双波长分光光度法测定替硝唑环丙沙星注射液含量
作者：周燕萍 郭吉荣 蒋均德 杨大勇
单位：武警四川总队乐山医院 乐山614000
关键词：双波长分光光度法；替硝唑；环丙沙星注射液
中国医院药学杂志990514 摘要 目的:应用双波长分光光度法测定替硝唑、环丙沙星注射液含量。方法:以pH4.5的醋酸盐缓冲液为溶剂，在波长317，297.6，277，354.2 nm处进行测定。。结果:替硝唑浓度在4～20 μg.ml-1之间，环丙沙星浓度在2～10 μg.ml-1之间符合比尔定律，浓度与吸收度差值呈良好的线性关系。替硝唑平均回收率为100.8%，RSD为1.0%(n=9)，环丙沙星平均回收率为98.8%，RSD为0.8%(n=9)。结论:该方法简便、快速、准确可靠。
Determination of tinidazole and ciprofloxacin injection by dual wavelength spectrophotometry
, 百拇医药
Zhou Yanping,Guo Jirong,Jiang Junde,et al (Pharmacy Department,Sichuan Provincial Corps Leshan Hospital,Chinese People's Armed Police Forces,Leshan 614000)
ABSTRACT OBJECTIVE:The tinidazole and ciprofloxacin injection content was determined by dual wavelength spectrophotometry.METHODS:It was determined by using acetate buffer (pH4.5) as the solvent at the wavelength of 317 nm，297.6 nm,277 nm,and 354.2 nm.RESULTS:The results showed that both the standard curve of tinidazole concentration ranging from 4 to 20 μg.ml-1 and ciprofloxacin concentration ranging from 2 to 10 μg.ml-1 was in correspondence with Beer's law.The absorptivity difference and the concentration showed a good linear relationship.The mean recovery of tinidazole was 100.8% with RSD 1.0% (n=9),while the ciprofloxacin was 98.8% with RSD 0.8% (n=9).CONCLUSIONS:This method is simple,quick and accurate.
, 百拇医药
KEY WORDS dual wavelength spectrophotometry,tinidazole,ciprofloxacin injection
替硝唑(TNZ)是继甲硝唑之后研制成的疗效更高，疗程更短，耐受性更好的抗厌氧菌药物，环丙沙星(CPFX)是第三代喹诺酮类药物，具有广谱的抗菌活性，两药合用，不仅增大了抗菌谱，且提高了疗效，两药的单方制剂的含量测定，文献报道有非水法、UV法、比色法、HPLC法[1.2]，关于两药的复方制剂的含量测定，少有文献报道。本文以双波长分光光度法，测定替硝唑环丙沙星注射液中替硝唑、环丙沙星的含量，可基本满足制剂质量控制要求。
1 仪器与试药
UV-240紫外分光光度计(日本岛津)；pHS-4电脑型精密酸度计(成都化工微机所)；替硝唑对照品(乐山三民药物研究所，批号970905)；环丙沙星对照品(乐山三民药物研究所，批号970711)；替硝唑环丙沙星注射液[我院自行研制，规格：替硝唑0.4 g.(100ml)-1，环丙沙星0.2 g.(100ml)-1]；冰醋酸、醋酸钠均为分析纯。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 测定波长的选择 精密称取替硝唑、环丙沙星对照品适量，以pH4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液为溶剂，分别配成浓度为10，5μg.ml-1的溶液，以醋酸-醋酸钠缓冲液为空白，在波长240～380 nm之间扫描，替硝唑在317 nm波长处有最大吸收，环丙沙星的等吸收波长为297.6 nm，环丙沙星在277 nm波长处有最大吸收，替硝唑的等吸收波长为354.2 nm，而附加剂在这几个波长处不干扰测定，见图1。
图 1 替硝唑、环丙沙星及附加剂的紫外吸收光谱图
——环丙沙星 ……替硝唑 —.—附加剂
2.2 工作曲线的绘制 精密称取替硝唑对照品50 mg，环丙沙星对照品25 mg，以pH4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液配成浓度为1，0.5 mg.ml-1的溶液。分别精密量取替硝唑、环丙沙星对照液1，0.8，0.6，0.4，0.2 ml置50 ml量瓶中，以醋酸盐缓冲液(pH4.5)稀释至刻度，摇匀，以醋酸盐缓冲液为空白，于波长317，297.6，277，354.2 nm处测定吸收度，令ΔA1=ΔA317-ΔA297.6，ΔA2=ΔA277-A354.2，以浓度为横坐标，ΔA为纵坐标，计算回归方程和相关系数。替硝唑浓度在4～20 μg.ml-1范围内的回归方程为：
, http://www.100md.com
ΔA1=0.010 91C-0.001 2,r=0.999 9 (1)
环丙沙星浓度在2～10 μg.ml-1范围内的回归方程为：
ΔA2=0.117 6C-0.017 6,r=0.999 9 (2)
2.3 回收率实验 精密称取 105℃干燥至恒重的替硝唑、环丙沙星对照品适量，按处方量加入附加剂，模拟配成供试品。精密量取模拟品适量，用醋酸盐缓冲液配成不同浓度，测定吸收度A，计算差值ΔA，分别代入回归方程(1)、(2)，结果见表1。
表1 回收率试验结果 加入
量
μg.ml-1
, 百拇医药
TNZ
测得
量
μg.ml-1
回收
率
%
RSD
%
加入
量
μg.ml-1
, 百拇医药
CPFX
测得
量
μg.ml-1
回收
率
%
RSD
%
5.760
5.754
99.9
2.649
, 百拇医药
98.3
5.778
100.3
2.694
2.640
98.0
5.711
99.5
2.641
98.0
11.52
11.74
101.9
, 百拇医药
5.278
98.0
11.74
101.9
1.0
5.388
5.312
98.6
0.8
11.48
99.7
5.338
99.1
, 百拇医药
17.28
17.62
102.0
8.051
99.6
17.53
101.5
8.082
8.088
100.1
17.64
101.1
8.040
, 百拇医药
99.5
注：TNZ平均回收率为100.8%，CPFX平均回收率为98.8%。
2.4 样品的测定 精密量取样品0.25 ml，置100 ml量瓶中，以醋酸盐缓冲液(pH4.5)稀释至刻度，摇匀，照回收率项下方法测定，计算含量。结果见表2。
表2 样品测定结果(n=3) 批
号
TNZ
含量
mg.ml-1
TNZ
标示
, http://www.100md.com
量
%
%
RSD
%
CPFX
含量
mg.ml-1
CPFX
标示
量
%
%
, http://www.100md.com
RSD
%
4.057
101.4
1.951
97.5
1
4.063
101.6
100.8
1.0
1.943
97.1
, 百拇医药
96.9
0.6
3.998
99.4
1.922
96.1
4.052
100.1
1.926
96.3
2
3.971
99.3
, 百拇医药
99.4
0.5
1.932
96.6
96.2
0.4
3.955
98.9
1.912
95.6
4.128
103.2
1.969
, http://www.100md.com
98.5
3
4.099
102.5
102.2
1.0
1.995
99.8
98.8
0.7
4.033
100.8
1.962
, http://www.100md.com
98.1
注：1为批号9701114，2为批号980208，3为批号80327
2.5 稳定性试验 精密称取替硝唑、环丙沙星对照品适量，加醋酸盐缓冲液稀释至测定浓度，室温放置0，2，4，8，12 h，测定吸收度，所配溶液在12 h内吸收度几乎无变化见表3。
表3 稳定性试验结果 放置时间
h
吸收度A
317nm
297.6nm
277nm
354.2nm
, 百拇医药
0
0.618
0.491
0.791
0.188
2
0.618
0.491
0.791
0.188
4
0.618
0.490
, 百拇医药
0.790
0.187
8
0.617
0.489
0.789
0.187
12
0.616
0.489
0.789
0.186
3 讨论
, 百拇医药
3.1 溶剂的选择 溶剂的选择是本法含量测定的难点，实验中，我们筛选了pH3.6，pH4.5，pH5.8等多种缓冲液，及不同浓度的氢氧化钠、盐酸溶液，最终确定以pH4.5的醋酸盐缓冲液为溶剂，既避免了两药的吸收峰重叠，又能使替硝唑的吸收产生红移，且能满足两药的稳定性要求。
3.2 等吸点的寻找 在波长290～330 nm之间，环丙沙星的峰形变化较缓慢，因此，找等吸点时，应以0.2 nm为单位，保证测定结果的准确。
参考文献
1 刘瑞玲，徐景仁，刘 皋等.盐酸环丙沙星含量测定方法的研究，药物分析杂志，1994，14(1)：45
2 许明旺，陈 斌，余文光等.高效液相色谱法测定替硝唑片的含量.中国医院药学杂志，1996，16(10)：455
(1998年6月1日收稿), 百拇医药
单位：武警四川总队乐山医院 乐山614000
关键词：双波长分光光度法；替硝唑；环丙沙星注射液
中国医院药学杂志990514 摘要 目的:应用双波长分光光度法测定替硝唑、环丙沙星注射液含量。方法:以pH4.5的醋酸盐缓冲液为溶剂，在波长317，297.6，277，354.2 nm处进行测定。。结果:替硝唑浓度在4～20 μg.ml-1之间，环丙沙星浓度在2～10 μg.ml-1之间符合比尔定律，浓度与吸收度差值呈良好的线性关系。替硝唑平均回收率为100.8%，RSD为1.0%(n=9)，环丙沙星平均回收率为98.8%，RSD为0.8%(n=9)。结论:该方法简便、快速、准确可靠。
Determination of tinidazole and ciprofloxacin injection by dual wavelength spectrophotometry
, 百拇医药
Zhou Yanping,Guo Jirong,Jiang Junde,et al (Pharmacy Department,Sichuan Provincial Corps Leshan Hospital,Chinese People's Armed Police Forces,Leshan 614000)
ABSTRACT OBJECTIVE:The tinidazole and ciprofloxacin injection content was determined by dual wavelength spectrophotometry.METHODS:It was determined by using acetate buffer (pH4.5) as the solvent at the wavelength of 317 nm，297.6 nm,277 nm,and 354.2 nm.RESULTS:The results showed that both the standard curve of tinidazole concentration ranging from 4 to 20 μg.ml-1 and ciprofloxacin concentration ranging from 2 to 10 μg.ml-1 was in correspondence with Beer's law.The absorptivity difference and the concentration showed a good linear relationship.The mean recovery of tinidazole was 100.8% with RSD 1.0% (n=9),while the ciprofloxacin was 98.8% with RSD 0.8% (n=9).CONCLUSIONS:This method is simple,quick and accurate.
, 百拇医药
KEY WORDS dual wavelength spectrophotometry,tinidazole,ciprofloxacin injection
替硝唑(TNZ)是继甲硝唑之后研制成的疗效更高，疗程更短，耐受性更好的抗厌氧菌药物，环丙沙星(CPFX)是第三代喹诺酮类药物，具有广谱的抗菌活性，两药合用，不仅增大了抗菌谱，且提高了疗效，两药的单方制剂的含量测定，文献报道有非水法、UV法、比色法、HPLC法[1.2]，关于两药的复方制剂的含量测定，少有文献报道。本文以双波长分光光度法，测定替硝唑环丙沙星注射液中替硝唑、环丙沙星的含量，可基本满足制剂质量控制要求。
1 仪器与试药
UV-240紫外分光光度计(日本岛津)；pHS-4电脑型精密酸度计(成都化工微机所)；替硝唑对照品(乐山三民药物研究所，批号970905)；环丙沙星对照品(乐山三民药物研究所，批号970711)；替硝唑环丙沙星注射液[我院自行研制，规格：替硝唑0.4 g.(100ml)-1，环丙沙星0.2 g.(100ml)-1]；冰醋酸、醋酸钠均为分析纯。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 测定波长的选择 精密称取替硝唑、环丙沙星对照品适量，以pH4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液为溶剂，分别配成浓度为10，5μg.ml-1的溶液，以醋酸-醋酸钠缓冲液为空白，在波长240～380 nm之间扫描，替硝唑在317 nm波长处有最大吸收，环丙沙星的等吸收波长为297.6 nm，环丙沙星在277 nm波长处有最大吸收，替硝唑的等吸收波长为354.2 nm，而附加剂在这几个波长处不干扰测定，见图1。
图 1 替硝唑、环丙沙星及附加剂的紫外吸收光谱图
——环丙沙星 ……替硝唑 —.—附加剂
2.2 工作曲线的绘制 精密称取替硝唑对照品50 mg，环丙沙星对照品25 mg，以pH4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液配成浓度为1，0.5 mg.ml-1的溶液。分别精密量取替硝唑、环丙沙星对照液1，0.8，0.6，0.4，0.2 ml置50 ml量瓶中，以醋酸盐缓冲液(pH4.5)稀释至刻度，摇匀，以醋酸盐缓冲液为空白，于波长317，297.6，277，354.2 nm处测定吸收度，令ΔA1=ΔA317-ΔA297.6，ΔA2=ΔA277-A354.2，以浓度为横坐标，ΔA为纵坐标，计算回归方程和相关系数。替硝唑浓度在4～20 μg.ml-1范围内的回归方程为：
, http://www.100md.com
ΔA1=0.010 91C-0.001 2,r=0.999 9 (1)
环丙沙星浓度在2～10 μg.ml-1范围内的回归方程为：
ΔA2=0.117 6C-0.017 6,r=0.999 9 (2)
2.3 回收率实验 精密称取 105℃干燥至恒重的替硝唑、环丙沙星对照品适量，按处方量加入附加剂，模拟配成供试品。精密量取模拟品适量，用醋酸盐缓冲液配成不同浓度，测定吸收度A，计算差值ΔA，分别代入回归方程(1)、(2)，结果见表1。
表1 回收率试验结果 加入
量
μg.ml-1
, 百拇医药
TNZ
测得
量
μg.ml-1
回收
率
%
RSD
%
加入
量
μg.ml-1
, 百拇医药
CPFX
测得
量
μg.ml-1
回收
率
%
RSD
%
5.760
5.754
99.9
2.649
, 百拇医药
98.3
5.778
100.3
2.694
2.640
98.0
5.711
99.5
2.641
98.0
11.52
11.74
101.9
, 百拇医药
5.278
98.0
11.74
101.9
1.0
5.388
5.312
98.6
0.8
11.48
99.7
5.338
99.1
, 百拇医药
17.28
17.62
102.0
8.051
99.6
17.53
101.5
8.082
8.088
100.1
17.64
101.1
8.040
, 百拇医药
99.5
注：TNZ平均回收率为100.8%，CPFX平均回收率为98.8%。
2.4 样品的测定 精密量取样品0.25 ml，置100 ml量瓶中，以醋酸盐缓冲液(pH4.5)稀释至刻度，摇匀，照回收率项下方法测定，计算含量。结果见表2。
表2 样品测定结果(n=3) 批
号
TNZ
含量
mg.ml-1
TNZ
标示
, http://www.100md.com
量
%
%
RSD
%
CPFX
含量
mg.ml-1
CPFX
标示
量
%
%
, http://www.100md.com
RSD
%
4.057
101.4
1.951
97.5
1
4.063
101.6
100.8
1.0
1.943
97.1
, 百拇医药
96.9
0.6
3.998
99.4
1.922
96.1
4.052
100.1
1.926
96.3
2
3.971
99.3
, 百拇医药
99.4
0.5
1.932
96.6
96.2
0.4
3.955
98.9
1.912
95.6
4.128
103.2
1.969
, http://www.100md.com
98.5
3
4.099
102.5
102.2
1.0
1.995
99.8
98.8
0.7
4.033
100.8
1.962
, http://www.100md.com
98.1
注：1为批号9701114，2为批号980208，3为批号80327
2.5 稳定性试验 精密称取替硝唑、环丙沙星对照品适量，加醋酸盐缓冲液稀释至测定浓度，室温放置0，2，4，8，12 h，测定吸收度，所配溶液在12 h内吸收度几乎无变化见表3。
表3 稳定性试验结果 放置时间
h
吸收度A
317nm
297.6nm
277nm
354.2nm
, 百拇医药
0
0.618
0.491
0.791
0.188
2
0.618
0.491
0.791
0.188
4
0.618
0.490
, 百拇医药
0.790
0.187
8
0.617
0.489
0.789
0.187
12
0.616
0.489
0.789
0.186
3 讨论
, 百拇医药
3.1 溶剂的选择 溶剂的选择是本法含量测定的难点，实验中，我们筛选了pH3.6，pH4.5，pH5.8等多种缓冲液，及不同浓度的氢氧化钠、盐酸溶液，最终确定以pH4.5的醋酸盐缓冲液为溶剂，既避免了两药的吸收峰重叠，又能使替硝唑的吸收产生红移，且能满足两药的稳定性要求。
3.2 等吸点的寻找 在波长290～330 nm之间，环丙沙星的峰形变化较缓慢，因此，找等吸点时，应以0.2 nm为单位，保证测定结果的准确。
参考文献
1 刘瑞玲，徐景仁，刘 皋等.盐酸环丙沙星含量测定方法的研究，药物分析杂志，1994，14(1)：45
2 许明旺，陈 斌，余文光等.高效液相色谱法测定替硝唑片的含量.中国医院药学杂志，1996，16(10)：455
(1998年6月1日收稿), 百拇医药