不同的颜色。
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检测方法：切片分为RMS免疫组化染色组、非肌源性肿瘤免疫组化染色组和非肌性组织免疫组化染色组3组。切片在恒定光源和400倍放大的情况下，通过分析仪将其图像显现于监视器屏幕上，逐个地录取不同细胞浆内各种颜色色值数据。
统计学处理采用方差分析法。
2 结果和讨论
ABC免疫组化染色：33例RMS中，29例(87.8%)Mb阳性(图1)。非肌源性肿瘤组和非肌性组Mb均为阴性。
图1 胚胎性横纹肌肉瘤ABC免疫组化染色 ×400
定量检测：RMS组、非肌源性肿瘤组和非肌性组3组的红、绿、蓝色色值见表1。
表1 RMS组及对照组图像分析定量测定表 色值
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RMS组
n=33
非肌源性肿瘤组
n=14
非肌性组
n=12
红色
17.80±0.79
11.90±0.74**
12.20±0.63**
绿色
10.80±0.78
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6.70±0.68**
6.60±0.52**
蓝色
3.70±0.68
3.60±0.52
3.90±0.34
**与RMS组相比P<0.01
图像分析仪对各组切片处理的结果可以更确切地证实，本实验所使用的免疫组化染色法对判断肿瘤的肌源性来源具有重要的意义。
自1979年Mukai首次报道Mb为横纹肌源性肿瘤的特异性标志以来[3]，用免疫组化法检测瘤细胞内Mb就成为辅助诊断RMS的重要方法[2，4]。但是免疫组化染色只是一种定性检测方法，对于判断其染色为阴性、阳性及阳性程度缺乏客观评判指标。如能利用图像分析仪，对肿瘤细胞免疫组化染色显示的Mb进行像素色值定量分析，则较单纯使用免疫组化染色方法更为客观、精确[5，6]。
, 百拇医药
本研究结果表明，使用图像分析仪更加确切地证实了免疫组化染色在肿瘤病理诊断中的应用价值，同时也显示了定量检测在判断免疫组化染色结果方面的意义。
Mb是RMS的一种特有成分，而其含量的多少与肿瘤的分化程度有一定关系。同时，免疫组化阳性着色的深浅，应与Mb含量和其像素色值量成比例。但是如何利用色值量分析免疫组化染色结果，并进一步应用于临床诊断，还有待于今后进一步研究。
参考文献
1 Jang D A S H. Myosin and myoglobin as tumor markes in the diagnosis of RMS. Am J Pathol, 1984,8:521
2 Bacus J W, Grace L J. An optical microscope system of standardized cell measurement and analysis. Appl Optics, 1987,26:3280～3293
, http://www.100md.com
3 Mukai. Localization of Mb in normal and neoplastic human skeletal muscle using immunoperoxidase method. Am J Surg Pathol, 1979,3:373
4 Kindblom. Immunohistochemical location of Mb in human muscle tissue and embryonal and alveolar RMS. Acta Pathol Microbiol Immunol Scand Sect A, 1982,90:167～174
5 Gerard H M. Computer-aided 3-D reconstruction from routine histologic sections implementation of a new algorithm. Microsc Anat,1993,33:31
6 温祥云.图像分析仪对鳞癌细胞核的定量测定.首都医科大学学报,1997,18(1):12～14
收稿日期：1998-09-03, http://www.100md.com
单位：首都医科大学病理解剖学教研室 董小黎 王蓬文 刘国贞 王珏；首都医科大学附属北京安贞医院 王福
关键词：
首都医科大学学报990421 由于横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma, RMS)组织形态表现的多样性和不典型性，常使低分化RMS的诊断有一定困难。以肌红蛋白(Mb)为横纹肌源性肿瘤的特异性标志以来，用免疫组化染色检测瘤细胞内Mb就成为辅助诊断RMS的重要方法[1]。但这种检测基本上是定性的，缺乏精密的定量数据[2]。这是因为显微观察的传统方法不能适应高精度的要求，对阳性着色及其程度缺乏客观评定指标，更无法进行色值分析。本研究使用真彩色图像分析仪，利用像素色值定量检测肿瘤细胞内Mb成分的含量，以探讨其在用免疫组化染色诊断RMS方面的应用价值及意义。
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1 材料和方法
标本：RMS组33例。非肌源性肿瘤组14例，包括神经母细胞瘤、滑膜肉瘤、淋巴肉瘤、骨肉瘤、血管内皮肉瘤、神经纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤及脑膜肉瘤各1例，肝癌、肺癌、胃癌各2例。非肌性组12例，包括肝、肾、肺等非肌性组织。所有材料均为10%甲醛固定、石蜡包埋。
免疫组化ABC染色：Ⅰ抗为DAKO公司提供兔抗人Mb(1∶200)，ABC复合物亦为DAKO公司提供，用DAB显色。
定量检测：应用CFG真彩色图像分析仪(台湾Visionetics Internationalgy公司产品)。首先由摄像头将光镜的免疫组化染色切片图像摄取进入电脑，数字化卡将视频信号数字化，再按512×512的像素排列方式将图像重现于监视器屏幕上。此分析仪能将每一像素的颜色分成红、绿、蓝3种组成成分，通过电脑能获取任一像素的红、绿、蓝色色值。每种颜色又分为32级，故能显示出32×32×32=32 768种不同的颜色。
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检测方法：切片分为RMS免疫组化染色组、非肌源性肿瘤免疫组化染色组和非肌性组织免疫组化染色组3组。切片在恒定光源和400倍放大的情况下，通过分析仪将其图像显现于监视器屏幕上，逐个地录取不同细胞浆内各种颜色色值数据。
统计学处理采用方差分析法。
2 结果和讨论
ABC免疫组化染色：33例RMS中，29例(87.8%)Mb阳性(图1)。非肌源性肿瘤组和非肌性组Mb均为阴性。
图1 胚胎性横纹肌肉瘤ABC免疫组化染色 ×400
定量检测：RMS组、非肌源性肿瘤组和非肌性组3组的红、绿、蓝色色值见表1。
表1 RMS组及对照组图像分析定量测定表 色值
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RMS组
n=33
非肌源性肿瘤组
n=14
非肌性组
n=12
红色
17.80±0.79
11.90±0.74**
12.20±0.63**
绿色
10.80±0.78
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6.70±0.68**
6.60±0.52**
蓝色
3.70±0.68
3.60±0.52
3.90±0.34
**与RMS组相比P<0.01
图像分析仪对各组切片处理的结果可以更确切地证实，本实验所使用的免疫组化染色法对判断肿瘤的肌源性来源具有重要的意义。
自1979年Mukai首次报道Mb为横纹肌源性肿瘤的特异性标志以来[3]，用免疫组化法检测瘤细胞内Mb就成为辅助诊断RMS的重要方法[2，4]。但是免疫组化染色只是一种定性检测方法，对于判断其染色为阴性、阳性及阳性程度缺乏客观评判指标。如能利用图像分析仪，对肿瘤细胞免疫组化染色显示的Mb进行像素色值定量分析，则较单纯使用免疫组化染色方法更为客观、精确[5，6]。
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本研究结果表明，使用图像分析仪更加确切地证实了免疫组化染色在肿瘤病理诊断中的应用价值，同时也显示了定量检测在判断免疫组化染色结果方面的意义。
Mb是RMS的一种特有成分，而其含量的多少与肿瘤的分化程度有一定关系。同时，免疫组化阳性着色的深浅，应与Mb含量和其像素色值量成比例。但是如何利用色值量分析免疫组化染色结果，并进一步应用于临床诊断，还有待于今后进一步研究。
参考文献
1 Jang D A S H. Myosin and myoglobin as tumor markes in the diagnosis of RMS. Am J Pathol, 1984,8:521
2 Bacus J W, Grace L J. An optical microscope system of standardized cell measurement and analysis. Appl Optics, 1987,26:3280～3293
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3 Mukai. Localization of Mb in normal and neoplastic human skeletal muscle using immunoperoxidase method. Am J Surg Pathol, 1979,3:373
4 Kindblom. Immunohistochemical location of Mb in human muscle tissue and embryonal and alveolar RMS. Acta Pathol Microbiol Immunol Scand Sect A, 1982,90:167～174
5 Gerard H M. Computer-aided 3-D reconstruction from routine histologic sections implementation of a new algorithm. Microsc Anat,1993,33:31
6 温祥云.图像分析仪对鳞癌细胞核的定量测定.首都医科大学学报,1997,18(1):12～14
收稿日期：1998-09-03, http://www.100md.com