即用型S-P法在肾穿标本免疫组化染色中的应用
作者：秦 王景
单位：宁夏医学院附属医院病理科 750004
关键词：
宁夏医学院学报990535 肾穿组织的免疫组化染色以往我们一直采用直接荧光法。链菌素亲生物素-过氧化酶连接法(即S-P法)是近年来推广应用的一种新的方法。我们经过2年多的免疫组化切片的应用，效果满意，现介绍如下。
1 材料和方法
1.1 材料和试剂 我院送来肾新鲜组织110例，95%乙醇固定，人工脱水包埋，切片厚度3～4μm。试剂均为即用型，用时无需稀释，直接滴在切片上即可。一抗为即用型兔抗人IgA、IgG、IgM、C3c；0.125%胰酶是由胰蛋白酶和胰酶缓冲液以1∶3(滴)的比例在用前配制混匀；即用型生物素化第二抗体；即用型链菌素亲生物蛋白-过氧化物酶溶液；AEC显色液；即用型苏木素溶液；即用型AEC封片剂。
1.2 操作步骤
1.2.1 切片准备 载玻片经肥皂液浸泡过夜，自来水冲洗，95%乙醇浸泡过夜，自来水冲洗，蒸馏水洗、风干，在玻片上一端滴加一滴即用型防脱片胶，用另一玻片将胶液均匀推抹在载玻片上，风干后待用。
1.2.2 染色步骤 ①石蜡切片经脱蜡水洗后浸入3%过氧化氢5min，PBS液洗3×2min;②滴加新配的0.125%胰酶，37℃湿盒内孵育1h，PBS液洗3×2min；③各切片分别滴加第一抗体(IgA、IgG、IgM、C3c)室温孵育60min，PBS液洗3×2min;④切片加即用型生物素化第二抗体室温10min，PBS液洗3×2min;⑤切片加即用型链菌素亲生物蛋白-过氧化物酶溶液室温10min，PBS液洗3×2min;⑥滴加新配制的AEC显色液，室温下放置1～5min，水洗数次；⑦滴加即用型苏木素溶液复染5～10min，水洗数次，湿片用即用型AEC封片剂封固。
2 讨论
以往我们采用直接荧光法其缺点在于：①在观察过程中，荧光强度不断减弱，对结果的判定影响很大；②切片无法保存；③无法进行回顾性分析；④必须用荧光显微镜观察。即用型S-P法避免了直接荧光法的缺点，具有染色时间短、灵敏度高、特异性强、背景更清晰等优点，且操作简便，省去了抗体的配制、稀释、效价等步骤。在一般医院均可采用本方法开展病理检查，较为实用，值得推广。
另外，经过二年来的实践，我们认为有以下几点值得注意。①切片厚度不得超过4μm，石蜡切片在2～3μm时，可清晰地鉴别其阳性产物是以颗粒状、团块状或线状沉积在毛细血管壁还是在系膜区，从而准确判断其病理意义。切片过厚，使染色背景过深，容易造成假阳性。②采用含酒精的苏木素溶液套染，会使阳性显色消退。③AEC显色液应现用现配，避光滴加显色。
1998-12-10收稿，路锦绣编辑, http://www.100md.com
单位：宁夏医学院附属医院病理科 750004
关键词：
宁夏医学院学报990535 肾穿组织的免疫组化染色以往我们一直采用直接荧光法。链菌素亲生物素-过氧化酶连接法(即S-P法)是近年来推广应用的一种新的方法。我们经过2年多的免疫组化切片的应用，效果满意，现介绍如下。
1 材料和方法
1.1 材料和试剂 我院送来肾新鲜组织110例，95%乙醇固定，人工脱水包埋，切片厚度3～4μm。试剂均为即用型，用时无需稀释，直接滴在切片上即可。一抗为即用型兔抗人IgA、IgG、IgM、C3c；0.125%胰酶是由胰蛋白酶和胰酶缓冲液以1∶3(滴)的比例在用前配制混匀；即用型生物素化第二抗体；即用型链菌素亲生物蛋白-过氧化物酶溶液；AEC显色液；即用型苏木素溶液；即用型AEC封片剂。
1.2 操作步骤
1.2.1 切片准备 载玻片经肥皂液浸泡过夜，自来水冲洗，95%乙醇浸泡过夜，自来水冲洗，蒸馏水洗、风干，在玻片上一端滴加一滴即用型防脱片胶，用另一玻片将胶液均匀推抹在载玻片上，风干后待用。
1.2.2 染色步骤 ①石蜡切片经脱蜡水洗后浸入3%过氧化氢5min，PBS液洗3×2min;②滴加新配的0.125%胰酶，37℃湿盒内孵育1h，PBS液洗3×2min；③各切片分别滴加第一抗体(IgA、IgG、IgM、C3c)室温孵育60min，PBS液洗3×2min;④切片加即用型生物素化第二抗体室温10min，PBS液洗3×2min;⑤切片加即用型链菌素亲生物蛋白-过氧化物酶溶液室温10min，PBS液洗3×2min;⑥滴加新配制的AEC显色液，室温下放置1～5min，水洗数次；⑦滴加即用型苏木素溶液复染5～10min，水洗数次，湿片用即用型AEC封片剂封固。
2 讨论
以往我们采用直接荧光法其缺点在于：①在观察过程中，荧光强度不断减弱，对结果的判定影响很大；②切片无法保存；③无法进行回顾性分析；④必须用荧光显微镜观察。即用型S-P法避免了直接荧光法的缺点，具有染色时间短、灵敏度高、特异性强、背景更清晰等优点，且操作简便，省去了抗体的配制、稀释、效价等步骤。在一般医院均可采用本方法开展病理检查，较为实用，值得推广。
另外，经过二年来的实践，我们认为有以下几点值得注意。①切片厚度不得超过4μm，石蜡切片在2～3μm时，可清晰地鉴别其阳性产物是以颗粒状、团块状或线状沉积在毛细血管壁还是在系膜区，从而准确判断其病理意义。切片过厚，使染色背景过深，容易造成假阳性。②采用含酒精的苏木素溶液套染，会使阳性显色消退。③AEC显色液应现用现配，避光滴加显色。
1998-12-10收稿，路锦绣编辑, http://www.100md.com