RP-HPLC测定天乐口服液中橙皮苷的含量
作者：詹世琴 李开敏 周绍芬*
单位：重庆市药品检验所 重庆 400015
关键词：天乐口服液；橙皮苷；RP-HPLC
华西药学杂志990535 提要 采用RP-HPLC测定天乐口服液中橙皮苷的含量，以μ-Bondapak C18柱(10 μm，4.6 mm×250 mm)为固定相，2%甲醇的乙腈溶液-0.1% 磷酸和0.1%三乙胺的水溶液(20∶80)为流动相进行测定，紫外检测波长284 nm，平均回收率为99.95%，RSD=0.93%(n=6)。
QUANTITATIVE DETERMINATION OF HESPERIDIN IN
TIANLE ORAL LIQUID BY RP-HPLC
, http://www.100md.com
Zhan Shiqin Li Kaimin Zhou Shaofen
(Chongqing Institute for Drug Control Chongqing 410015)
ABSTRACT The content of hesperidin in Tianle oral liquid was determined by RP-HPLC. Hesperidin was separated by μ-Bondapack C18 colunm(10 μm, 4.6 mm×250 mm).The mobile phase consisted of 2% methanol acetonitrile-0.1% phosphoric acid and 0.1% triethylamine aqueous solution(20∶80). The detection was at 284 nm. The average recovery was 9.95%, RSD=0.93%(n=6).
, http://www.100md.com
Key Words Tianle oral liquid Hesperidin RP-HPLC
天乐口服液是由太子参、白术、陈皮等10味药材制成的复方制剂，具健脾开胃，消食导滞之功效，用于小儿脾胃虚弱、厌食等症。实验采用RP-HPLC测定天乐口服液中橙皮苷含量，操作简便，被测组分分离完全，测定结果准确、可靠。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
日本岛津LC-10AD高效液相色谱仪，SPD-10A紫外可见检测器，C-R3A数据处理机；岛津UV-260型可见紫外分光光度计；TGL-16B高速台式离心机。橙皮苷对照品(自制，含量99.52%)；乙腈(色谱纯，上海生化化工助剂厂)；其余化学试剂均为分析纯。
1.2 检测波长的选择
, http://www.100md.com
取橙皮苷对照品，用所选流动相作溶剂，制成适宜浓度，在200～400 nm波长范围内测定吸收光谱，橙皮苷在流动相中的最大吸收波长为284 nm。
1.3 色谱条件
经多次试验，选择μ-Bondapak C18柱(10μm,4.6 mm×250 mm，大连物化所)；以2%甲醇的乙腈溶液-0.1%磷酸和0.1%三乙胺的水溶液(20∶80)为流动相；流速1.2 ml/min；柱温40℃；检测波长284 nm。
在上述条件下由橙皮苷对照品，缺陈皮供试品(空白)、及天乐口服液供试品的色谱图(图1)可见，被测成分分离完全，供试品中共存组分不干扰橙皮苷的测定。
Fig 1 HPLC chromatogram of Tianle oral liquid
, http://www.100md.com
A Hesperidin B Blank C Tianle oral liquid
1.4 标准曲线测定
1.4.1 对照品溶液的配制 取橙皮苷对照品约10 mg，精密称定，置200 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用甲醇稀释成每1 ml中含6、12、18、24、30 μg橙皮苷对照品的溶液，经高速离心后即为对照品溶液。
1.4.2 标准曲线的测定 取不同浓度的对照品溶液，进样20 μl，记录色谱图。以峰面积与浓度绘制标准曲线，其回归方程为：
y=1897.9+38397.6x r=0.9999(n=6)。
结果表明，橙皮苷在6～30 μg/ml浓度范围内与峰面积有良好的线性关系。
, 百拇医药
1.5 回收率试验
分别取已测定含量的供试品6份，各加入一定量的橙皮苷标准溶液，按上述供试品的测定方法测定，计算加样回收率，结果见表1。
1.6 精密度考察
取橙皮苷对照品溶液20 μl，照上述色谱条件，按每次测定的峰面积值计算，测定结果为218090、217454、218173、219925、220323，平均峰面积值为218793，RSD=0.57%(n=5)。
Table 1 Results of recovery No.
Amount
Recovery
(%)
, 百拇医药
(%)
RSD
(%)
sample
(μg)
added
(μg)
found
(μg)
1
9.774
9.54
19.345
, 百拇医药
100.32
2
9.774
9.54
19.220
99.01
3
9.774
11.448
21.177
99.61
99.95
0.93
, http://www.100md.com
4
9.774
11.448
21.093
98.87
5
9.774
13.356
23.279
101.12
6
9.774
13.356
, 百拇医药
23.234
100.78
1.7 含量测定
1.7.1 供试品溶液的制备 精密量取供试品溶液1 ml，置50 ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，经高速离心即为供试品溶液。
1.7.2 分离测定 取供试品溶液，进样20 μl，在上述条件下测定，记录色谱图和橙皮苷峰面积，按回归方程或随行标准计算供试品中橙皮苷含量，结果见表2。Table 2 Determination results of samples Batch
No.
Amount of Hesperidin
(mg/100 ml)
, http://www.100md.com
RSD
(%)
1
54.60
54.45
54.19
54.08
54.33
0.44
2
50.35
51.07
51.15
, 百拇医药
51.25
50.96
0.80
3
48.77
49.25
48.86
48.61
48.87
0.56
4
48.74
48.28
, 百拇医药
49.24
49.24
48.87
0.56
5
54.54
54.67
54.15
54.15
54.33
0.61
2 小结
以上试验对检测条件、回收率及供试品的稀释液等进行了探索。用RP-HPLC测定天乐口服液中橙皮苷含量，操作简便，供试品中共存组分不干扰测定，结果准确可靠，可作为该制剂中橙皮苷的质量控制方法。
* 重庆天乐制药有限公司
参考文献
1 王宝 .中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994.399
2 欧阳强，邱黎和，周郗竹.高效液相色谱法测定枳实、枳术丸中橙皮苷的含量.中成药，1996，18(7)∶9
3 崔铉玫，迟彦春，金银河.HPLC测定芎芷香苏散流浸膏中橙皮苷的含量.药物分析杂志，1996，16(5)∶321, http://www.100md.com(作者：詹世琴 李开敏 周绍芬*)
单位：重庆市药品检验所 重庆 400015
关键词：天乐口服液；橙皮苷；RP-HPLC
华西药学杂志990535 提要 采用RP-HPLC测定天乐口服液中橙皮苷的含量，以μ-Bondapak C18柱(10 μm，4.6 mm×250 mm)为固定相，2%甲醇的乙腈溶液-0.1% 磷酸和0.1%三乙胺的水溶液(20∶80)为流动相进行测定，紫外检测波长284 nm，平均回收率为99.95%，RSD=0.93%(n=6)。
QUANTITATIVE DETERMINATION OF HESPERIDIN IN
TIANLE ORAL LIQUID BY RP-HPLC
, http://www.100md.com
Zhan Shiqin Li Kaimin Zhou Shaofen
(Chongqing Institute for Drug Control Chongqing 410015)
ABSTRACT The content of hesperidin in Tianle oral liquid was determined by RP-HPLC. Hesperidin was separated by μ-Bondapack C18 colunm(10 μm, 4.6 mm×250 mm).The mobile phase consisted of 2% methanol acetonitrile-0.1% phosphoric acid and 0.1% triethylamine aqueous solution(20∶80). The detection was at 284 nm. The average recovery was 9.95%, RSD=0.93%(n=6).
, http://www.100md.com
Key Words Tianle oral liquid Hesperidin RP-HPLC
天乐口服液是由太子参、白术、陈皮等10味药材制成的复方制剂，具健脾开胃，消食导滞之功效，用于小儿脾胃虚弱、厌食等症。实验采用RP-HPLC测定天乐口服液中橙皮苷含量，操作简便，被测组分分离完全，测定结果准确、可靠。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
日本岛津LC-10AD高效液相色谱仪，SPD-10A紫外可见检测器，C-R3A数据处理机；岛津UV-260型可见紫外分光光度计；TGL-16B高速台式离心机。橙皮苷对照品(自制，含量99.52%)；乙腈(色谱纯，上海生化化工助剂厂)；其余化学试剂均为分析纯。
1.2 检测波长的选择
, http://www.100md.com
取橙皮苷对照品，用所选流动相作溶剂，制成适宜浓度，在200～400 nm波长范围内测定吸收光谱，橙皮苷在流动相中的最大吸收波长为284 nm。
1.3 色谱条件
经多次试验，选择μ-Bondapak C18柱(10μm,4.6 mm×250 mm，大连物化所)；以2%甲醇的乙腈溶液-0.1%磷酸和0.1%三乙胺的水溶液(20∶80)为流动相；流速1.2 ml/min；柱温40℃；检测波长284 nm。
在上述条件下由橙皮苷对照品，缺陈皮供试品(空白)、及天乐口服液供试品的色谱图(图1)可见，被测成分分离完全，供试品中共存组分不干扰橙皮苷的测定。
Fig 1 HPLC chromatogram of Tianle oral liquid
, http://www.100md.com
A Hesperidin B Blank C Tianle oral liquid
1.4 标准曲线测定
1.4.1 对照品溶液的配制 取橙皮苷对照品约10 mg，精密称定，置200 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用甲醇稀释成每1 ml中含6、12、18、24、30 μg橙皮苷对照品的溶液，经高速离心后即为对照品溶液。
1.4.2 标准曲线的测定 取不同浓度的对照品溶液，进样20 μl，记录色谱图。以峰面积与浓度绘制标准曲线，其回归方程为：
y=1897.9+38397.6x r=0.9999(n=6)。
结果表明，橙皮苷在6～30 μg/ml浓度范围内与峰面积有良好的线性关系。
, 百拇医药
1.5 回收率试验
分别取已测定含量的供试品6份，各加入一定量的橙皮苷标准溶液，按上述供试品的测定方法测定，计算加样回收率，结果见表1。
1.6 精密度考察
取橙皮苷对照品溶液20 μl，照上述色谱条件，按每次测定的峰面积值计算，测定结果为218090、217454、218173、219925、220323，平均峰面积值为218793，RSD=0.57%(n=5)。
Table 1 Results of recovery No.
Amount
Recovery
(%)
, 百拇医药
(%)
RSD
(%)
sample
(μg)
added
(μg)
found
(μg)
1
9.774
9.54
19.345
, 百拇医药
100.32
2
9.774
9.54
19.220
99.01
3
9.774
11.448
21.177
99.61
99.95
0.93
, http://www.100md.com
4
9.774
11.448
21.093
98.87
5
9.774
13.356
23.279
101.12
6
9.774
13.356
, 百拇医药
23.234
100.78
1.7 含量测定
1.7.1 供试品溶液的制备 精密量取供试品溶液1 ml，置50 ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，经高速离心即为供试品溶液。
1.7.2 分离测定 取供试品溶液，进样20 μl，在上述条件下测定，记录色谱图和橙皮苷峰面积，按回归方程或随行标准计算供试品中橙皮苷含量，结果见表2。Table 2 Determination results of samples Batch
No.
Amount of Hesperidin
(mg/100 ml)
, http://www.100md.com
RSD
(%)
1
54.60
54.45
54.19
54.08
54.33
0.44
2
50.35
51.07
51.15
, 百拇医药
51.25
50.96
0.80
3
48.77
49.25
48.86
48.61
48.87
0.56
4
48.74
48.28
, 百拇医药
49.24
49.24
48.87
0.56
5
54.54
54.67
54.15
54.15
54.33
0.61
2 小结
以上试验对检测条件、回收率及供试品的稀释液等进行了探索。用RP-HPLC测定天乐口服液中橙皮苷含量，操作简便，供试品中共存组分不干扰测定，结果准确可靠，可作为该制剂中橙皮苷的质量控制方法。
* 重庆天乐制药有限公司
参考文献
1 王宝 .中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994.399
2 欧阳强，邱黎和，周郗竹.高效液相色谱法测定枳实、枳术丸中橙皮苷的含量.中成药，1996，18(7)∶9
3 崔铉玫，迟彦春，金银河.HPLC测定芎芷香苏散流浸膏中橙皮苷的含量.药物分析杂志，1996，16(5)∶321, http://www.100md.com(作者：詹世琴 李开敏 周绍芬*)