高效液相色谱法测定强力宁注射液中甘氨酸的含量
作者：魏柳珍 苏玉永
单位：魏柳珍(湖北省药品检验所 武汉430064)；苏玉永(同济医科大学附属协和医院)
关键词：高效液相色谱法；强力宁注射液；甘氨酸
中国医院药学杂志990518 摘要 目的:对强力宁注射液中甘氨酸的含量测定方法研究。方法:采用高效液相色谱柱后衍生法，在以聚苯乙烯磺酸型强阳离子交换树脂为填充剂的色谱柱上，以枸橼酸钠缓冲液为流动相，流速0.5 ml.min-1，荧光检测器检测。以外标峰面积定量。结果:在进样20 μl，8～24 μg.ml-1范围内，甘氨酸峰面积与浓度呈良好的线性关系，r=0.999 9，平均回收率为100.6%，RSD0.8%(n=7)。结论:本法简便，结果可靠。
Determination of glycine in Qianglining injection by HPLC
, 百拇医药
Wei Liuzhen (Hubei Provincial Institute for Drug control,Wuhan 430064)
Su Yuyong (Union Hospital of Tongji Medical University)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish an HPLC method for the determination of glycine in Qianglining Injection. METHODS:Good resolution for seperation of glycine at strong cation exchange resin having salfonic acid radical column can be achieved with sodium citrate as mobile phase flow rate 0.5 ml.min-1 when the column and kit temperature is 55℃.RESULTS:The calibration curve was linear in the concentration range of 8～24 μg.ml-1 of glycine (r=0.999 9)，The mean recovery was 100.6%,RSD=0.8% (n=7) .CONCLUSIONS：The method is simple and accurate.
, 百拇医药
KEY WORDS HPLC,glycine,Qianglining Injection
强力宁注射液具有抗肝中毒、降低谷丙转氨酶、恢复肝细胞功能、防止脂肪性病变等作用。主要用于慢性迁延性肝炎，慢性活动性肝炎。各地方标准[1.3]均采用氨基氮测定法测定甘氨酸含量。本文参考有关文献[4]及要求，采用HPLC法测定其中的甘氨酸，现报道如下。
1 材料
1.1 仪器 岛津氨基酸分析仪，荧光检测器(激发波长370 nm，发射波长490 nm)FLD-1，微处理机C-RIB，程序洗脱装置SGR-1A，柱后衍生反应盒CRB-1B。
1.2 试剂与试药 邻苯二甲醛(OPA)、2-巯基乙醇为化学纯，其它试剂均为分析纯；甘氨酸对照品：含量99.8%(湖北省药检所样品)；强力宁注射液(武汉滨湖制药厂，批号970827，970828，970829)。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱(ISC-7/S1504)为装有聚苯乙烯磺酸型强阳离子交换树脂柱(150 mm×4.0 mm)；柱温：55℃，反应温度：55℃。流动相：枸橼酸钠缓冲液(pH6.0)(取枸橼酸钠58.8 g，加水1000 ml溶解后，用高氯酸调节pH至6.0)，流速0.5 ml.min-1。荧光试液：取邻苯二甲醛400 mg于500 ml干燥棕色瓶中，加无水乙醇7 ml，使完全溶解后，加硼酸缓冲液(pH10.5)至500 ml，再在通风柜内滴加2-巯基乙醇1 ml，摇匀，过滤即得。本液进入化学反应盒的流速为0.5 ml.min-1，贮存在冰箱中，可使用一周。
2.2 标准曲线测定 取经105℃干燥至恒重的甘氨酸对照品适量，精密称定，加水制成每1 ml中含8，12，16，20，24 μg 5个浓度的甘氨酸标准溶液。精密吸取各标准溶液20 μl注入氨基酸分析仪，记录色谱图，见图1。以甘氨酸峰面积为纵坐标，甘氨酸浓度(μg.ml-1)为横坐标作标准曲线，其回归方程为：
, 百拇医药
Y=870.875X+632.6 r=0.999 9
在8～24 μg.ml-1范围内线性关系良好。
图 1 色谱图 a.甘氨酸对照品 b.强力宁注射液样品 c.空白样品
2.3 回收率试验 按处方配制强力宁注射液，精密量取2 ml，置100 ml量瓶中，加水烯释至刻度，摇匀。精密量取2 ml，置50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密吸取20 μl注入氨基酸分析仪，以外标峰面积法计算，结果见表1。
表1 甘氨酸回收率试验 序 号
回收率/%
平均回收率/%
, http://www.100md.com RSD/%
1
100.6
2
99.9
3
100.0
100.6
0.8
4
99.9
5
100.3
, http://www.100md.com 6
101.6
7
101.6
2.4 样品的测定 取强力宁注射液3批，按回收率试验方法操作，测得结果与氨基氮测定法比较，结果见表2。强力宁注射液样品和空白样品的HPLC图谱见图1(b,c)。表2 HPLC法与氨基氮测定法样品测定结果比较 批 号
HPLC法(n=6)
氨基氮测定法(n=5)
含量/%
RSD/%
含量/%
, 百拇医药
RSD/%
970827
100.1
0.5
108.0
0.3
970828
103.3
0.8
108.0
0.8
970829
102.4
, 百拇医药
0.5
108.5
0.2
3 讨论
表2表明氨基氮测定法测定结果比HPLC法稍高，基于此，同时做了氨基氮测定法的回收率试验，测得平均回收率为105.5%，RSD为0.8%(n=5)。因强力宁注射液为复方制剂，除含甘氨酸外，还含有L-盐酸半胱氨酸的原因。由于本文采用的氨基酸分析仪对L-盐酸半胱氨酸检测灵敏度低，从图谱可以看出，本文建立的HPLC法测定甘氨酸含量不受强力宁注射液中其它成分的干扰，结果可靠。
HPLC法快速，主峰保留时间为3～4 min，简单，灵敏度高。
参考文献
1 湖北省卫生厅编.湖北省药品标准.1992：596
2 江苏省药品标准(87)第75号
3 浙江省卫生厅编.浙江省药品标准.1993：659
4 周有元.用高效液相色谱柱后衍生法对各种氨基酸制剂测试条件的研究.药物分析杂志，1987，7(5)：267
(1998年5月4日收稿), http://www.100md.com
单位：魏柳珍(湖北省药品检验所 武汉430064)；苏玉永(同济医科大学附属协和医院)
关键词：高效液相色谱法；强力宁注射液；甘氨酸
中国医院药学杂志990518 摘要 目的:对强力宁注射液中甘氨酸的含量测定方法研究。方法:采用高效液相色谱柱后衍生法，在以聚苯乙烯磺酸型强阳离子交换树脂为填充剂的色谱柱上，以枸橼酸钠缓冲液为流动相，流速0.5 ml.min-1，荧光检测器检测。以外标峰面积定量。结果:在进样20 μl，8～24 μg.ml-1范围内，甘氨酸峰面积与浓度呈良好的线性关系，r=0.999 9，平均回收率为100.6%，RSD0.8%(n=7)。结论:本法简便，结果可靠。
Determination of glycine in Qianglining injection by HPLC
, 百拇医药
Wei Liuzhen (Hubei Provincial Institute for Drug control,Wuhan 430064)
Su Yuyong (Union Hospital of Tongji Medical University)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish an HPLC method for the determination of glycine in Qianglining Injection. METHODS:Good resolution for seperation of glycine at strong cation exchange resin having salfonic acid radical column can be achieved with sodium citrate as mobile phase flow rate 0.5 ml.min-1 when the column and kit temperature is 55℃.RESULTS:The calibration curve was linear in the concentration range of 8～24 μg.ml-1 of glycine (r=0.999 9)，The mean recovery was 100.6%,RSD=0.8% (n=7) .CONCLUSIONS：The method is simple and accurate.
, 百拇医药
KEY WORDS HPLC,glycine,Qianglining Injection
强力宁注射液具有抗肝中毒、降低谷丙转氨酶、恢复肝细胞功能、防止脂肪性病变等作用。主要用于慢性迁延性肝炎，慢性活动性肝炎。各地方标准[1.3]均采用氨基氮测定法测定甘氨酸含量。本文参考有关文献[4]及要求，采用HPLC法测定其中的甘氨酸，现报道如下。
1 材料
1.1 仪器 岛津氨基酸分析仪，荧光检测器(激发波长370 nm，发射波长490 nm)FLD-1，微处理机C-RIB，程序洗脱装置SGR-1A，柱后衍生反应盒CRB-1B。
1.2 试剂与试药 邻苯二甲醛(OPA)、2-巯基乙醇为化学纯，其它试剂均为分析纯；甘氨酸对照品：含量99.8%(湖北省药检所样品)；强力宁注射液(武汉滨湖制药厂，批号970827，970828，970829)。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱(ISC-7/S1504)为装有聚苯乙烯磺酸型强阳离子交换树脂柱(150 mm×4.0 mm)；柱温：55℃，反应温度：55℃。流动相：枸橼酸钠缓冲液(pH6.0)(取枸橼酸钠58.8 g，加水1000 ml溶解后，用高氯酸调节pH至6.0)，流速0.5 ml.min-1。荧光试液：取邻苯二甲醛400 mg于500 ml干燥棕色瓶中，加无水乙醇7 ml，使完全溶解后，加硼酸缓冲液(pH10.5)至500 ml，再在通风柜内滴加2-巯基乙醇1 ml，摇匀，过滤即得。本液进入化学反应盒的流速为0.5 ml.min-1，贮存在冰箱中，可使用一周。
2.2 标准曲线测定 取经105℃干燥至恒重的甘氨酸对照品适量，精密称定，加水制成每1 ml中含8，12，16，20，24 μg 5个浓度的甘氨酸标准溶液。精密吸取各标准溶液20 μl注入氨基酸分析仪，记录色谱图，见图1。以甘氨酸峰面积为纵坐标，甘氨酸浓度(μg.ml-1)为横坐标作标准曲线，其回归方程为：
, 百拇医药
Y=870.875X+632.6 r=0.999 9
在8～24 μg.ml-1范围内线性关系良好。
图 1 色谱图 a.甘氨酸对照品 b.强力宁注射液样品 c.空白样品
2.3 回收率试验 按处方配制强力宁注射液，精密量取2 ml，置100 ml量瓶中，加水烯释至刻度，摇匀。精密量取2 ml，置50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密吸取20 μl注入氨基酸分析仪，以外标峰面积法计算，结果见表1。
表1 甘氨酸回收率试验 序 号
回收率/%
平均回收率/%
, http://www.100md.com RSD/%
1
100.6
2
99.9
3
100.0
100.6
0.8
4
99.9
5
100.3
, http://www.100md.com 6
101.6
7
101.6
2.4 样品的测定 取强力宁注射液3批，按回收率试验方法操作，测得结果与氨基氮测定法比较，结果见表2。强力宁注射液样品和空白样品的HPLC图谱见图1(b,c)。表2 HPLC法与氨基氮测定法样品测定结果比较 批 号
HPLC法(n=6)
氨基氮测定法(n=5)
含量/%
RSD/%
含量/%
, 百拇医药
RSD/%
970827
100.1
0.5
108.0
0.3
970828
103.3
0.8
108.0
0.8
970829
102.4
, 百拇医药
0.5
108.5
0.2
3 讨论
表2表明氨基氮测定法测定结果比HPLC法稍高，基于此，同时做了氨基氮测定法的回收率试验，测得平均回收率为105.5%，RSD为0.8%(n=5)。因强力宁注射液为复方制剂，除含甘氨酸外，还含有L-盐酸半胱氨酸的原因。由于本文采用的氨基酸分析仪对L-盐酸半胱氨酸检测灵敏度低，从图谱可以看出，本文建立的HPLC法测定甘氨酸含量不受强力宁注射液中其它成分的干扰，结果可靠。
HPLC法快速，主峰保留时间为3～4 min，简单，灵敏度高。
参考文献
1 湖北省卫生厅编.湖北省药品标准.1992：596
2 江苏省药品标准(87)第75号
3 浙江省卫生厅编.浙江省药品标准.1993：659
4 周有元.用高效液相色谱柱后衍生法对各种氨基酸制剂测试条件的研究.药物分析杂志，1987，7(5)：267
(1998年5月4日收稿), http://www.100md.com