部分正常人体组织淀粉酶及其同工酶含量的测定
作者：于嘉屏 金家文 许绍辉 王爱华
单位：第二军医大学长征医院临床检验科，上海 200003
关键词：淀粉酶同工酶；人体组织；淀粉酶
临床检验杂志990408 除了胰腺、腮腺疾病外还有一些疾病如胆囊炎、小肠梗阻、消化道溃疡穿孔、异位妊娠、恶性肿瘤等也可出现血清淀粉酶活性增高，可能的原因之一就是这些患病组织含有淀粉酶，在炎症时通过各种途径入血引起血清淀粉酶活性增高。但至今国内外对于各种人体组织淀粉酶含量的研究报告甚少。我们收集了部分正常人体组织，经匀浆后测出匀浆上清液中的总淀粉酶(Amy)活性，并用抑制法测定唾液型和胰型淀粉酶同工酶(S-Amy和P-Amy)，从而为探讨临床上血清淀粉酶增高机制提供了实验依据。
1 材料
1.1 仪器 Beckman Clinical System 700型生化分析仪。高速台式离心机(上海医用分析仪器厂)。KD-300组织匀浆器(日本丰澄电源器株式会社)。
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1.2 试剂 淀粉酶活性测定采用上海长征公司淀粉酶试剂盒(PNPG4法)。淀粉酶抑制物，为小麦唾液淀粉酶抑制蛋白，由上海长征医院临床酶学研究室纯化和提供[1]。
1.3 材料和样品采集 意外死亡的正常人3名，2名男性分别为25岁、28岁，1名女性55岁，于死亡后6 h内采集样品，取胰腺、腮腺、胃、空肠、回肠、输卵管、子宫、肺、胆囊、骨骼肌和睾丸组织，各取20 g左右。
2 方法
2.1 组织匀浆液的制备 每种组织重复取样6次，每次取500 mg，先用生理盐水清洗，加入pH 7.4的0.01 mol/L Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液2 ml后置组织匀浆器中进行匀浆。匀浆器转速为15 000 r/min，时间为30 s×4次。将匀浆液3 000 r/min离心10 min。离心完毕后，吸取上清液进行总淀粉酶和淀粉酶同工酶测定。此步可使95%以上的细胞破碎并释放出淀粉酶[2]。
, 百拇医药
2.2 淀粉酶及其同工酶测定[3]。
2.2.1 测定参数 温度37°C，波长405 nm，延迟时间60 s，测定时间120 s，因数7000。
2.2.2 淀粉酶总活性测定 50 μl生理盐水加10 μl匀浆上清液加500 μl底物液，按上述测定参数测定，如果总淀粉酶活性>1 000 U/L，则用生理盐水稀释后再进行测定。
2.2.3 胰淀粉酶活性(P-Amy) 50 μl抑制剂加10 μl匀浆上清液，37°C温育10 min，再加入500 μl底物液，按上述参数测定，得剩余Amy活性(R-Amy)。结果计算及校正：总Amy(U/L)=7000×ΔA/min。R-Amy(U/L)=7000×抑制后ΔA/min(U/L)。由于该抑制剂对S-Amy的抑制率为97.5%，对P-Amy的交叉抑制率为20%，故P-Amy(U/L)=1.29R-Amy-0.0323×总Amy。S-Amy(U/L)=总Amy-P-Amy。
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3 结果与讨论
结果见表1与表2。
表1 各脏器组织淀粉酶及其同工酶活性(±s) 脏 器
总Amy(U/g)
P-Amy(U/g)
S-Amy(U/g)
P-Amy/总Amy(%)
胰腺
(2.1±0.4)×106
(2.1±0.4)×106
0
, 百拇医药
100
腮腺
(6.6±0.6)×106
0
(6.6±0.6)×106
0
骨骼肌
(6.7±1.9)×10-2
0
(6.7±1.9)×10-2
0
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输卵管
(2.5±0.7)×102
0
(2.5±0.7)×102
0
子宫
(1.7±0.5)×102
0
(1.7±0.5)×102
0
睾丸
, http://www.100md.com (3.7±0.8)×103
(3.7±0.8)×103
0
100
空肠
(6.3±1.8)×102
(5.6±1.4)×102
(6.5±1.8)×10
89.7±3.2
回肠
(3.2±0.5)×102
, 百拇医药
(2.4±0.5)×102
(7.7±0.8)×10
76.0±5.6
胃
(8.3±1.5)×102
0
(8.3±1.5)×102
0
胆囊
(4.7±1.2)×102
(2.1±0.7)×102
, 百拇医药
(2.6±0.9)×102
42.5±8.6
肺
(2.7±0.9)×102
0
(2.7±0.9)×102
0
血清(U/ml)
0.086±0.020
0.027±0.065
0.059±0.018
, 百拇医药
33.0±6.9
表2 人组织相对于血清中淀粉酶的活性倍数 组 织
相对倍数
组 织
相对倍数
胰腺
2.5×107
腮腺
8.2×107
胃
9.6×103
空肠
, 百拇医药
7.3×103
胆囊
5.5×103
回肠
3.7×103
睾丸
4.3×104
输卵管
3.1×103
子宫
1.7×103
, http://www.100md.com
骨骼肌
0.78
肺
3.1×103
本文测定的11种脏器中，以腮腺、胰腺单位重量内所含淀粉酶活性最高，均达正常人血清中含量107倍以上。曾有人认为血清中淀粉酶几乎来源于这两种脏器，但实际上胃、胆囊、输卵管、子宫、脾、空肠、回肠的淀粉酶含量虽较胰腺、腮腺内的含量少10 000倍，但仍达正常人血清淀粉酶含量的1 000倍。因此，当这些脏器炎症、损伤时也会引起血清淀粉酶增高，但增高幅度应该与胰腺炎时有较大差别，腮腺、胰腺的炎症引起的血清淀粉酶活性增高要远远超过其它脏器的疾患。骨骼肌所含淀粉酶含量在正常人血清淀粉酶以下，临床未见骨骼肌损伤引起血清淀粉酶增高的报道。
不同脏器所含淀粉酶同工酶的类型不一，胰腺和睾丸是仅含有P-Amy的脏器，而空肠、回肠、胆囊均含有P-Amy和S-Amy，只是空肠、回肠以P-Amy为主，含量均占总淀粉酶70%以上，胆囊的S-Amy含量较P-Amy要高，其它如腮腺、肺、胃、输卵管、子宫、骨骼肌都只含有S-Amy。
, 百拇医药
由此可见，当不同组织患病时可反映在血清中总淀粉酶升高，但酶增高的水平会有所差别，同工酶类型可能不同。此外肠梗阻引起淀粉酶升高有可能因肠道阻塞，淀粉酶从肠道排出受阻反流入血，但胰型同工酶水平与胰腺炎时应会有所差别。
参考文献
1 于嘉屏，许绍辉，王爱华，等.唾液淀粉酶抑制物的提取.第二军医大学学报，1991，12:371
2 冯万祥，赵伯龙.生化技术.湖南：科学技术出版社，1989
3 于嘉屏，许绍辉，王爱华，等.自制选择性淀粉酶抑制物及在淀粉酶同工酶测定中的应用.上海医学检验杂志，1994，9：72
(1998-12-08收稿，1999-05-12修回), 百拇医药
单位：第二军医大学长征医院临床检验科，上海 200003
关键词：淀粉酶同工酶；人体组织；淀粉酶
临床检验杂志990408 除了胰腺、腮腺疾病外还有一些疾病如胆囊炎、小肠梗阻、消化道溃疡穿孔、异位妊娠、恶性肿瘤等也可出现血清淀粉酶活性增高，可能的原因之一就是这些患病组织含有淀粉酶，在炎症时通过各种途径入血引起血清淀粉酶活性增高。但至今国内外对于各种人体组织淀粉酶含量的研究报告甚少。我们收集了部分正常人体组织，经匀浆后测出匀浆上清液中的总淀粉酶(Amy)活性，并用抑制法测定唾液型和胰型淀粉酶同工酶(S-Amy和P-Amy)，从而为探讨临床上血清淀粉酶增高机制提供了实验依据。
1 材料
1.1 仪器 Beckman Clinical System 700型生化分析仪。高速台式离心机(上海医用分析仪器厂)。KD-300组织匀浆器(日本丰澄电源器株式会社)。
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1.2 试剂 淀粉酶活性测定采用上海长征公司淀粉酶试剂盒(PNPG4法)。淀粉酶抑制物，为小麦唾液淀粉酶抑制蛋白，由上海长征医院临床酶学研究室纯化和提供[1]。
1.3 材料和样品采集 意外死亡的正常人3名，2名男性分别为25岁、28岁，1名女性55岁，于死亡后6 h内采集样品，取胰腺、腮腺、胃、空肠、回肠、输卵管、子宫、肺、胆囊、骨骼肌和睾丸组织，各取20 g左右。
2 方法
2.1 组织匀浆液的制备 每种组织重复取样6次，每次取500 mg，先用生理盐水清洗，加入pH 7.4的0.01 mol/L Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液2 ml后置组织匀浆器中进行匀浆。匀浆器转速为15 000 r/min，时间为30 s×4次。将匀浆液3 000 r/min离心10 min。离心完毕后，吸取上清液进行总淀粉酶和淀粉酶同工酶测定。此步可使95%以上的细胞破碎并释放出淀粉酶[2]。
, 百拇医药
2.2 淀粉酶及其同工酶测定[3]。
2.2.1 测定参数 温度37°C，波长405 nm，延迟时间60 s，测定时间120 s，因数7000。
2.2.2 淀粉酶总活性测定 50 μl生理盐水加10 μl匀浆上清液加500 μl底物液，按上述测定参数测定，如果总淀粉酶活性>1 000 U/L，则用生理盐水稀释后再进行测定。
2.2.3 胰淀粉酶活性(P-Amy) 50 μl抑制剂加10 μl匀浆上清液，37°C温育10 min，再加入500 μl底物液，按上述参数测定，得剩余Amy活性(R-Amy)。结果计算及校正：总Amy(U/L)=7000×ΔA/min。R-Amy(U/L)=7000×抑制后ΔA/min(U/L)。由于该抑制剂对S-Amy的抑制率为97.5%，对P-Amy的交叉抑制率为20%，故P-Amy(U/L)=1.29R-Amy-0.0323×总Amy。S-Amy(U/L)=总Amy-P-Amy。
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3 结果与讨论
结果见表1与表2。
表1 各脏器组织淀粉酶及其同工酶活性(±s) 脏 器
总Amy(U/g)
P-Amy(U/g)
S-Amy(U/g)
P-Amy/总Amy(%)
胰腺
(2.1±0.4)×106
(2.1±0.4)×106
0
, 百拇医药
100
腮腺
(6.6±0.6)×106
0
(6.6±0.6)×106
0
骨骼肌
(6.7±1.9)×10-2
0
(6.7±1.9)×10-2
0
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输卵管
(2.5±0.7)×102
0
(2.5±0.7)×102
0
子宫
(1.7±0.5)×102
0
(1.7±0.5)×102
0
睾丸
, http://www.100md.com (3.7±0.8)×103
(3.7±0.8)×103
0
100
空肠
(6.3±1.8)×102
(5.6±1.4)×102
(6.5±1.8)×10
89.7±3.2
回肠
(3.2±0.5)×102
, 百拇医药
(2.4±0.5)×102
(7.7±0.8)×10
76.0±5.6
胃
(8.3±1.5)×102
0
(8.3±1.5)×102
0
胆囊
(4.7±1.2)×102
(2.1±0.7)×102
, 百拇医药
(2.6±0.9)×102
42.5±8.6
肺
(2.7±0.9)×102
0
(2.7±0.9)×102
0
血清(U/ml)
0.086±0.020
0.027±0.065
0.059±0.018
, 百拇医药
33.0±6.9
表2 人组织相对于血清中淀粉酶的活性倍数 组 织
相对倍数
组 织
相对倍数
胰腺
2.5×107
腮腺
8.2×107
胃
9.6×103
空肠
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7.3×103
胆囊
5.5×103
回肠
3.7×103
睾丸
4.3×104
输卵管
3.1×103
子宫
1.7×103
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骨骼肌
0.78
肺
3.1×103
本文测定的11种脏器中，以腮腺、胰腺单位重量内所含淀粉酶活性最高，均达正常人血清中含量107倍以上。曾有人认为血清中淀粉酶几乎来源于这两种脏器，但实际上胃、胆囊、输卵管、子宫、脾、空肠、回肠的淀粉酶含量虽较胰腺、腮腺内的含量少10 000倍，但仍达正常人血清淀粉酶含量的1 000倍。因此，当这些脏器炎症、损伤时也会引起血清淀粉酶增高，但增高幅度应该与胰腺炎时有较大差别，腮腺、胰腺的炎症引起的血清淀粉酶活性增高要远远超过其它脏器的疾患。骨骼肌所含淀粉酶含量在正常人血清淀粉酶以下，临床未见骨骼肌损伤引起血清淀粉酶增高的报道。
不同脏器所含淀粉酶同工酶的类型不一，胰腺和睾丸是仅含有P-Amy的脏器，而空肠、回肠、胆囊均含有P-Amy和S-Amy，只是空肠、回肠以P-Amy为主，含量均占总淀粉酶70%以上，胆囊的S-Amy含量较P-Amy要高，其它如腮腺、肺、胃、输卵管、子宫、骨骼肌都只含有S-Amy。
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由此可见，当不同组织患病时可反映在血清中总淀粉酶升高，但酶增高的水平会有所差别，同工酶类型可能不同。此外肠梗阻引起淀粉酶升高有可能因肠道阻塞，淀粉酶从肠道排出受阻反流入血，但胰型同工酶水平与胰腺炎时应会有所差别。
参考文献
1 于嘉屏，许绍辉，王爱华，等.唾液淀粉酶抑制物的提取.第二军医大学学报，1991，12:371
2 冯万祥，赵伯龙.生化技术.湖南：科学技术出版社，1989
3 于嘉屏，许绍辉，王爱华，等.自制选择性淀粉酶抑制物及在淀粉酶同工酶测定中的应用.上海医学检验杂志，1994，9：72
(1998-12-08收稿，1999-05-12修回), 百拇医药