肾移植中随机HLA配型的研究
作者：贾保祥 李哲先 张玉海 薛竹
单位：首都医科大学附属北京友谊医院泌尿科
关键词：肾移植；HLA配型；错配
首都医科大学学报990407 提要： 为了解随机HLA配型的供-受者配合率的多寡，为器官移植的广泛开展提供一些基础性资料，对336例肾移植供-受者随机的HLA-A、B和DR抗原配型做了分析。HLA 6个抗原完全错配率为24.40%(82/336)，5个抗原错配率为33.33%(112/336)，4个抗原错配率为27.68%(93/336)，3个抗原错配率为11.91%(40/336)，2个抗原错配率为2.68%(9/336)，1个抗原错配率和0个抗原错配率为0。随机HLA-A、B和DR 1个抗原配合的在HLA-A抗原为49.7%(167/336)，B抗原为27.7%(93/336)，DR抗原为31.8%(107/336)。2个抗原配合的在A抗原为4.76%(16/336)，B抗原为2.08%(7/336)，DR抗原为3.27%(11/336)。提示：完全配合的HLA抗原和5个HLA抗原配合的几率极低。在随机肾移植供-受者中，HLA抗原A、B和DR抗原位点的2个等位基因完全配合的几率很低。
, 百拇医药
中图分类号： R699.2
Study on Random HLA Matching of Renal Transplantation
Jia Baoxiang, Li Zhexian, Zhang Yuhai, Xue Zhu
Department of Urology, Beijing Friendship Hospital,Affiliate of Capital University of Medical Sciences
Abstract：In order to learn the match rate of random matching-HLA of the donor-orcipients and provide some base date for widespread use of organ transplantation. The antigens matching of HLA-A、B and DR of the dornor-recipients were studied in 336 cases of renal transplantation. The 6、5、4、3、2、1 and 0 mismaching rate were 24.40%、33.33%、27.68%、11.91%、2.68%、0 and 0, respectively. One antigen mismatch rate was 49.7%、27.7% and 31.8% at HLA-A、B and DR antigens, respectively. Two antigens mismatching rate was 4.76%、2.08% and 3.27% at HLA-A、B and DR antigens, respectively. This study showed that complete matching was rare of six and five HLA antigens and two HLA antigens matching was also rare of HLA-A、B and DR in renal transplantation.
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Key words：renal transplantation; HLA matching; mismatch
随着肾移植手术的不断开展，对肾移植长期存活的要求也越来越迫切。近年来，对HLA配型与长期存活的研究在国内也得到重视。但是由于国内还没有建立器官移植配型的中心机构，常使移植受者不能得到良好的HLA配合的供者，不但影响了移植器官的长期存活，也影响了我国对HLA配型应用的推广及HLA配型对肾移植存活的统计，至今我国未有HLA配型与肾移植存活关系较好的统计资料。为此，对我院近年随机所做的HLA供-受者组织配型做一初步总结，以了解随机HLA配型的供-受者配合率的多寡，为器官移植的广泛开展提供一些基础性资料。
1 材料和方法
自1994年1月至1996年12月我科收治的肾移植患者336人，其中男性226人，女性110人。年龄15～62岁，平均38.9岁。自1994年1月至1996年12月肾移植供者，均为脑死亡，男性200人，女性6人，共计206人。年龄19～38岁，平均25岁。
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HLA特异性抗血清：自1994年初至1996年底分别使用美国Trans-Type Diagnostics、One Lambda公司及部分国内HLA分型板，其主要HLA特异性抗体有：Ⅰ类20余种， 主要为A1，A2，A3，A9(23，24)，A10(25，26)，A11，A28，A19(29，30，31，32，33)；B5(51，52)，B7，B8，B12(44，45)，B13，B14(64，65)，B15(62，63，75)，B16(38，39)，B17(57 ，58)，B21(49，50)，B22(54，55，56)，B27，B35，B37，B40(60，61)，B41，B42，B46，B48等。Ⅱ类抗原主要为 DR1，DR2(15，16)，DR3(17)，DR4，DR5(11，12)，DR6(13，14)，DR7，DR8，DR9，DR10。自1996年初改用PCR/SSP分子生物学方法对HLA-Ⅱ类DR位点进行DNA分型，以提高准确性。其特异性引物为DRB101，DRB1015，DRB1016，DRB103，DRB104，DRB1011，DRB1012，DRB107，DRB108，DRB109， DRB110，DRB11301，DRB11302，DRB11401，DRB11402，DRB3(DR52)，DRB4(DR53)(参照第12届国际组织相容会议设计的引物序列，由北京红十字血液中心合成)。
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HLA分型方法：①血清学方法：两步法(使用Trans-Type Diagnostics和国产板)：HLA特异性抗血清1 μL+供/受者淋巴细胞1 μL，室温反应30 min(Ⅱ类反应1 h)，加兔补体5 μL，反应1 h(Ⅱ类反应2 h)，加5%伊红5 μL，5 min后加5～8 μL 12%甲醛，静置2 h或过夜，置倒置相差显微镜下观查结果。一步法〔使用One Lambda公司单克隆抗体干板(Dry Tray)〕：HLA重溶单克隆特异性抗体1 μL+供/受者淋巴细胞1 μL+重溶兔补体1 μL，在室温反应60 min，加5%伊红5 μL，4～5 min后加5～8 μL甲醛固定，放置20～30 min后观察结果。②聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法：用于HLA-DR抗原的分型。将1 mL EDTA抗凝血通过裂解红细胞，再裂解白细胞，然后加入高氯酸钠将蛋白质沉淀下来，从而提取染色体DNA。每个PCR反应体系总量为25 μL。扩增条件为94 ℃变性1 min，65 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，共35个循环。扩增产物经2%琼脂糖电泳后观察结果。
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2 结果
肾移植供受者随机HLA-A、B和DR抗原/基因错配率(mismatching，MM)见表1。由表1看出，随机肾移植供-受者的HLA抗原配型，完全的HLA抗原/基因配合和5个HLA抗原/基因的配合几率极低。
表1 随机HLA-A、B和DR抗原/基因错配率 HLA抗原错配数
错配人数
抗原、基因错配率/%
6
82
24.41
5
, http://www.100md.com 112
33.33
4
93
27.68
3
40
11.91
2
9
2.68
1和0
0
0
, 百拇医药
肾移植供受者随机HLA-A、B和DR抗原/基因配合的百分比见表2。由表2看出，在随机肾移植供-受者中，HLA抗原的A、B和DR抗原/基因的2个等位基因在随机组合中几率很低。
表2 随机HLA-A、B和DR抗原/基因配合的百分比 项目
1个抗原
2个抗原
例数(所占百分比/%)
例数(所占百分比/%)
HLA-A
167(49.7)
16(4.76)
HLA-B
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93(27.7)
7(2.08)
HLA-DR
107(31.8)
11(3.27)
HLA抗原/基因常见型在随机供-受者的配合率(%)为：HLA-A2、A11、A24分别为29.17、13.69和8.63；HLA-B13、B46、B60和B62分别为5.36、3.27、9.2和2.98；HLA-DR2、DR4、DR12、DR7、DR9分别为9.23、5.06、7.74、5.36和7.44。
3 讨论
良好的HLA配型可提高移植肾的长期存活率。但是，移植受者寻找HLA完全配合的无关供者，其几率甚微。有资料证明HLA-A、B和DR位点的供-受者对配型随着误配率的增加移植肾长期存活率逐步降低[1，2]。Petersen等的统计资料证明，HLA-B和DR位点的完全误配以及单一误配均影响移植肾长期存活[2]；而A、B位点和DR位点相比，其完全误配和单一误配影响移植肾长期存活的差别相对小些。同时证明HLA位点的完全误配与完全相配对移植肾发生慢性排异和急性排异与否也有一定的关系。在随机寻找HLA完全配合的供-受者对中，HLA抗原配合率越高，供-受者对的数目越少。在336个肾移植受者中HLA位点5个抗原和6个抗原配合的为0。众所周知，如果供-受者对的HLA-B抗原和DR抗原能够得到完全配合或HLA-B位点1个抗原与DR 2个抗原配合，此肾移植受者将获得移植肾长期存活的机会，而且发生慢性排异和急性排异的几率明显降低。因此，没有一个良好的HLA配型组织来协调肾脏的调配，将影响移植肾的长期存活率，同时也影响HLA在器官移植领域中的发展。从肾移植供受者对的随机HLA-A、B和DR抗原位点配合的百分比来看，HLA-A位点1个抗原配合率最高，其次为HLA-DR位点的1个抗原。HLA位点2个抗原配合率仍是HLA-A抗原最高，其次为HLA-DR抗原。这是由于HLA-A和DR位点抗原多态性远较HLA-B位点弱。同时也看到，在肾移植配型中HLA-A抗原虽然比B和DR抗原对移植肾的长期存活率相对弱些，但其常见型如：HLA-A2，A11，A24抗原的随机配合率则高于B和DR抗原的配合率，此类抗原的配合率高，无疑有利于肾移植的存活。Opelaz通过对2次肾移植的HLA配型证明[3]，HLA配型在第2次肾移植中更重要，HLA的误配与未误配相比，HLA误配影响移植肾的长期存活率，特别是HLA-DR位点的误配更影响移植肾的长期存活。因此，对于2次以上肾移植受者更应做好HLA分型工作，在得不到良好的HLA配型的情况下，或没有条件做HLA配型时，移植一定要谨慎，最好对20～30个无关供者做抗体检测，以证实抗移植供者的抗体是否存在，以及抗体的效价强度。
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综上所述，随机肾移植供-受者对的HLA-A、B和DR抗原配型，完全的HLA抗原配合和5个HLA抗原的配合几率极低。HLA抗原的A、B和DR抗原位点的2个等位基因在随机组合中几率也低。因此，为了使HLA抗原在器官移植配型中得到广泛应用，特别需要建立地区乃至全国的HLA配型中心，以此来协调移植器官的分配与共享，推动我国器官移植的发展和进步。
参考文献
1 Opelaz G, Wujciak T. Cadaveric kidneys should be allocated acoording the HLA match. Transplant Proc, 1995,27(1):93
2 Petersen P, Scheeberger S, Schleibner S, et al. HLA matching and short/long-term outcome of caddaverice renal allografts: Large songle-centre asta confirm the multicentre analyses. Transplant Proc, 1995, 27(1):658
3 Opelaz G. Repeated HLA mismatches increase the failure rate of second kidney transplants. Transplanta Proc,1995,27(1):658
收稿日期：1998-10-20, 百拇医药
单位：首都医科大学附属北京友谊医院泌尿科
关键词：肾移植；HLA配型；错配
首都医科大学学报990407 提要： 为了解随机HLA配型的供-受者配合率的多寡，为器官移植的广泛开展提供一些基础性资料，对336例肾移植供-受者随机的HLA-A、B和DR抗原配型做了分析。HLA 6个抗原完全错配率为24.40%(82/336)，5个抗原错配率为33.33%(112/336)，4个抗原错配率为27.68%(93/336)，3个抗原错配率为11.91%(40/336)，2个抗原错配率为2.68%(9/336)，1个抗原错配率和0个抗原错配率为0。随机HLA-A、B和DR 1个抗原配合的在HLA-A抗原为49.7%(167/336)，B抗原为27.7%(93/336)，DR抗原为31.8%(107/336)。2个抗原配合的在A抗原为4.76%(16/336)，B抗原为2.08%(7/336)，DR抗原为3.27%(11/336)。提示：完全配合的HLA抗原和5个HLA抗原配合的几率极低。在随机肾移植供-受者中，HLA抗原A、B和DR抗原位点的2个等位基因完全配合的几率很低。
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中图分类号： R699.2
Study on Random HLA Matching of Renal Transplantation
Jia Baoxiang, Li Zhexian, Zhang Yuhai, Xue Zhu
Department of Urology, Beijing Friendship Hospital,Affiliate of Capital University of Medical Sciences
Abstract：In order to learn the match rate of random matching-HLA of the donor-orcipients and provide some base date for widespread use of organ transplantation. The antigens matching of HLA-A、B and DR of the dornor-recipients were studied in 336 cases of renal transplantation. The 6、5、4、3、2、1 and 0 mismaching rate were 24.40%、33.33%、27.68%、11.91%、2.68%、0 and 0, respectively. One antigen mismatch rate was 49.7%、27.7% and 31.8% at HLA-A、B and DR antigens, respectively. Two antigens mismatching rate was 4.76%、2.08% and 3.27% at HLA-A、B and DR antigens, respectively. This study showed that complete matching was rare of six and five HLA antigens and two HLA antigens matching was also rare of HLA-A、B and DR in renal transplantation.
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Key words：renal transplantation; HLA matching; mismatch
随着肾移植手术的不断开展，对肾移植长期存活的要求也越来越迫切。近年来，对HLA配型与长期存活的研究在国内也得到重视。但是由于国内还没有建立器官移植配型的中心机构，常使移植受者不能得到良好的HLA配合的供者，不但影响了移植器官的长期存活，也影响了我国对HLA配型应用的推广及HLA配型对肾移植存活的统计，至今我国未有HLA配型与肾移植存活关系较好的统计资料。为此，对我院近年随机所做的HLA供-受者组织配型做一初步总结，以了解随机HLA配型的供-受者配合率的多寡，为器官移植的广泛开展提供一些基础性资料。
1 材料和方法
自1994年1月至1996年12月我科收治的肾移植患者336人，其中男性226人，女性110人。年龄15～62岁，平均38.9岁。自1994年1月至1996年12月肾移植供者，均为脑死亡，男性200人，女性6人，共计206人。年龄19～38岁，平均25岁。
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HLA特异性抗血清：自1994年初至1996年底分别使用美国Trans-Type Diagnostics、One Lambda公司及部分国内HLA分型板，其主要HLA特异性抗体有：Ⅰ类20余种， 主要为A1，A2，A3，A9(23，24)，A10(25，26)，A11，A28，A19(29，30，31，32，33)；B5(51，52)，B7，B8，B12(44，45)，B13，B14(64，65)，B15(62，63，75)，B16(38，39)，B17(57 ，58)，B21(49，50)，B22(54，55，56)，B27，B35，B37，B40(60，61)，B41，B42，B46，B48等。Ⅱ类抗原主要为 DR1，DR2(15，16)，DR3(17)，DR4，DR5(11，12)，DR6(13，14)，DR7，DR8，DR9，DR10。自1996年初改用PCR/SSP分子生物学方法对HLA-Ⅱ类DR位点进行DNA分型，以提高准确性。其特异性引物为DRB101，DRB1015，DRB1016，DRB103，DRB104，DRB1011，DRB1012，DRB107，DRB108，DRB109， DRB110，DRB11301，DRB11302，DRB11401，DRB11402，DRB3(DR52)，DRB4(DR53)(参照第12届国际组织相容会议设计的引物序列，由北京红十字血液中心合成)。
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HLA分型方法：①血清学方法：两步法(使用Trans-Type Diagnostics和国产板)：HLA特异性抗血清1 μL+供/受者淋巴细胞1 μL，室温反应30 min(Ⅱ类反应1 h)，加兔补体5 μL，反应1 h(Ⅱ类反应2 h)，加5%伊红5 μL，5 min后加5～8 μL 12%甲醛，静置2 h或过夜，置倒置相差显微镜下观查结果。一步法〔使用One Lambda公司单克隆抗体干板(Dry Tray)〕：HLA重溶单克隆特异性抗体1 μL+供/受者淋巴细胞1 μL+重溶兔补体1 μL，在室温反应60 min，加5%伊红5 μL，4～5 min后加5～8 μL甲醛固定，放置20～30 min后观察结果。②聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法：用于HLA-DR抗原的分型。将1 mL EDTA抗凝血通过裂解红细胞，再裂解白细胞，然后加入高氯酸钠将蛋白质沉淀下来，从而提取染色体DNA。每个PCR反应体系总量为25 μL。扩增条件为94 ℃变性1 min，65 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，共35个循环。扩增产物经2%琼脂糖电泳后观察结果。
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2 结果
肾移植供受者随机HLA-A、B和DR抗原/基因错配率(mismatching，MM)见表1。由表1看出，随机肾移植供-受者的HLA抗原配型，完全的HLA抗原/基因配合和5个HLA抗原/基因的配合几率极低。
表1 随机HLA-A、B和DR抗原/基因错配率 HLA抗原错配数
错配人数
抗原、基因错配率/%
6
82
24.41
5
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33.33
4
93
27.68
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11.91
2
9
2.68
1和0
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肾移植供受者随机HLA-A、B和DR抗原/基因配合的百分比见表2。由表2看出，在随机肾移植供-受者中，HLA抗原的A、B和DR抗原/基因的2个等位基因在随机组合中几率很低。
表2 随机HLA-A、B和DR抗原/基因配合的百分比 项目
1个抗原
2个抗原
例数(所占百分比/%)
例数(所占百分比/%)
HLA-A
167(49.7)
16(4.76)
HLA-B
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93(27.7)
7(2.08)
HLA-DR
107(31.8)
11(3.27)
HLA抗原/基因常见型在随机供-受者的配合率(%)为：HLA-A2、A11、A24分别为29.17、13.69和8.63；HLA-B13、B46、B60和B62分别为5.36、3.27、9.2和2.98；HLA-DR2、DR4、DR12、DR7、DR9分别为9.23、5.06、7.74、5.36和7.44。
3 讨论
良好的HLA配型可提高移植肾的长期存活率。但是，移植受者寻找HLA完全配合的无关供者，其几率甚微。有资料证明HLA-A、B和DR位点的供-受者对配型随着误配率的增加移植肾长期存活率逐步降低[1，2]。Petersen等的统计资料证明，HLA-B和DR位点的完全误配以及单一误配均影响移植肾长期存活[2]；而A、B位点和DR位点相比，其完全误配和单一误配影响移植肾长期存活的差别相对小些。同时证明HLA位点的完全误配与完全相配对移植肾发生慢性排异和急性排异与否也有一定的关系。在随机寻找HLA完全配合的供-受者对中，HLA抗原配合率越高，供-受者对的数目越少。在336个肾移植受者中HLA位点5个抗原和6个抗原配合的为0。众所周知，如果供-受者对的HLA-B抗原和DR抗原能够得到完全配合或HLA-B位点1个抗原与DR 2个抗原配合，此肾移植受者将获得移植肾长期存活的机会，而且发生慢性排异和急性排异的几率明显降低。因此，没有一个良好的HLA配型组织来协调肾脏的调配，将影响移植肾的长期存活率，同时也影响HLA在器官移植领域中的发展。从肾移植供受者对的随机HLA-A、B和DR抗原位点配合的百分比来看，HLA-A位点1个抗原配合率最高，其次为HLA-DR位点的1个抗原。HLA位点2个抗原配合率仍是HLA-A抗原最高，其次为HLA-DR抗原。这是由于HLA-A和DR位点抗原多态性远较HLA-B位点弱。同时也看到，在肾移植配型中HLA-A抗原虽然比B和DR抗原对移植肾的长期存活率相对弱些，但其常见型如：HLA-A2，A11，A24抗原的随机配合率则高于B和DR抗原的配合率，此类抗原的配合率高，无疑有利于肾移植的存活。Opelaz通过对2次肾移植的HLA配型证明[3]，HLA配型在第2次肾移植中更重要，HLA的误配与未误配相比，HLA误配影响移植肾的长期存活率，特别是HLA-DR位点的误配更影响移植肾的长期存活。因此，对于2次以上肾移植受者更应做好HLA分型工作，在得不到良好的HLA配型的情况下，或没有条件做HLA配型时，移植一定要谨慎，最好对20～30个无关供者做抗体检测，以证实抗移植供者的抗体是否存在，以及抗体的效价强度。
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综上所述，随机肾移植供-受者对的HLA-A、B和DR抗原配型，完全的HLA抗原配合和5个HLA抗原的配合几率极低。HLA抗原的A、B和DR抗原位点的2个等位基因在随机组合中几率也低。因此，为了使HLA抗原在器官移植配型中得到广泛应用，特别需要建立地区乃至全国的HLA配型中心，以此来协调移植器官的分配与共享，推动我国器官移植的发展和进步。
参考文献
1 Opelaz G, Wujciak T. Cadaveric kidneys should be allocated acoording the HLA match. Transplant Proc, 1995,27(1):93
2 Petersen P, Scheeberger S, Schleibner S, et al. HLA matching and short/long-term outcome of caddaverice renal allografts: Large songle-centre asta confirm the multicentre analyses. Transplant Proc, 1995, 27(1):658
3 Opelaz G. Repeated HLA mismatches increase the failure rate of second kidney transplants. Transplanta Proc,1995,27(1):658
收稿日期：1998-10-20, 百拇医药